期刊文献+
共找到34篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的克隆及低温下的表达分析 被引量:11
1
作者 耿卫东 李艳军 +2 位作者 张新宇 朱华国 孙杰 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1649-1656,共8页
根据棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosy lmethionine decarboxylase,SAMDC)基因已知EST序列设计引物,采用RACE和RT-PCR技术克隆获得该基因的全长cDNA序列,命名为GhSAMDC(GenBank登录号为JN020148)。生物信息学分析表明,GhSAMDCcDNA序... 根据棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosy lmethionine decarboxylase,SAMDC)基因已知EST序列设计引物,采用RACE和RT-PCR技术克隆获得该基因的全长cDNA序列,命名为GhSAMDC(GenBank登录号为JN020148)。生物信息学分析表明,GhSAMDCcDNA序列全长1874bp,涵盖tiny ORF(tORF)、upstream ORF(uORF)和main ORF(mORF)3个植物SAMDC基因特征ORF。其中mORF长1064bp,编码含355个氨基酸残基的SAMDC酶原,预测分子量为38.25kD,该酶原含有高度保守的酶原剪切位点结构域(LSESSLF)和与SAMDC蛋白快速降解有关的PEST(TIHVTPEDGFSYAS)结构域。GhSAMDC基因组DNA序列全长2743bp,包含3个内含子,均位于5'UTR,其中一个位于uORF内。聚类分析表明,GhSAMDC与葡萄中该蛋白的同源关系最近,并且与其他双子叶植物聚为一类。荧光定量PCR分析结果表明,GhSAMDC表达受低温诱导,在冷敏感品种新陆早1号中基因表达水平明显高于在耐冷品种新陆早33中。 展开更多
关键词 棉花 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 序列分析 定量PCR 低温表达
下载PDF
杜梨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量:11
2
作者 张梅 王然 +2 位作者 马春晖 段艳欣 李鼎立 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期82-87,共6页
以杜梨为试材,采用同源序列法和RACE技术对杜梨SAMDC基因进行了克隆,命名为PbSAMDC,GenBank登陆号为:JX624260。生物信息学分析表明,PbSAMDC基因全长1 683 bp,编码358个氨基酸,相对分子量为39.767 7kDa,等电点为4.96;其编码氨基酸同源... 以杜梨为试材,采用同源序列法和RACE技术对杜梨SAMDC基因进行了克隆,命名为PbSAMDC,GenBank登陆号为:JX624260。生物信息学分析表明,PbSAMDC基因全长1 683 bp,编码358个氨基酸,相对分子量为39.767 7kDa,等电点为4.96;其编码氨基酸同源性分析表明,PbSAMDC基因与MdSAMDC1同源性最高,达到96%,其次是葡萄、甜橙等,同时对该基因的生物活性等进行了讨论,研究对梨属植物SAMDC基因的逆境调控机制和抗逆基因工程育种具有重要意义。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 生物信息学
下载PDF
百脉根S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因克隆与表达分析 被引量:7
3
作者 路玉兰 孙艳香 +1 位作者 冯雪 赵学良 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期78-85,共8页
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC;EC 4.1.1.50)是多胺合成过程中的限速酶。以日本百脉根EST序列为基础,通过设计特异引物进行RT-PCR扩增,获得了S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶编码cDNA,命名为LcSAMDC1。LcSAMDC1基因组序列全长2 626 bp,存在3个内含子... S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC;EC 4.1.1.50)是多胺合成过程中的限速酶。以日本百脉根EST序列为基础,通过设计特异引物进行RT-PCR扩增,获得了S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶编码cDNA,命名为LcSAMDC1。LcSAMDC1基因组序列全长2 626 bp,存在3个内含子;cDNA序列全长1 799 bp,存在3个植物SAMDC基因特征性ORF,其中tORF编码2个氨基酸残基,sORF编码55个氨基酸残基,mORF编码354个氨基酸残基;mORF编码产物推断的分子量为38.6 kDa,具有2个高度保守的功能结构域(酶原剪切位点和PEST结构域);半定量RT-PCR分析显示,LcSAM-DC1在幼叶和根中具有高水平的表达,在茎中表达水平较低,而在成熟叶片中不表达。 展开更多
关键词 百脉根 多胺 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 LcSAMDC1
下载PDF
外源多胺对红椿S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因表达的调节作用 被引量:3
4
作者 杨硕知 刘球 +2 位作者 吴际友 李志辉 程勇 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期116-123,共8页
以2年生红椿家系盆栽幼苗为实验材料,开展了外源多胺对红椿干旱胁迫下TcSAMDC基因表达的修复效应研究。实验设置了轻度、中度和重度3种干旱胁迫梯度,干旱结束后,喷施了1 mmol/L的外源腐胺(Put)、亚精胺(Spd)及精胺(Spm)溶液作为修复处理... 以2年生红椿家系盆栽幼苗为实验材料,开展了外源多胺对红椿干旱胁迫下TcSAMDC基因表达的修复效应研究。实验设置了轻度、中度和重度3种干旱胁迫梯度,干旱结束后,喷施了1 mmol/L的外源腐胺(Put)、亚精胺(Spd)及精胺(Spm)溶液作为修复处理,旨在探索湖南本土珍贵树种红椿Toona ciliata在遭受季节性干旱胁迫后的生理变化以及有效修复措施。结果表明:1)成功克隆了红椿S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(Tc SAMDC)基因片段,测序得到一条532碱基对的DNA。2)外源Put、Spd和Spm溶液对不同程度干旱胁迫下红椿Tc SAMDC基因表达的修复效果都非常显著(α=0.01)。3)3种外源多胺在不同程度干旱胁迫下对红椿叶片的Tc SAMDC基因表达表现出不同的修复调节作用,其中以外源Spd效果最佳。因此,人为施加外源多胺能在很大程度上影响红椿TcSAMDC基因的表达,进而影响植株的干旱修复能力。采用人工喷施外源多胺诱导Tc SAMDC基因表达,于对抗干旱胁迫具有极强的实际操作意义。 展开更多
关键词 红椿 盆栽幼苗 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 外源多胺 基因表达 干旱胁迫 干旱修复效应
下载PDF
植物腺苷甲硫氨酸脱羧酶研究进展 被引量:16
5
作者 张佳景 丁淑丽 +2 位作者 邹宜静 程琳 卢钢 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第5期622-628,共7页
多胺对植物生长发育的调控以及生物或非生物逆境胁迫反应中起着重要的作用。腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)是植物体多胺生物合成途径中一个关键酶,催化腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)形成脱羧... 多胺对植物生长发育的调控以及生物或非生物逆境胁迫反应中起着重要的作用。腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)是植物体多胺生物合成途径中一个关键酶,催化腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)形成脱羧的SAM,为多胺生物合成提供氨丙基供体。现对植物中SAMDC的种类、SAMDC基因的特征以及功能研究现状进行了综述。 展开更多
关键词 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 多胺 生物学功能
下载PDF
条锈菌诱导上调表达的小麦腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因的克隆及其特征分析 被引量:2
6
作者 曾兴权 王长有 +4 位作者 张宏 韦泽秀 刘新伦 王亚娟 吉万全 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期811-818,共8页
为了克隆条锈菌诱导上调表达的小麦腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因并研究其在小麦感病、抗病单株苗期抗条锈病防御反应中的作用,以大麦(Hordeum vulgareL.)SAMDC全长cDNA序列为信息探针,采用电子克隆、RACE(Rapid amplification of cDNA... 为了克隆条锈菌诱导上调表达的小麦腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因并研究其在小麦感病、抗病单株苗期抗条锈病防御反应中的作用,以大麦(Hordeum vulgareL.)SAMDC全长cDNA序列为信息探针,采用电子克隆、RACE(Rapid amplification of cDNA ends)和RT-PCR方法,从条锈菌(Puccinia stri-iformisf.sp.tritici)CYR32侵染的小麦(Triticum aestivumL.)抗条锈病新种质NR1121中分离出1个新的小麦SAMDC基因家族成员,命名为TaSAMDC2(GU016570)。TaSAMDC2基因cDNA序列全长2 003 bp,5′非翻译区区域和一个带有Poly(A)的3′非翻译区区域长分别为553和283 bp;该基因的开放阅读框为1 167 bp,编码388个氨基酸,编码的氨基酸序列包含酶原剪切位点和PEST结构域。基因组序列全长2 539bp,位于5′UTR存在一个526 bp长的内含子序列,内含子的剪切位点均符合真核生物GT-AG规则。同源序列分析表明,TaSAMDC2与来自大麦、水稻(Oryza sativaL.)、玉米(Zea maysL.)、一粒小麦(TriticummonococcumL.)4种植物SAMDC蛋白的相似性分别为95.0%、85.0%、80.0%和80.0%。半定量RT-PCR与实时荧光定量PCR分析表明,TaSAMDC2的表达受条锈菌诱导,小麦苗期经条锈菌侵染后,在抗病材料中,该基因于48 hpi上调表达至最高水平,而在感病材料中先下调、上调表达至最高水平明显滞后。结果提示,分离到的是一个条锈菌CYR32诱导后上调表达的小麦SAMDC基因,该基因可能参与了小麦的抗条锈病反应。 展开更多
关键词 小麦 条锈菌 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 基因克隆 表达模式
下载PDF
刚毛柽柳腺苷甲硫氨酸脱羧酶(ThSAMDC)基因的克隆与胁迫下的表达分析 被引量:2
7
作者 张玉 张悦 +3 位作者 张春蕊 王艳敏 王玉成 王超 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期132-140,共9页
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosyl-L-methionine decarboxylase,SAMDC)是一种通过参与多胺的代谢途径来调节植物生理生化过程的限速酶。通过分析刚毛柽柳(Tamarix hispida)的转录组数据,获得并克隆了SAMDC基因的c DNA序列,将其命名为ThS... S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosyl-L-methionine decarboxylase,SAMDC)是一种通过参与多胺的代谢途径来调节植物生理生化过程的限速酶。通过分析刚毛柽柳(Tamarix hispida)的转录组数据,获得并克隆了SAMDC基因的c DNA序列,将其命名为ThSAMDC。该cDNA序列全长2 085 bp,包含tiny ORF(tORF)、upstream ORF(uORF)和main ORF(mORF)3个植物SAMDC基因特征ORF。主开放读码框(mORF)长1 107 bp,编码369个氨基酸多肽,相对分子质量为40.34 k D,理论等电点(PI)为4.72。Th SAMDC编码蛋白具有多个较强的亲水性区域,无明显跨膜区。通过与其他多个物种的氨基酸多序列比对结果表明,ThSAMDC具有两个典型的高度保守的结构域:酶原剪切位点(LSESSLF)与蛋白快速降解有关的PEST(TIHVTPEDGFSYAS)结构域。系统发育树结果表明ThSAMDC与菠菜(SoSAMDC)氨基酸序列一致性最高,为77%。实时荧光定量RT-PCR分析显示,ThSAMDC在NaCl、PEG、ABA、CdCl_2诱导表达均上调,预示着ThSAMDC可能在刚毛柽柳非生物胁迫应答过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 刚毛柽柳 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 胁迫响应 基因表达
下载PDF
鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用 被引量:4
8
作者 龚磊 姜春英 +3 位作者 张冰 胡海燕 王伟 刘贤锡 《中国现代普通外科进展》 CAS 2007年第1期21-25,共5页
目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)对大肠癌细胞生长的抑制作用,并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法:将Ad-ODC-AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29,通过MTS法观察其... 目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)对大肠癌细胞生长的抑制作用,并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法:将Ad-ODC-AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29,通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,采用Western blot检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白(Cyclin D1 and CDK4)的表达的影响,利用RT-PCR检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果:Ad-ODC-AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,并可明显抑制细胞的增殖,引起细胞周期Gl期阻滞,抑制G1期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达,并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期,从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖,为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基础。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 细胞周期蛋白D1 结直肠肿瘤
下载PDF
人鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体的构建
9
作者 张冰 刘贤锡 +3 位作者 姜春英 张岩 胡海燕 耿昭 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第5期387-390,395,共5页
目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)第三外显子和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)翻译起始位点双反义RNA腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法扩增出SAMDCmRNA翻译起始位点区205bp的基因片断。插入PMD-18T载体中,经XbaI、XhoI酶切回收,反向插入穿梭... 目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)第三外显子和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)翻译起始位点双反义RNA腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法扩增出SAMDCmRNA翻译起始位点区205bp的基因片断。插入PMD-18T载体中,经XbaI、XhoI酶切回收,反向插入穿梭质粒pAdTrack-CMV-ODCr,形成重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr。经PmeI酶切线性化后,转入Adeasy-1细菌与pAdeasy-1质粒发生同源重组。挑选阳性重组质粒pAdeasy-ODC-SAMDCr,经PacI酶切后,转染293细胞,包装出腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:利用RT-PCR方法成功地从大肠癌细胞扩增出205bp的cDNA片断,经测序证实为SAMDC翻译起始位点序列。测序证实,重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr两个基因插入方向和序列均正确,转入Adeasy-1细菌获得多个阳性重组克隆。pAdeasy-ODC-SAMDCr转染293细胞进行包装扩增,可见明显病毒空斑形成,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在293细胞中表达,PCR法证实含有目的基因。结论:成功构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体,为以后肿瘤的基因治疗和预防研究提供了必要工具。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 病毒载体 RNA 反义 病毒空斑
下载PDF
腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA抑制肺癌A-549细胞的实验研究
10
作者 孙启峰 田辉 +3 位作者 刘贤锡 张冰 张岩 孙东峰 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第8期757-761,766,共6页
目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义重组腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌A-549细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:采用FACS检测Ad-GFP感染细胞中GFP表达,以测定不同MOI的腺病... 目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义重组腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌A-549细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:采用FACS检测Ad-GFP感染细胞中GFP表达,以测定不同MOI的腺病毒对肺癌A-549细胞的基因转染效率;应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,并应用TUNEL标记检测法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌细胞凋亡的影响。结果:基因转染效率结果显示,以50 MOI的Ad-GFP感染肺癌细胞48 h后,大约有75%肺癌A-549细胞GFP表达阳性;Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖有明显抑制作用。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制肺癌细胞中ODC和AdoMetDC基因表达,基因抑制率大于60%(P<0.05)。HPLC结果显示,肺癌A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量都明显降低(P<0.05)。TUNEL标记检测结果证实,Ad-ODC-AdoMetDCas可引起肺癌A-549细胞明显凋亡。结论:ODC和AdoMetDC双反义腺病毒具有显著抑制肺癌增殖和侵袭的作用,对于肺癌的防治研究具有一定的意义,有望成为治疗肺癌的基因药物。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 多胺 肺肿瘤 基因治疗
下载PDF
枯草芽孢杆菌BJ3-2 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因speD的克隆与序列分析
11
作者 王亚娟 韩忠安 +1 位作者 罗信旭 吴拥军 《中国酿造》 CAS 北大核心 2015年第1期33-37,共5页
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成过程中的限速酶。根据Gen Bank中枯草芽孢杆菌168菌株的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(spe D)序列设计同源引物,PCR扩增Bacillus subtilis BJ3-2g DNA,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:B... S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成过程中的限速酶。根据Gen Bank中枯草芽孢杆菌168菌株的S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(spe D)序列设计同源引物,PCR扩增Bacillus subtilis BJ3-2g DNA,并克隆至p GEM-T载体后测序。序列分析结果表明:B.subtilis BJ3-2 spe D基因ORF为381 bp,可编码126个氨基酸,分子质量为13.87 ku,基因登录号为KJ561347,Blast比对,SAMDC基因和蛋白序列的同源性都达到90%以上。B.subtilis BJ3-2的SAMDC具有丙酮酸依赖型脱羧酶的酶原剪切结构域[GVSGVVIISESHLTIH]和保守结构域[TCG],属于典型的I类B型SAMDC家族。SAMDC在多胺生物合成过程中扮演重要的角色,是多胺合成途径中的关键酶。研究为控制发酵豆豉中生物胺含量奠定了基础。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 基因克隆 序列分析
下载PDF
异源表达棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(Gh SAMDC1)基因提高了拟南芥抗盐能力 被引量:2
12
作者 田文刚 朱雪峰 +3 位作者 宋雯 程文翰 薛飞 朱华国 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1017-1028,共12页
以转GhSAMDC1基因拟南芥研究了过量表达GhSAMDC1基因对拟南芥幼苗抗盐能力的影响,以及内源多胺、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、叶绿素含量(Chl)、离子渗透率、抗氧化酶(SOD、CAT、POD)活性和表达量在盐胁迫下的变化。结果表明,过量表达... 以转GhSAMDC1基因拟南芥研究了过量表达GhSAMDC1基因对拟南芥幼苗抗盐能力的影响,以及内源多胺、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、叶绿素含量(Chl)、离子渗透率、抗氧化酶(SOD、CAT、POD)活性和表达量在盐胁迫下的变化。结果表明,过量表达GhSAMDC1基因能够减少拟南芥内源腐胺(Put)含量,增加亚精胺(Spd)和精胺(Spm)含量。盐胁迫下,转基因株系亚精胺合酶(AtSPDS1、AtSPDS2)和精胺合酶(AtSPMS)基因表达量明显高于野生型,Spd和Spm含量进一步增加,H2O2、MDA、Chl以及离子渗透率显著降低;与野生型相比,过氧化物酶(POD)活力无明显差异,但超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力明显增加,其表达水平与活力变化趋势基本一致。因此,盐胁迫下,GhSAMDC1基因通过提高Spd和Spm合成相关基因的表达,增加了转基因株系Spd和Spm含量,Spd和Spm直接或间接提高抗氧化系统相关酶的活力,通过清除H2O2等活性氧的方式提高拟南芥的抗盐能力。 展开更多
关键词 拟南芥 棉花S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因 盐胁迫 抗氧化酶
下载PDF
斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因短片段缺失突变体的构建与鉴定 被引量:1
13
作者 张可 王小玉 +2 位作者 黄淑莹 夏佳敏 黄四洲 《成都医学院学报》 CAS 2022年第4期416-420,共5页
目的构建斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶(amd 1)突变体,并运用聚合酶链式反应(PCR)技术对突变的碱基位点设计特异性引物,以建立快速鉴定短片段缺失的方法。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼amd1突变体;运用整胚原位杂交技术分析AMD1在野生... 目的构建斑马鱼腺苷甲硫氨酸脱羧酶(amd 1)突变体,并运用聚合酶链式反应(PCR)技术对突变的碱基位点设计特异性引物,以建立快速鉴定短片段缺失的方法。方法利用CRISPR/Cas9系统构建斑马鱼amd1突变体;运用整胚原位杂交技术分析AMD1在野生型(WT)和amd1纯合子斑马鱼胚胎中的表达;根据突变体的突变位点设计鉴定引物,用PCR和琼脂糖凝胶电泳检测,并使用二代测序技术验证。结果斑马鱼amd1突变体构建成功;受精后24 h,在WT斑马鱼胚胎中AMD1主要在头部、眼睛、体节及内胚层区域表达,而在amd1纯合子斑马鱼胚胎中AMD1的表达明显降低。运用amd 1-screen-(3)-5′引物进行PCR时,在WT斑马鱼胚胎中可获正常条带;而在amd 1纯合子斑马鱼胚胎中未能获得相应条带。结论斑马鱼amd1突变体被成功构建;amd 1-screen-(3)-5′被确定为最佳鉴定引物。 展开更多
关键词 斑马鱼 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 短片段缺失 突变体 快速鉴定
下载PDF
高羊茅腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因FaSAMDC的克隆与差异表达分析 被引量:7
14
作者 王小利 刘晓霞 +2 位作者 王舒颖 杨义成 吴佳海 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期169-179,共11页
在进行高羊茅光敏色素C基因5′端克隆时,筛选到腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的5′端序列,根据5′端序列设计引物,扩增出该基因的3′端,拼接得到高羊茅腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因全序列,命名为FaSAMDC(GenBank登录号:HQ606139),利用实时荧光定... 在进行高羊茅光敏色素C基因5′端克隆时,筛选到腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的5′端序列,根据5′端序列设计引物,扩增出该基因的3′端,拼接得到高羊茅腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因全序列,命名为FaSAMDC(GenBank登录号:HQ606139),利用实时荧光定量PCR技术研究FaSAMDC基因在长日照与短日照条件下昼夜24 h的表达差异,为进一步揭示不同光周期调控FaSAMDC基因的表达奠定理论基础。FaSAMDC的cDNA全长1 964 bp,具有微型上游阅读框、小型上游阅读框和主阅读框3个开放阅读框,分别位于226-234,234-380和555-1 742 bp,微型上游阅读框和小型上游阅读框存在1个碱基重叠,主阅读框编码395个氨基酸,含有保守功能域:酶原剪切位点功能域和SAMDC蛋白快速降解有关的PEST功能域。对编码蛋白氨基酸序列的同源性分析表明,FaSAMDC与其他单子叶植物SAMDC蛋白的亲缘关系较近。在长日照和短日照处理条件下,FaSAMDC都具有3个表达峰。短日照处理条件下的表达峰比长日照处理条件下的表达峰早几个小时,但峰高低于长日照条件。由此说明,FaSAMDC基因的表达受光周期调控,与生物钟控制的昼夜节律有关。 展开更多
关键词 高羊茅 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因 克隆 表达分析
下载PDF
胡萝卜S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶SAMDC基因的克隆及其对非生物胁迫的响应 被引量:5
15
作者 王广龙 却枫 +3 位作者 陈伯清 任旭琴 王纪忠 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期413-421,共9页
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶是多胺生物合成过程中的关键酶,对于植物生长发育和抵御逆境胁迫等过程具有重要作用。本研究利用RT-PCR方法从胡萝卜品种‘黑田五寸’中克隆得到一个编码S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的基因Dc SAMDC。序列分析显示,该基因... S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶是多胺生物合成过程中的关键酶,对于植物生长发育和抵御逆境胁迫等过程具有重要作用。本研究利用RT-PCR方法从胡萝卜品种‘黑田五寸’中克隆得到一个编码S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶的基因Dc SAMDC。序列分析显示,该基因包含一个全长1 086 bp的开放阅读框,编码361个氨基酸。预测其蛋白质相对分子质量为40.16 kDa,理论等电点为4.89。胡萝卜S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶具有高度保守的酶原剪切位点和PEST结构域。进化分析表明,胡萝卜SAMDC与葡萄的进化关系最为接近。荧光定量PCR分析显示,胡萝卜Dc SAMDC基因在叶片和根中的表达水平较高,对高温(38oC)、低温(4oC)、模拟干旱(200 g·L^(-1) PEG)和盐渍(200 g·L^(-1) Na Cl)胁迫有响应,并且,响应的时间较为迅速,在胁迫1~4 h后表达水平升至最高。本研究结果表明,Dc SAMDC基因可能在胡萝卜抵御非生物胁迫的过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 克隆 序列分析 非生物胁迫 表达分析 胡萝卜
原文传递
红麻S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因克隆与序列分析 被引量:3
16
作者 张高阳 邓接楼 +5 位作者 黄思齐 刘伟成 郑亮 李德芳 陈芳旭 祁建民 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2284-2289,共6页
多胺是植物体内参与生长发育及各种逆境胁迫响应的一类重要化合物,其合成过程受多个基因的共同调控,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因参与多胺的合成过程并发挥关键作用,为研究该基因在红麻(Hibiscu... 多胺是植物体内参与生长发育及各种逆境胁迫响应的一类重要化合物,其合成过程受多个基因的共同调控,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因参与多胺的合成过程并发挥关键作用,为研究该基因在红麻(Hibiscus cannabinus L.)抗旱和耐盐过程中的作用,通过红麻转录组数据库筛选到SAMDC基因的核心片段,利用染色体步移技术获得了SAMDC基因c DNA全长,命名为Hc SAMDC,生物信息学分析表明:Hc SAMDC基因编码序列长1 137 bp,编码378个氨基酸,相对分子量为41.8 k D,等电点为4.86。红麻Hc SAMDC与其它植物的SAMDC同源性较高,其中与可可树氨基酸相似性为78%、与棉花SAMDC的氨基酸相似性为82%,该研究对下一步分析该基因功能、阐明麻类SAMDC基因的逆境调控机制和抗逆基因工程育种具有重要意义。 展开更多
关键词 红麻 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 染色体步移 抗旱
原文传递
鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的研究 被引量:1
17
作者 孙东峰 田辉 +3 位作者 刘贤锡 张冰 张岩 孙启峰 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期61-64,共4页
目的探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用。方法采用活细胞计数法观察Ad... 目的探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用。方法采用活细胞计数法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响,采用Western印迹法和高效液相色谱分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及细胞内多胺含量,采用活细胞计数法和流式细胞仪分别检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas对A-549细胞增殖和细胞周期分布的影响,应用Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌细胞侵袭活性的改变。结果当感染效率为50时,腺病毒对A-549细胞的感染率约75%。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制A-549细胞ODC和AdoMetDC的表达。A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内多胺含量明显降低。感染Ad-ODC-AdoMetDCas的A-549细胞停滞在G1期。Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低A-549细胞的体外侵袭能力。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒能够显著抑制肺癌A-549细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 肺肿瘤
原文传递
人腺苷甲硫氨酸脱羧酶的原核表达及纯化
18
作者 张军 韩钰 +3 位作者 蔡富强 秦烨 夏燕 王艳林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期144-147,共4页
目的克隆人腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)cDNA,原核表达并纯化重组AdoMetDC蛋白。方法采用巢式RT-PCR法从人宫颈癌HeLa细胞株总RNA中克隆人AdoMetDC cDNA,插入载体pET-15b中,构建原核表达质粒pET-15... 目的克隆人腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)cDNA,原核表达并纯化重组AdoMetDC蛋白。方法采用巢式RT-PCR法从人宫颈癌HeLa细胞株总RNA中克隆人AdoMetDC cDNA,插入载体pET-15b中,构建原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC,转化大肠杆菌Rossetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白在尿素变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot法鉴定纯化的重组AdoMetDC蛋白。结果克隆出编码全长人AdoMetDC的cDNA序列,并构建了重组原核表达质粒pET-15b/AdoMetDC;表达的重组AdoMetDC蛋白经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约35 000、30 000、14 000的前酶、自催化分裂后的α亚单位和β亚单位;前酶和β亚单位可被Ni-NTA树脂有效纯化;纯化的重组蛋白可被抗His抗体和抗AdoMetDC抗体特异性识别。结论原核表达并纯化了人AdoMetDC,为其功能研究和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 腺苷甲硫氨酸脱羧酶 原核细胞 基因表达 蛋白纯化
原文传递
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的研究 被引量:1
19
作者 辛佳璇 陈世敏 +4 位作者 王伟 阎云飞 徐春晓 刘斌 刘贤锡 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第12期66-69,73,共5页
目的探讨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDCshRNA表达载体(pGPU6-SAMDC)转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western-blot技术... 目的探讨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDCshRNA表达载体(pGPU6-SAMDC)转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验(CCK-8法)和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭活性的影响。结果SAMDCsh RNA表达载体转染后,MCF-7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8%,蛋白表达水平下降66.5%;MCF-7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。 展开更多
关键词 肿瘤 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 RNA干扰 基因治疗
原文传递
S-腺苷甲硫氨酸代谢途径相关基因在小麦水分胁迫中的表达 被引量:9
20
作者 李昌澎 周琳璘 +4 位作者 陈亮 黄林周 陈晓杰 王宇珅 胡银岗 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1120-1126,共7页
以小麦品种‘晋麦47’为材料,利用半定量RT-PCR方法,对S-腺苷甲硫氨酸代谢途径中的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(-γECS)基因在正常供水、PEG-6000模拟水分胁迫和... 以小麦品种‘晋麦47’为材料,利用半定量RT-PCR方法,对S-腺苷甲硫氨酸代谢途径中的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(-γECS)基因在正常供水、PEG-6000模拟水分胁迫和复水过程中小麦叶片的表达模式进行了分析。结果表明,3个基因在正常生长情况下有一定量的表达,SAMS和SAMDC基因在水分胁迫早期(PEG-6000胁迫6、12、244、8 h)上调表达,水分胁迫后期(PEG-6000胁迫75 h)表达量下降;复水后3~6 h上调表达,复水9 h后表达量下调至对照水平。-γECS基因在水分胁迫阶段呈上调表达,复水后表达量下调至对照水平。可见,小麦SAMS、SAMDC和-γECS基因的表达都受水分胁迫诱导,同时,SAMS与SAMDC基因还参与水分胁迫后的复水调节,说明S-腺苷甲硫氨酸代谢途径在小麦抗旱节水中具有重要作用。 展开更多
关键词 小麦 水分胁迫 S-甲硫氨酸代谢途径 表达模式 S-甲硫氨酸合成酶(SAMS) S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC) γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(-γECS)
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部