固本降消汤联合达格列净经AMPK信号通路、沉默信息调节因子调治2型糖尿病伴肥胖的效果及机制探究

目的探讨固本降消汤联合达格列净经腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、沉默信息调节因子调治2型糖尿病(T2DM)伴肥胖的效果及机制。方法选取2021年1—12月收治的T2DM伴肥胖120例,根据治疗方案不同将其分为观察组和对照组2组各60例。观察组采用固本降消汤联合达格列净治疗,对照组采用达格列净治疗,连续治疗3个月。比较2组治疗3个月后临床效果,治疗前及治疗1、3个月后血糖指标[空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、餐后2 h血糖(2 h PG)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]、腺苷酸活化蛋白激酶α1/Toll样受体4(AMPKα1/TLR4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、核因子-κB(NF-κB)、能量平衡相关蛋白(Adropin)、鸢尾素(Irisin)、趋化素(Chemerin)及沉默信息调节因子1(SIRT1)、沉默信息调节因子3(SIRT3),以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗3个月后,总有效率观察组为96.67%高于对照组83.33%(P<0.05)。治疗1和3个月后,FPG、HbA1c、2 h PG、MDA、ROS、TGF-β1、NF-κB及Chemerin 2组均较治疗前降低,且观察组低于对照组;GSH-Px、AMPKα1/TLR4、Adropin、Irisin及SIRT1、SIRT32组均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05,P<0.01)。治疗期间,不良反应总发生率观察组为13.33%,对照组为10.00%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论固本降消汤联合达格列净调治T2DM伴肥胖可提高临床效果,改善血糖水平,减轻氧化应激损伤,并可经AMPK信号通路抑制肾损伤,调节SIRT1和SIRT3,延缓病情进展。

花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

番茄红素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对过敏性结膜炎小鼠的治疗作用

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨番茄红素(LYC)减轻过敏性结膜炎小鼠炎症的作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)致敏建立AC小鼠模型。将BALB/c小鼠分为正常组(NC组)、模型组(AC组)、LYC低组(5 mg/kg)、LYC中组(10 mg/kg)、LYC高组(20 mg/kg),LYC高+AMPK抑制剂(CC)组(0.2 mg/kg)。观察小鼠眼周情况,采用苏木精-伊红染色观察结膜组织病理学变化,采用流式细胞仪检测脾脏中Th17、Treg细胞比例,采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清中炎症因子、免疫球蛋白(Ig)E、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)水平,采用蛋白质印迹法检测结膜组织AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组比较,AC组小鼠眼部出现结膜充血、红肿、溢泪等现象,结膜组织嗜酸性粒细胞较多,Th17细胞比例、白细胞介素(IL)-17、IL-6、IgE、TSLP、磷酸化AMPK(p-AMPK)、核NF-κB p65水平升高,Treg细胞比例、IL-10、转化生长因子(TGF)-β、SIRT1水平降低(P<0.05)。与AC组比较,LYC中、高组小鼠眼部结膜充血、水肿、溢泪等明显减轻,结膜组织嗜酸性粒细胞较少,脾脏中Th17/Treg细胞比例趋向平衡,IL-17、IL-6、IgE、TSLP、核NF-κB p65水平降低,IL-10、TGF-β、p-AMPK、SIRT1水平升高(P<0.05)。CC可抵消LYC对AC小鼠的上述保护作用。结论LYC可减轻AC小鼠的过敏和炎症反应,维护机体免疫平衡,其机制可能与促进AMPK/SIRT1通路活化,抑制NF-κB通路活化有关。

过氧化物酶体增生激活受体的共刺激因子-1α调节机制的研究进展

多种疾病可伴随着线粒体的功能障碍,引起细胞的能量衰竭,而过氧化物酶体增生激活受体的共刺激因子-1α(PGC-1α)作为核转录共刺激因子在氧化代谢及线粒体的生物合成中发挥非常重要的作用。PGC-1α的调节非常广泛而复杂,深入探索其调节机制有利于进一步认识各种疾病引起的PGC-1α的分子水平及相关信号传导的变化,本文就其正负性调节的研究进展做一综述。

利拉鲁肽通过Sirt1/AMPK信号通路改善肝细胞脂肪变性机制研究

目的探讨利拉鲁肽(Lira)干预棕榈酸(PA)诱导的人肝癌细胞对沉默信息调节因子1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP1c)信号通路的影响。方法取HepG2细胞,分为5组,以PA干预诱导肝细胞脂肪变制备模型,再分别以PA/Lira、PA/Sirt1或PA/Sirt1/Lira干预组。采用油红O染色观察细胞脂滴,采用试剂盒测定肝细胞培养上清液烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态/还原态比值(NAD+/NADH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝细胞甘油三酯(TG)含量,采用RT-qPCR法检测肝激酶B1(LKB1)、游离脂肪酸(FFA)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和甘油三酯脂肪酶(ATGL)mRNA水平,采用蛋白质印迹法检测细胞p-AMPK、p-Sirt1和p-SREBP1c蛋白表达。结果PA处理组肝细胞内见大量脂滴,PA/Sirt1组脂滴更大,而PA/Lira处理组和PA/Sirt1/Lira处理组细胞脂滴数量显著减少,提示模型制备成功并显示Lira的防治作用;PA组细胞FFA和ACC基因水平显著高于对照组(P均<0.01),PA/Lira处理组LKB1和ATGL基因水平显著高于PA处理组(P均<0.001),而FFA和ACC基因水平显著低于PA组(P均<0.01),PA/Sirt1/Lira组LKB1和ATGL基因水平显著高于(P均<0.01),而FFA基因水平显著低于PA/Sirt1处理组(P<0.05);与对照组比,PA组细胞p-AMPK和p-Sirt1蛋白表达下调,而SREBP1c表达上调;与PA组比,PA/Lira组p-AMPK蛋白表达上调而SREBP1c蛋白表达下调;与PA/Sirt1组比,PA/Sirt1/Lira组细胞p-AMPK表达上调。结论Lira改善HepG2细胞脂肪蓄积可能是通过直接上调Sirt1/AMPK信号通路或部分激活LKB1升高AMPK蛋白表达,抑制SREBP1c蛋白表达,降低了脂质合成分子水平。

电针对衰老模型大鼠睾丸AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨电针对衰老模型大鼠睾丸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、沉默信息调节因子1(silent information regulator of transcription 1,SIRT1)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白表达的影响及其延缓生殖衰老的作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和造模组(n=30),造模组经腹腔注射D-半乳糖复制衰老模型大鼠,从造模成功的大鼠中随机筛选24只平均分为3组:模型组、药物组和电针组,每组8只。电针组取“肾俞”“关元”予电针治疗,每日治疗1次,每次15 min,治疗5 d休息2 d,连续治疗8周。药物组予腹部皮下注射丙酸睾酮注射液(7 mg/kg,每3日1次),连续8周。对照组和模型组给予腹部皮下注射0.9%氯化钠溶液,注射剂量及疗程同药物组。治疗前后检测大鼠血清总睾酮(total testosterone,TT)和游离睾酮(free testosterone,FT)水平,免疫组化法、Western blot检测大鼠睾丸AMPK、p-AMPK、SIRT1、NF-κB p65蛋白表达。结果:治疗前,与对照组比较,模型组、药物组及电针组血清TT、FT水平降低(P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.000);治疗后,与对照组比较,模型组、药物组及电针组血清TT、FT水平降低(P=0.000,P=0.000;P=0.009,P=0.025;P=0.006,P=0.022),与模型组比较,药物组及电针组血清TT、FT明显升高(P=0.001,P=0.004;P=0.001,P=0.004)。与对照组比较,模型组、药物组及电针组p-AMPK、SIRT1蛋白表达均明显降低(P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000),NF-κB p65蛋白表达明显升高(P=0.000,P=0.000,P=0.005)。与模型组及药物组比较,电针组p-AMPK、SIRT1蛋白表达明显升高(P=0.000,P=0.000;P=0.023,P=0.002),NF-κB p65蛋白表达明显降低(P=0.000,P=0.000)。结论:电针可能通过激活睾丸间质细胞(Leydig细胞)AMPK/SIRT1/NF-κB通路,抑制Leydig细胞炎性反应,从而改善血清TT、FT水平,这可能是电针延缓生殖衰老的作用机制之一。

运动对胰岛素抵抗骨骼肌AMPK/SIRT1/PGC-1α轴影响的研究述评

SIRT1(沉默信息调节因子2相关酶I)是依赖于辅酶NAD+的去乙酰化酶,不仅与衰老、凋亡、DNA修复有关,还与不同营养应激状态的细胞代谢转换相关。SIRT1和AMPK(腺苷酸活化蛋白激酶)是细胞内的能量感受器,通过磷酸化、去乙酰化调节着PGC-1α的活性。骨骼肌AMPK/SIRT1/PGC-1α轴的活性调控直接影响着其下游相关基因的表达,与胰岛素抵抗的发生与发展密切相关。

沉默信息调节因子2相关酶1在肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）在肝癌中的表达及其临床意义.方法 收集252例乙肝后肝癌病例组织标本及随访资料.通过基因测序分析p53突变情况并通过蛋白印迹法检测肝癌组织中SIRT1和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的表达情况.结果 在p53突变型肝癌（n＝54）中,SIRT1活化的比例较野生型p53肝癌高（64.8％比31.8％;P＜0.01）,且活化的SIRT1预示着更高的无复发生存率.多变量分析显示SIRT1是影响无复发生存率的独立因素（OR：0.339,CI：0.160-0.720,P=0.005）.SIRT1活性与AMPK活性显著相关（P =0.007）.结论 在p53突变型肝癌中SIRT1通过AMPK途径表现出抗肿瘤效应.

白藜芦醇调节SIRT1/AMPK通路抑制大鼠多囊卵巢综合征颗粒细胞内自噬的机制研究

目的:探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响,并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法:体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度白藜芦醇(5、10、20、40μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),MTT法观察卵巢颗粒细胞增殖率的变化;电镜观察细胞内自噬水平的变化;Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator T1,SIRT1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK(pAMPK)、Beclin1和p62的表达变化,并检测SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,细胞内上述蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示,白藜芦醇能明显促进颗粒细胞增殖(P<0.05),呈浓度-时间依赖性(P<0.05);电镜结果表明白藜芦醇能降低细胞内的自噬体数量(P<0.05)。Western blot结果显示白藜芦醇可以增强卵巢颗粒细胞内SIRT1和pAMPK的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞内Beclin1的表达(P<0.05),增加p62的表达;联合SIRT1特异性抑制剂EX527作用后,颗粒细胞内的SIRT1和pAMPK蛋白表达水平明显降低,Beclin1表达明显增加(P<0.05),p62却明显降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇能抑制PCOS卵巢颗粒细胞内自噬水平并促进其增殖,这与白藜芦醇激活SITR1/AMPK通路密切相关。

大黄素甲醚对酒精性肝损伤中SIRT1-AMPK通路的影响

目的探究大黄素甲醚(physcion,PHY)对酒精性肝损伤中SIRT1-AMPK通路的作用机制。方法采用Lieber-DeCarli酒精液体饲料慢性喂养10 d,加1次酒精灌胃建立酒精性肝损伤模型,观察肝脏形态及病理学变化,测量肝指数及小鼠血清中ALT、AST、TG水平,ELISA法检测IL-1β表达情况,Western blot法检测小鼠肝组织SIRT1、AMPKα、p-AMPKα、SREBP1c蛋白水平。结果与正常对照组相比,大黄素甲醚组、SRT1720组及AICAR组明显地抑制了酒精引起的ALT、AST、TG的增高,各给药处理组肝形态、脂肪蓄积、炎症细胞浸润也呈剂量依赖性优于酒精模型组。同时,各给药处理组抑制了IL-1β的水平。与酒精模型组相比,大黄素甲醚及SRT1720、AICAR均提高了SIRT1表达及AMPKα的磷酸化水平。此外,大黄素甲醚及SRT1720、AICAR降低了SREBP1c的表达。结论从SIRT1-AMPK表达水平的变化验证了大黄素甲醚可通过此信号通路来减轻酒精性肝损伤的脂肪变性损伤和炎症水平,从而缓解酒精性肝损伤进程。

化瘀祛痰方调节AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路抑制炎症小体活化改善AS小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的探讨化瘀祛痰方调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1/过氧化酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(AMPK/SIRT1/PGC-1α)信号通路调控炎症小体活化对动脉粥样硬化ApoE^(-/-)小鼠肝脏脂质沉积的影响及作用机制。方法将24只ApoE^(-/-)小鼠按随机数字表法分为模型组、辛伐他汀组、化瘀祛痰方组,8只C57BL/6J小鼠作为正常组对照。造模结束次日各组开始灌胃,正常组和模型组采用等容积生理盐水,辛伐他汀组采用辛伐他汀混悬液2.275 mg/(kg·d),化瘀祛痰方组采用化瘀祛痰方,生药量为20 g/(kg·d),每日1次,连续给药8周。采用全自动生化分析仪检测血清血脂水平;HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理和脂质沉积情况;Western Blot法检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、线粒体转录因子A(Tfam)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测肝脏线粒体DNA(mtDNA)水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-18水平。结果与正常组比较,模型组甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白总胆固醇(LDL-C)水平显著升高(P<0.01);肝脏细胞肿胀,排列紊乱,出现大量脂肪空泡,脂质沉积明显;p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达降低,NLRP3蛋白表达升高(P<0.05);mtDNA相对表达量减少(P<0.01);IL-1β、IL-18水平升高(P<0.01)。与模型组比较,辛伐他汀组和化瘀祛痰方组TG、TC、LDL-C水平降低(P<0.01);肝细胞结构有所恢复,少见脂肪空泡,脂质沉积现象改善明显;两组p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、Tfam蛋白表达升高,NLRP3蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);mtDNA相对表达量增加(P<0.01);两组血清IL-1β、IL-18水平降低(P<0.01)。4组血清高密度脂蛋白总胆固醇(HDL-C)水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论化瘀祛痰方可通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路调节线粒体功能,抑制炎症小体激活和炎性反应,改善肝脏脂质沉积。

沙库巴曲缬沙坦对慢性心力衰竭模型小鼠心功能的影响及其作用机制

目的探讨沙库巴曲缬沙坦对慢性心力衰竭(CHF)模型小鼠心功能的影响及其作用机制。方法通过主动脉缩窄术复制CHF模型小鼠,将40只建模成功的小鼠分为模型组(B组)、沙库巴曲缬沙坦组(C组)、沙库巴曲缬沙坦+EX-527组(D组)、沙库巴曲缬沙坦+Compound C组(E组),各10只;另取10只仅开胸未手术小鼠作为对照组(A组)。C组、D组、E组小鼠均灌胃68 mg/kg沙库巴曲缬沙坦(连续4周),D组和E组小鼠另分别腹腔注射1次5 mg/kg沉默信息调节因子2相关酶类1(Sirt1)抑制剂EX-527和20 mg/kg腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C;A组和B组小鼠均分别灌胃、腹腔注射等量生理盐水。测定小鼠超声心动图指标左室射血分数(LVEF)、左室收缩末期内径(LVESd)、左室舒张末期内径(LVEDd);苏木精-伊红(HE)染色,观察小鼠的心肌组织病理形态;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血浆肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用TUNEL法计数小鼠凋亡心肌细胞;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)法测定小鼠心肌组织胱天蛋白酶3(caspase-3)、Sirt1、AMPK、过氧化物酶体增殖体激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)mRNA和蛋白表达水平。结果与B组比较,C组小鼠心肌细胞变性、炎性细胞浸润程度减轻;LVEF,血浆SOD和GSH-Px水平,心肌组织Sirt1,AMPK,PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);LVEDd,LVESd,血浆CK-MB,cTnⅠ,IL-6,TNF-α,MDA水平,心肌细胞凋亡率,心肌组织caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与C组比较,D组、E组小鼠心肌损伤程度加重;LVEF,血浆SOD和GSH-Px水平,心肌组织Sirt1,AMPK,PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);LVEDd,LVESd,血浆CK-MB,cTnⅠ,IL-6,TNF-α,MDA水平,心肌细胞凋亡率,心肌组织caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论沙库巴曲缬沙坦可能通过激活Sirt1/AMPK/PGC-1α信号通路而影响CHF模型小鼠的心功能。

NAD^+和Nampt与SIRT1的研究进展

热量限制可以引起细胞、生物体寿命延长和降低衰老相关疾病的发生。沉默信息调节因子2在酵母和果蝇中已被证实是热量限制引发长寿效果的关键,在哺乳类动物中的名字是沉默信息调节因子1(SIRT1)。最近,SIRT1的激活物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)成了研究中心,因为它很可能是连接细胞及生物体的能量代谢和热量限制导致延缓衰老中枢。与NAD+相关的还有NAD+的限速酶尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)和细胞能量调节因子腺苷酸活化蛋白激酶及NAD+下游因子Sir2-相关酶类(sirtuins)家族成员。它们之间的关系研究的最终结果就很可能解释在哺乳类动物中热量限制的奥秘,从而为今后以此为靶点的药物开发奠定良好的基础。

游泳耐力运动对小鼠骨骼肌AMPK/SIRT1信号通路的影响

目的探讨游泳耐力运动对小鼠骨骼肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1信号通路的影响。方法选取SPF级雄性小鼠24只,按照随机数字表法分为对照组和模型组各12只。采用皮下注射5 mg/kg的地塞米松磷酸钠注射液建造肌肉衰减综合征小鼠模型,每天0.1 ml/10 g,连续注射6 w。建模成功后再根据随机数字表法将对照组分为正常对照组和耐力运动对照组各6只,模型组分为正常模型组和耐力运动模型组各6只,耐力运动对照组和耐力运动模型组进行相应的游泳耐力运动训练。评价模型组小鼠建模情况。对比小鼠骨骼肌中AMPK mRNA、AMPK蛋白和SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白表达情况。结果模型组小鼠建模成功,小鼠跑台掉下次数显著多于对照组,游泳速度和筋肉含量显著低于对照组(P<0.05)。耐力运动模型组小鼠的AMPKα1 mRNA、AMPKα2 mRNA、SIRT1 mRNA均显著高于正常对照组、耐力运动对照组、正常模型组(P<0.05),耐力运动对照组AMPKα2 mRNA高于正常对照组和正常模型组(P<0.05)。耐力运动对照组和耐力运动模型组AMPK蛋白均显著高于正常对照组和正常模型组(P<0.05)。结论肌肉衰减综合征小鼠筋肉含量减少,运动能力下降,同时游泳耐力训练可增加肌肉衰减综合征小鼠的AMPKα1 mRNA、AMPKα2 mRNA、SIRT1 mRNA水平,同时增加AMPK蛋白水平,其具体机制还有待进一步研究。

当归芍药散对AD大鼠线粒体稳态及AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的:探讨当归芍药散对阿尔茨海默病(AD)大鼠线粒体形态和功能的影响及作用机制。方法:采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)构建AD模型大鼠。40只大鼠随机分为假手术组、模型组、当归芍药散低、中、高剂量(12、24、36 g·kg^(-1))组,连续灌胃14 d后透射电镜观察大鼠海马区线粒体形态变化,原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,免疫荧光检测活性氧(ROS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)、PGC-1α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、PGC-1α蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马区线粒体损伤明显,ROS产生和细胞凋亡率显著增高(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著下调,Drp1 mRNA表达显著上调,p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白明显下调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归芍药散中、高剂量组明显改善线粒体损伤,ROS产生减少,细胞凋亡率下降(P<0.01),MFN2、COXⅣ、PGC-1α mRNA表达显著上调,Drp1 mRNA表达显著下调,p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白显著上调(P<0.01)。结论:当归芍药散可以显著改善AD模型大鼠线粒体稳态失衡。

丹参多酚酸盐通过AMPK/Sirt1/PGC-1α信号通路诱导膜性肾病大鼠足细胞自噬的机制

目的:通过观察丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、沉默信息调节因子(Sirt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)蛋白的表达及细胞自噬和凋亡的情况,探讨其治疗MN的可能的分子机制。方法:80只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg^(-1)),丹参多酚酸盐低、中、高剂量组(16.7、33.3、66.7 mg·kg^(-1)),通过尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法造模。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药4周后留取24 h尿、血清和肾组织,尿液用于检测24 h尿蛋白定量(24 h UTP)、血清用于检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。采用光镜、电镜、免疫荧光法观察肾脏病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织磷酸化(p)-AMPK、AMPK、p-Sirt1、Sirt1、PGC-1α蛋白表达水平;免疫组化(IHC)检测大鼠肾组织自噬特异性基因-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、泛素结合蛋白(p62)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶(Caspase)-7蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h UTP、IL-6、TNF-α、CRP、MDA水平显著升高(P<0.01),SOD和GSH-Px水平显著降低(P<0.01),BUN、SCr变化差异无统计学意义;与模型组比较,丹参多酚酸盐低中高剂量组和贝那普利组大鼠24 h UTP、IL-6、TNF-α、CRP、MDA水平显著降低(P<0.01),SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.01)。在苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、免疫荧光及电镜下观察可见模型组大鼠肾组织病理损伤明显,贝那普利和丹参多酚酸盐治疗后,肾组织细胞的病理损伤逐渐改善。与正常组比较,模型组大鼠肾脏p-AMPK/AMPK、p-Sirt1/Sirt1、PGC-1α、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-7、p62的表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,贝那普利和丹参多酚酸盐治疗后大鼠肾脏p-AMPK/AMPK、p-Sirt1/Sirt1、PGC-1α、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-7、p62的表达显著降低(P<0.01)。结论:丹参多酚酸盐对MN大鼠肾保护作用,这可能与激活AMPK/Sirt1/PGC-1α通路,上调自噬,减少凋亡有关。

探讨保元汤加减方通过AMPK/SIRT1/PGC-1α通路对小鼠的抗疲劳作用

目的探讨保元汤加减方(人参、黄芪、甘草、肉桂、红景天)缓解疲劳的作用及机制。方法用HPLC检测保元汤加减方主要成分及含量。将160只SPF级ICR雄性小鼠分为4部分(各40只),每部分均完全随机分为空白对照组(等体积纯化水)及保元汤加减方低、中、高剂量(1.9、2.1、2.3 g/kg)组,各组每日灌胃1次,共30 d。末次灌胃后取材并处死。(1)40只小鼠分别于第21天检测行为学指标(抓力、背温、自主活动次数、转棒疲劳时间),第30天检测负重游泳时间。(2)40只小鼠用于检测肝/肌糖原水平。(3)40只用于检测血乳酸(BLA)含量及计算血乳酸曲线下面积。(4)40只小鼠用于检测机体代谢产物[血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、BLA]水平,氧化应激相关酶[骨骼肌及心脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]活性,血液运氧能力[全血红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、平均血红蛋白浓度(MCHC)],三磷酸腺苷(ATP)相关酶[骨骼肌及心脏中Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)及血清中肌酸激酶(CK)]活性,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路相关蛋白表达。结果保元汤加减方中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、红景天苷、毛蕊异黄酮含量分别为8.15、3.82、1.07、0.41、0.067 g/L。各剂量保元汤加减方可增加心脏与骨骼肌中Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶、SDH、CAT、SOD活性(均P<0.05);降低小鼠心脏与骨骼肌中MDA水平(均P<0.05);降低小鼠血清中CK、LDH水平(均P<0.05);增加肝糖原、肌糖原储备量(均P<0.05);降低小鼠血清BUN水平与BLA曲线下面积(均P<0.05);增加全血RBC、HGB与MCHC(均P<0.05);增加小鼠骨骼肌和心脏p-AMPK、SIRT1、PGC-1α、TFAM蛋白表达(均P<0.05)。结论保元汤加减方可能通过激活骨骼肌、心脏中AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,增强线粒体能力,减少机体代谢产物的积累,抑制机体氧化应激与增加血液运氧能力,达到抗疲劳的作用。

瑞舒伐他汀通过AMPK/Sirt1/NF-κB通路改善骨质疏松雌性大鼠骨微结构的研究

目的探讨瑞舒伐他汀对骨质疏松大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(Sirt1)/核转录因子-κB(NF-κB)通路和骨微结构的影响。方法将雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇(0.05 mg/kg)组、瑞舒伐他汀(1.0、2.0、4.0 mg/kg)组,每组12只。采用双侧卵巢切除术复制大鼠骨质疏松症模型。术后第9周雌二醇组和瑞舒伐他汀各剂量组ip相应药物,1次/d,连续给药12周。假手术组和模型组ip等体积生理盐水。ELISA法检测血清骨代谢标志物成骨特异性转录因子(CBF-α1)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXI)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、骨钙素(OC)水平和血清雌二醇(E;)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;Micro-CT扫描大鼠右侧股骨观察大鼠股骨远端骨微结构变化,分析骨小梁骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁间隔(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th);苏木精–伊红(HE)染色观察骨组织形态学变化;Western blotting法检测骨组织Sirt1、AMPK、p-AMPK、NF-κB p65、NF-κBp65(acetyl K310)蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清E;、骨代谢相关标志物CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC水平、BMD明显降低,炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平明显升高,骨小梁微结构参数BV/TV、Tb.N、Tb.Th明显降低,Tb.Sp明显升高(P<0.05),骨小梁出现断裂,排列疏松,骨组织pAMPK/AMPK、Sirt1蛋白表达明显降低,NF-κB p65(acetyl K310)/NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,瑞舒伐他汀2.0、4.0 mg/kg组大鼠血清E;、骨代谢相关标志物CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC水平、BMD明显升高(P<0.05),炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平下降,骨小梁微结构参数BV/TV、Tb.N、Tb.Th增加,Tb.Sp明显降低(P<0.05),新生骨小梁,形态相对完整;骨组织p-AMPK/AMPK、Sirt1蛋白表达明显升高,NF-κB p65(acetyl K310)/NF-κB p65蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可改善骨质疏松大鼠的骨微结构,对骨质疏松具有保护作用,其作用机制可能与激活AMPK和Sirt1蛋白表达,降低NF-κB p65乙酰化水平有关。

肌肉减少症患者血清AMPK-αmRNA、SIRT1、GDF-8的水平及其临床意义

目的研究肌少症患者血清腺苷酸活化蛋白激酶-α微小RNA(AMPK-αmRNA)、血清沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)及血清生长分化因子-8(GDF-8)的水平。方法选择2019年1月—2020年6月杭州市第三人民医院收治的老年患者81例,根据四肢肌肉质量指数、握力及步行速度将患者分为肌肉减少症组(41例)和非肌肉减少症组(40例),检测血清AMPK-αmRNA、SIRT1及GDF-8等。采用Pearson、Spearman相关性分析相关性;采用ROC曲线分析GDF-8的诊断价值。结果肌少症组与非肌少症组患者各项指标[AMPK-αmRNA:0.26(0.24,0.29)vs.0.29(0.27,0.32);SIRT1(ng/L):582.68±35.92 vs.646.50±39.08;GDF-8(μg/L):20.97±5.10 vs.14.76±1.59]比较差异均有统计学意义(均P<0.001)。SIRT1、AMPK-αmRNA与GDF-8呈负相关(P<0.001,P=0.001)。握力与AMPK-αmRNA及SIRT1呈正相关(P=0.028,P<0.001);握力与GDF-8呈负相关(P=0.001)。GDF-8诊断肌少症的临界值是17.25μg/L,AUC值为0.884(P=0.040)。结论肌少症患者AMPK-αmRNA及SIRT1降低,GDF-8增高,GDF-8可作为肌少症诊断的辅助参考指标。

探讨绞股蓝总皂苷对骨关节炎大鼠的影响

目的探讨绞股蓝总皂苷(gypenosides,CP)对骨关节炎大鼠的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、GP低、中、高剂量组和双氯芬酸钠组。HE染色和阿利新蓝染色检测大鼠软骨病理损伤;CT检测大鼠BV/TV、Tb.N、Tb.Sp和Tb.Th;WB检测软骨基质相关蛋白和软骨组织SIRT1/AMPK相关蛋白表达;ELISA检测大鼠软骨组织和血清炎性因子和氧化应激。结果随着CP剂量增加,大鼠骨组织炎性浸润和纤维化明显改善;BV/TV、Tb.Th和Tb.N明显上升,Tb.Sp明显下降(P<0.05);软骨基质SOx-9、Aggrecan和Collagen Ⅱ水平明显上升(P<0.05);血清和软骨组织TNF-α、IL-6和IL-1β水平明显下降(P<0.05);软骨组织SOD和CSH-Px水平明显上升,MDA水平明显下降(P<0.05);软骨细胞p-AMPK、SITR1和PCC1α蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论GP激活AMPK/SITR1表达,减轻氧化应激,修复软骨损伤。