白藜芦醇调控腺苷酸活化蛋白激酶-内皮型一氧化氮合酶信号通路促进大鼠心肌微血管内皮细胞的血管生成

目的观察不同浓度白藜芦醇(Res)对体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs)血管生成的影响,并探讨可能机制。方法植块法培养并鉴定大鼠的MMVECs,取第2代细胞。先采用0、1、5、10、50、100、120μmol/L Res干预MMVECs(分别为Res 0、1、5、10、15、100、120组)。后又分为4组:对照组,未予Res和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C);Res组,予100μmol/L Res干预MMVECs;Res+comp C组,先予Compound C 20μmol/L预处理MMVECs 40min后,再予Res 100μmol/L;comp C组,予Compound C 20μmol/L干预MMVECs。观察其对MMVECs的增殖、迁移和体外管腔样结构形成能力的影响。采用Western印迹法测定磷酸化AMPK(p-AMPK)/总的AMPK(T-AMPK)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(peNOS)/总的内皮型一氧化氮合酶(T-eNOS)比值。结果干预MMVECs 24h时,Res1、5、10、50、100组间增殖能力的差异均有统计学意义(P值均<0.05),呈剂量依赖性增强,以Res 100组最高。Res5、10、50、100、120组干预MMVECs后的迁移细胞数、体外管腔形成数均显著多于Res 0、1组(P值均<0.05),且呈剂量依赖性。Res 0、1、5、10、50、100、120组Res干预MMVECs后p-eNOS/T-eNOS、p-AMPK/T-AMPK比值逐渐升高,呈剂量依赖性,以Res 100组最高(P值均<0.05)。Res组的迁移细胞数、管腔形成数、p-eNOS/T-eNOS和pAMPK/T-AMPK比值均显著高于对照组、Res+comp C组和comp C组(P值均<0.05),comp C组均显著低于Res+comp C组(P值均<0.05)。结论不同浓度Res干预MMVECs后,呈剂量依赖性促进了内皮细胞的血管生成,且在浓度为100μmol/L时作用最显著,这一生物效应很有可能是通过促进AMPK和eNOS的磷酸化来实现的。

基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路,浅谈中医药治疗慢传输型便秘的研究进展

慢传输型便秘(Slow Transit Constipation,STC)是一种慢性功能性肠病,其主要特征为结肠传导动力不足,结肠传输速度缓慢,致肠内容物排出时间延长,淤积于肠道,不能顺畅排出体外。STC的病因及发病的机制复杂,目前尚无统一定论,大多数观点认为STC的病因及发病机制与Cajal间质细胞功能异常、水通道蛋白异常表达、肠神经功能病变、胃肠神经递质的异常分泌、肠道微生态紊乱及精神心理障碍等有关。近年来,细胞信号转导通路的异常改变,导致细胞信号转导通路下游的相关分子及蛋白的异常表达导致STC的发病,逐渐引起广大临床学者的关注。基于细胞信号转导通路,探讨STC的研究逐渐增多。大量研究表明,中医药治疗STC具有层次多、靶点丰富且通路广泛的优势,并且临床疗效显著。其中的机制也引起广大临床研究者的好奇。磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)细胞信号转导通路是近年来中医药治疗STC研究的热点通路之一。故文章基于PI3K/Akt/eNOS细胞信号转导通路,探讨中医药治疗STC的研究进展,以期为厘清STC的病因及发病机制提供些许理论支撑,为中医药治疗STC提供现代理论支持,为后期开展更深层次的STC的研究作铺垫。

内皮型一氧化氮合酶与心肌缺血再灌注损伤的关系研究进展

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)调控机制和信号通路,其不仅在内皮细胞中表达,也在心肌细胞、肥大细胞、肾上皮细胞、红细胞、白细胞和血小板中表达;eNOS既可以合成NO,扩张血管,也可以合成超氧化物,加剧氧化应激。在MIRI中抑制eNOS解偶联和增加其有益磷酸化,可保护血管内皮功能、抑制氧化应激、逆转凋亡和减轻炎症反应等;eNOS可通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/eNOS、沉默信息调节剂1/eNOS、腺苷单磷酸活化蛋白激酶/eNOS/一氧化氮等信号通路在MIRI中发挥重要作用。

白藜芦醇通过激活腺苷酸活化蛋白激酶预防酒精性心肌病

目的探索白藜芦醇对酒精性心肌病的作用及其分子机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、酒精组和酒精+白藜芦醇组,每组10只,干预6个月后采用介入生理记录仪检测大鼠的心功能,采用常规石蜡切片和HE染色法评估心脏结构改变,采用免疫印迹法检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶及其磷酸化蛋白的表达,并运用硝酸还原酶法检测心肌组织中一氧化氮水平。结果 6个月酒精摄入可显著损害大鼠的心功能和心肌显微结构,添加白藜芦醇能显著削弱酒精对心脏功能和结构的损害作用。酒精摄入可显著降低心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并降低一氧化氮水平,而添加白藜芦醇能显著增加腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并增加心肌组织中一氧化氮水平。结论白藜芦醇能通过激活腺苷酸活化蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶系统和增加一氧化氮水平来预防酒精性心肌病。

腺苷酸环化酶及蛋白激酶A在β受体激动增加eNOS活性信号通路中的作用

目的阐明β受体激动增加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性信号通路中腺苷酸环化酶(AC)及蛋白激酶A(PKA)的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞;运用同位素两步色谱法([3H]-L-精氨酸转化法)检测eNOS活性。本研究设置空白对照组、AC组和PKA组,每组因素下再分ISO及BSS两个干预因素组,观察AC特异性阻断剂SQ-2256(5×10-5mol/L)及PKA特异性阻断剂H-89(1×10-7mol/L)分别与人脐静脉内皮细胞孵育10min,再与异丙肾上腺素(ISO)孵育30min后eNOS活性变化。结果ISO明显增加eNOS活性(30.7±3.9)%,P<0.01;分别阻断AC、PKA,ISO诱导的eNOS活性增加均受到抑制(12.1±3.53)%、(4.73±2.19)%,P<0.01。结论ISO激活eNOS活性的信号通路上,AC和PKA均有参与。

黄芪多糖通过活化AMPK-eNOS信号通路减轻游离脂肪酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:研究黄芪多糖对游离脂肪酸所诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),实验分为正常对照组、黄芪多糖组[黄芪多糖(200 mg/L)处理24 h]、游离脂肪酸组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)共同处理24 h]、游离脂肪酸加黄芪多糖组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)和黄芪多糖(200 mg/L)共同处理24 h]和compound C组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)、黄芪多糖(200 mg/L)及AMPK阻断剂compound C(10μmol/L)处理24 h]。采用MTT法检测细胞活性,硝酸还原酶法测定培养液中一氧化氮(NO)含量,Western blot法测细胞总腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-e NOS)的蛋白水平。结果:黄芪多糖组各项指标较正常对照组无显著差异。MTT结果显示游离脂肪酸组的细胞活性较正常对照组明显下降,游离脂肪酸加黄芪多糖组的细胞活性较游离脂肪酸组明显好转,compound C组的细胞活性与游离脂肪酸组无显著差异。游离脂肪酸组的NO含量及p-AMPK、p-e NOS水平较对照组明显减少,黄芪多糖能显著抑制游离脂肪酸所致的NO含量及p-AMPK、p-e NOS水平的减少,compound C则可阻断黄芪多糖的作用。各组AMPK及e NOS表达均无明显差异。结论:黄芪多糖可以减轻游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞损伤,其机制与AMPK-e NOS信号通路有关。

秋水仙碱通过激动PI3K/AKT/eNOS信号通路对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探究秋水仙碱通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响。方法:78只大鼠中随机选取12只作为假手术组,剩余大鼠构建AMI模型,造模成功大鼠分为模型组、秋水仙碱组[4 mg/(kg·d)]、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+LY294002(20 mg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+MK-2206(60μg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+L-NAME(1.6 mg/mL)组,每组12只。超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)。处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠心肌组织石蜡切片病理学变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)水平;免疫印迹法(Western Blot)测定大鼠心肌组织PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS降低(P<0.05);与模型组相比,秋水仙碱组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率降低,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与秋水仙碱组相比,秋水仙碱+LY294002组、秋水仙碱+MK-2206组、秋水仙碱+L-NAME组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。结论:秋水仙碱可能通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路对AMI大鼠发挥心功能保护作用。

MAPK信号途径在一氧化氮抑制大鼠心肌肥大中的作用

实验观察了一氧化氮 (NO)前体L 精氨酸对肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量、MKP 1蛋白表达及MAPK活性的影响 ,以及与心肌肥厚的关系。采用两肾一夹Goldblatt肾性高血压模型 ,随机分为 5组 :L 精氨酸高、中、低剂量组 ,分别于术后第 5周给予L 精氨酸 5 0、15 0及 45 0mg/kg;L NAME组 ,腹腔注射L NAME 10mg/kg,同时给予L 精氨酸 15 0mg/kg ;高血压对照组 ,正常饮水 ,以及另设的一假手术对照组。用药 8周后 ,用插管法测量大鼠动脉血压、左心室重与体重比值 ,用胶内原位磷酸化法测MAPK活性、免疫印迹法检测心肌组织eNOS及MKP 1蛋白表达、酶还原法测定心肌组织亚硝酸盐 /硝酸盐含量。结果表明 :(1)L 精氨酸可明显抑制肾动脉狭窄术后的血压升高、左心室重与体重比增加 ,增加心肌组织eNOS、MKP 1蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量 ,降低心肌组织MAPK活性 ,其中以 15 0mg/kg组作用最为明显 ;(2 )NOS抑制剂L NAME可明显抑制L 精氨酸的以上作用。肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达下降。NO生成减少及MKP 1蛋白表达下降以及MAPK活性增强可能与高血压及心肌肥厚形成有关 ,L 精氨酸通过促进心肌组织eNOS蛋白表达、增加NO产生和MKP 1表达。

化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号通路及血管活性肽的影响

目的:研究化瘀通便汤对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路及血管活性肽(VIP)的影响,探讨该方药对慢传输型便秘大鼠的治疗机制。方法:90只大鼠随机抽取15只为正常组,其余75只按复方地芬诺酯灌胃造模法制造慢传输型便秘模型,根据简单随机抽样方法分为5组(模型组、化瘀通便汤低剂量组、化瘀通便汤中剂量组、化瘀通便汤高剂量组、麻仁软胶囊组),每组15只。化瘀通便汤低、中、高剂量组分别予化瘀通便汤24 g/(kg·d)、48 g/(kg·d)、96 g/(kg·d)灌胃。麻仁软胶囊组用常温蒸馏水调配麻仁软胶囊至2.4 g/mL,灌胃量为20 mL/(kg·d)。模型组与正常组均与等量常温蒸馏水进行灌胃,日1次。各组干预2周后,检测大鼠首次排黑便时间、粪便含水率及结肠组织磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)阳性细胞、VIP、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)水平。结果:与模型组比较,化瘀通便汤各组及麻仁软胶囊组均能缩短大鼠首次排黑便时间,增加大鼠粪便含水率,提高大鼠结肠组织P-Akt含量、P-Akt阳性细胞水平,降低VIP的表达,降低结肠组织中NO及eNOS的含量(P<0.05);与麻仁软胶囊组比较,化瘀通便汤低剂量组与麻仁软胶囊组相近(P>0.05),化瘀通便汤中、高剂量组明显优于麻仁软胶囊组(P<0.05)。结论:化瘀通便汤可通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路及VIP表达,对慢传输型便秘大鼠起治疗作用。

小檗碱活化AMPK-eNOS减轻油酸所致人主动脉内皮细胞损伤

目的:考察小檗碱对油酸所致内皮细胞损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:以体外培养人主动脉内皮细胞系(human aorta endothelial cells,HAEC)为受试对象;分别以油酸、油酸联合小檗碱、油酸联合单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)激活剂(AICAR)或抑制剂(Compound C)处理HAEC;采用油红O染色法观察细胞内脂滴合成;采用比色法检测细胞内甘油三酯、总胆固醇含量,硝酸还原酶法检测NO的水平,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐探针检测细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western Blotting检测细胞总AMPK、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及其磷酸化(p-AMPK、p-eNOS)水平。结果:油酸可浓度依赖性地抑制细胞增殖,小檗碱组各项指标较正常对照组无显著性差异,油酸联合小檗碱组的细胞活性较油酸组明显好转(P<0.01)。与正常对照组比较,油酸组的脂质浸润程度明显,油酸在不同浓度下使内皮细胞的脂质含量呈剂量依赖性增加,加入小檗碱可明显减少这种脂质堆积。油酸组的NO水平较正常对照组明显减少,小檗碱能显著抑制油酸所致的内皮NO水平的减少,并且减少由于油酸所致的ROS水平的升高;油酸抑制了AMPK的活化,使p-AMPK和p-eNOS的蛋白水平明显降低(P<0.01);小檗碱可明显逆转油酸所致AMPK和eNOS磷酸化水平下降,Compound C可拮抗其作用。结论:小檗碱可减轻油酸所致血管内皮细胞损伤,或与其活化AMPK/eNOS信号相关。

基于Akt/eNOS通路探讨延胡索乙素对缺氧/复氧诱导的心脏微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨延胡索乙素对缺氧(H)/复氧(R)诱导的大鼠心脏微血管内皮细胞(CMECs)损伤的影响及其机制。方法 实验分为正常对照组、模型组、溶媒对照组、延胡索乙素低剂量组、延胡索乙素中剂量组、延胡索乙素高剂量组、延胡索乙素高剂量+蛋白激酶B(Akt)抑制剂组。按试剂盒要求检测CMECs乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,流式细胞术检测CMECs凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测CMECs中Akt、磷酸化(p)-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p-eNOS、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3、活化的Caspase-3(C-Caspase-3)蛋白水平。结果 当延胡索乙素浓度为80μg/mL时,H/R大鼠CMECs存活率最高。与正常对照组相比,模型组CMECs LDH、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、Caspase-3活性、CMECs凋亡率、Bax、C-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均升高,SOD水平、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS和Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05);经低剂量、中剂量、高剂量延胡索乙素作用后,大鼠CMECs LDH、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、Caspase-3活性、CMECs凋亡率、Bax、C-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),而SOD水平、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS和Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且呈延胡索乙素剂量依赖性;给予Akt抑制剂作用后,高剂量延胡索乙素对H/R诱导的大鼠CMECs上述作用逆转(P<0.05)。结论 延胡索乙素可保护H/R诱导的大鼠CMECs损伤,可能与激活Akt/eNOS通路有关。

Z-没药甾酮通过激活PI3K/AKT/eNOS通路发挥脑微血管内皮细胞保护作用

目的:探讨Z-没药甾酮(Z-GS)对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及药理机制。方法:脑微血管内皮细胞制作氧糖剥夺模型体外模拟缺血性脑卒中,培养的脑微血管内皮细胞分为对照组、模型组、 Z-GS低、中、高(12.5,25,50μmol·L^(-1))剂量组。给药组细胞在OGD造模前分别给予不同剂量的Z-GS处理。在机制研究中,50μmol·L^(-1) Z-GS+抑制剂组在造模给药前加入PI3K抑制剂LY294002。试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放和血管活性物质水平;免疫印迹分析磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及磷酸化水平;LY294002用于特异性抑制PI3K表达。结果:Z-GS给药可提高细胞活力、降低LDH释放。同时Z-GS可通过降低内皮素-1和血栓素B2水平、升高血栓调节蛋白和6-酮-前列环素1α水平缓解血瘀。机制研究表明,Z-GS给药可激活PI3K/AKT/eNOS通路,增加一氧化氮(NO)的生成。而在LY294002特异性抑制PI3K后,Z-GS对该通路的调控作用消失。结论:Z-GS可通过调控血管活性物质发挥血管内皮保护作用,其机制与激活PI3K/AKT/eNOS通路,进而促进NO的生成有关。

天香丹胶囊预处理激活ERα介导的AKT/eNOS通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤的实验研究

目的:观察天香丹(TXD)胶囊通过雌激素受体(ER)α介导的蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将70只SD雌性大鼠随机分为正常对照组(Control组,10只)和去卵巢组(OVX组,60只),OVX组摘除双侧卵巢。将OVX组分为假手术组(Sham组)、模型组(MIRI组)及雌二醇组(OVX+MIRI-E2组,0.8 mg/kg)、OVX+MIRI-TXD高剂量组(0.6 g/kg)、OVX+MIRI-TXD中剂量组(0.4 g/kg)、OVX+MIRI-TXD低剂量组(0.2 g/kg),每组10只,连续灌胃给药60 d。通过结扎心脏冠状动脉左前降支30 min后再灌注60 min方法建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。记录各组大鼠心脏血流动力学指标;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化,微量法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织雌激素受体ERα、AKT蛋白磷酸化水平、eNOS磷酸化水平。结果:与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组及OVX+MIRI-TXD各剂量组大鼠心脏血流动力学指标、心肌组织形态结构改善,血清LDH、CK和MDA含量降低,NO、SOD和ERα蛋白含量升高,抗氧化能力、AKT和eNOS磷酸化水平增强(P<0.05)。结论:TXD胶囊预处理可减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与激活ERα介导的AKT/eNOS信号通路、增加内源性NO释放、舒张血管、减轻心脏负荷和心肌需氧量、对心肌缺血的保护作用有关。

AMPK在内皮细胞中对血管形成的影响

在真核细胞中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞及全身能量稳态的一个重要调节器,受体内AMP/ATP比率调节,通常被称为代谢敏感性激酶。新近的研究发现,AMPK的激活参与了许多细胞(如骨骼肌细胞、内皮细胞)的分化、迁移和管腔形成。该文就AMPK在血管生成这一生物效应中的显像和作用机制予以综述。

尿石素A改善高糖致血管内皮损伤的作用与机制

目的探讨尿石素A(urolithin A,UA)对高糖所致的内皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为正常组(5.5 mmol葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol葡萄糖)、高糖+UA处理组、高糖+UA+Compound C处理组。分别检测了细胞存活及细胞的一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素(endothelin-1,ET-1)浓度。通过二氢乙锭荧光探针染色和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分析细胞氧化应激水平。采用Western blot进一步分析了细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化水平。结果与高糖对照组相比,UA干预使内皮细胞的存活升高(P<0.05);SOD活性升高(P<0.05),活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平降低(P<0.05);NO分泌增高及ET-1浓度降低(P<0.05);明显上调AMPK和eNOS磷酸化水平(P<0.05),差异有统计学意义。而在AMPK抑制剂Compound C处理后UA对内皮细胞的上述作用被逆转。结论 UA通过激活AMPK/eNOS通路,抑制高糖介导的血管内皮氧化应激,改善内皮功能障碍。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉TNF-α、p38MAPK及eNOS蛋白表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法将58只普通级新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组和西药组。通过高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤术+基因转染+触发斑块破裂建立AS易损斑块兔模型。直接灸组和隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”或双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,每日1次,连续8周。ELISA检测兔血清载脂蛋白A(apo-A)、载脂蛋白B(apo-B)含量,透射电镜观察腹主动脉超微结构,免疫组化法检测腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK、eNOS蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清apo-A含量显著减少(P<0.01),apo-B含量显著增加(P<0.01),腹主动脉血管壁严重破坏,有大量泡沫细胞聚集和脂滴沉积,TNF-α、p38MAPK蛋白表达显著升高(Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著降低(Ρ<0.01);与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和西药组兔血清apo-A含量显著增加(P<0.05,P<0.01),apo-B含量显著减少(P<0.05,P<0.01),直接灸组兔腹主动脉内皮细胞损伤,脂滴散在分布于泡沫池中,隔药饼灸组及西药组兔腹主动脉内皮细胞损伤程度较轻,各干预组兔腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK蛋白表达均显著降低(Ρ<0.05,Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量显减少(P<0.01),腹主动脉组织TNF-α蛋白表达显著降低(Ρ<0.05),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与西药组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量明显减少(P<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制TNF-α、p38MAPK蛋白表达,促进eNOS蛋白表达,保护血管内皮功能,稳定AS易损斑块。

心痛泰抑制动脉粥样硬化兔炎症反应的作用机理研究

目的观察心痛泰对动脉粥样硬化兔Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、髓过氧化物酶(MPO)、Ras基因家族成员A(Rho A)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响,探讨心痛泰治疗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法采用高脂饲料喂养联合免疫损伤建立兔动脉粥样硬化模型,分别予生理盐水、瑞舒伐他汀、心痛泰高、中、低剂量进行干预,采用Western blotting、RT-PCR检测胸主动脉TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A、e NOS蛋白及m RNA的表达水平。结果与空白组比较,模型组TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA的表达均升高,e NOS蛋白、m RNA的表达降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,心痛泰低剂量组MPO蛋白、MPO m RNA、Rho A蛋白、m RNA、p38MAPK m RNA表达均降低,e NOS蛋白、e NOS m RNA表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,心痛泰中剂量组p38MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA及TLR4 m RNA表达均降低,e NOS蛋白、m RNA表达均升高,差异有显著统计学意义(P<0.05);与模型组比较,心痛泰高剂量组TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA的表达均降低,e NOS蛋白、e NOS m RNA的表达均上升,差异有显著统计学意义(P<0.01);阳性组与心痛泰高剂量组比较,TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A、e NOS蛋白及其m RNA的表达虽有差异,但均无统计学意义(P>0.05)。结论心痛泰可能通过降低TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白及其m RNA的表达,上调e NOS蛋白、e NOS m RNA的表达,抑制血管内炎症,保护主动脉血管内皮,达到治疗动脉粥样硬化的目的 。

MAPK在eNOS基因转染对心肌梗死后心脏保护中的作用

目的:eNOS及NO在心肌梗死后减轻心脏重塑和细胞凋亡方面发挥着重要作用,然而,eNOS的抗炎作用、MAPK在eNOS/NO介导的心脏重塑作用仍不清楚。方法:采用Wistar大鼠,实验分为24h组和7天组,分别观察eNOS基因转染对心肌梗死后炎症、信号通道蛋白表达、心脏功能和心室重塑的影响。心肌梗死前4天通过心脏表面注射进行局部eNOS基因转染,通过免疫组化和测定NO的产量观察eNOS基因的转染情况;采用颈动脉插管法测定心脏功能;采用Masson染色检测心肌梗死面积;免疫组化检测ED-1表达观察炎症情况。采用Westernblot法检测eNOS基因转染对心肌MAPKs信号通道蛋白表达的影响。结果:研究发现eNOS基因转染后,eNOS表达明显增加,NO生成明显提高,与MI对照组及Ad.Null组比较[(0.42±0.09)vs(0.18±0.06)or(0.16±0.05)nmol/mg,n=7,P<0.01]。与MI组及Ad.Null组比较,eNOS基因转染能明显减少心肌梗死后ED-1的表达、心肌梗死面积[(22.5±2.8%)vs(46.4±2.9%)or(43.5±3.3%),n=7,P<0.01],心脏功能明显改善。P38MAPK、JNK表达明显减少。结论:与其他实验组比较,eNOS基因转染后心肌梗死导致的炎症明显减轻、心肌梗死面积明显减少、心脏功能明显改善,eNOS基因对心脏的保护作用可能与抑制P38MAPK、JNK的表达有关。eNOS的这种心脏保护作用可以被L-NAME所阻断。

丙泊酚对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2的影响

目的观察丙泊酚对野百合碱（MCT）诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2（ACE2）的影响，并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将32只SD大鼠平均分为4组（n＝8）：对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋Mas抑制剂A779组，后3组腹腔注射60 mg/kg MCT（对照组注射等量生理盐水）诱导后，后两组每日分别持续注射丙泊酚10 μmol/L、丙泊酚10 μmol/L和A779（浓度为2 mg/ml），前两组注入等量生理盐水；4周后测量大鼠平均肺动脉压（mPAP），肺组织苏木素-伊红（HE）染色分析肺动脉中膜厚度指数（WT）及肺小动脉梗阻程度；Western blot检测肺组织内ACE2、Mas、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）表达水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织内血管紧张素1-7[Ang-（1-7）]水平；硝酸还原酶法检测肺组织内一氧化氮（NO）浓度。结果对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠的mPAP分别为（11.37±2.17）、（32.43±4.22）、（15.82±2.12）、（18.13±2.31） mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），WT分别为（15.63±11.12）%、（78.01±17.40）%、（22.64±12.95）%、（63.67±16.43）%。与对照组比较，丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠mPAP稍升高（P＝0.001，P＝0.005），而MCT组显著升高（P＝0.000）；对照组肺动脉血管无明显狭窄、MCT组管腔基本闭塞、丙泊酚组管腔基本正常、丙泊酚＋A779组管腔明显增生；与MCT组比较，对照组、丙泊酚组大鼠WT显著降低（P＝0.003，P＝0.002），与丙泊酚组比较，丙泊酚＋A779组大鼠WT明显升高（P＝0.000）。丙泊酚组及对照组中ACE2、Mas、p-Akt、p-eNOS较MCT组明显升高（丙泊酚组及对照组与MCT组比较，均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组大鼠肺组Mas表达水平较丙泊酚组明显下降（P＝0.005）。ELISA法检测各组大鼠肺组织Ang-（1-7）水平表达：丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]和对照组[（81.75±5.80） pg/ml]较MCT组[（34.55±5.72 ） pg/ml]明显升高（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（41.14±8.03） pg/ml]较丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]明显下降（P＝0.000）。硝酸还原酶法检测大鼠肺组织NO含量：丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]及对照组[（6.70±0.84） μmol/g]较MCT组[（2.83±0.82） μmol/g]明显增加（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（2.99±0.98） μmol/g]较丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]明显降低（P＝0.000）。结论丙泊酚可以通过调节肺动脉高压中ACE2来抑制肺动脉高压的发展，该作用可能与激活ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴，继而激活下游Akt/eNOS信号通路有关。

川陈皮素对糖尿病肾病大鼠AMPK和eNOS表达的影响研究

目的观察川陈皮素对糖尿病肾病大鼠的治疗作用,并从腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)和内皮型一氧化氮酶(eNOS)途径探讨其作用机理。方法采用高脂高糖饲料喂养+链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制2型糖尿病肾脏损害大鼠模型,模型构建成功后,将其随机分为正常组、模型组、贝那普利干预组以及川陈皮素低、中和高剂量治疗组(n=20)。实验中密切监测大鼠一般情况,治疗期结束后收集尿液检测24h蛋白尿,收集血液检测肾功能指标、抗氧化指标,收集肾脏观察肾脏病理学,同时检测肾脏组织中AMPK及eNOS蛋白和mRNA的表达结果。结果正常组肾小球正常,无明显病理特征;模型组出现肾小球增大,系膜和肾间质纤维组织增生;贝那普利组和川陈皮素三个剂量组相较于模型组明显减轻。与正常组相比,模型组24h尿蛋白定量、UREA、CREA和MDA明显升高(P<0.05);SOD和GSH明显降低(P<0.05),与模型组相比,贝那普利和川陈皮素三个剂量组24h尿蛋白定量、UREA、CREA和MDA明显降低(P<0.05),SOD和GSH明显升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组p-AMPK、AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,贝那普利组和川陈皮素低、中和高剂量组AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论川陈皮素可保护肾功能,提高血清和肾脏抗氧化指标,同时增加AMPK和eNOS蛋白和mRNA表达,最终保护糖尿病肾脏损害。