环氧合酶-2和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶在扁平苔藓皮损中的表达

目的:检测环氧合酶-2(COX-2)及其上游调控蛋白磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)在扁平苔藓皮损中的表达,探讨其在发病中的意义。方法:采用免疫组化技术检测20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的表达情况,20例正常皮肤组织作为对照。结果:20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的积分光密度值(IOD)分别为(8.46±1.79)×10^3和(11.54±2.85)×10^3,均明显高于对照组(3.14±2.35)×10^3和(6.26±3.12)×10^3,差别具有统计学意义(均P<0.01),同时COX-2与p-P38MAPK的表达强度呈正相关(r=0.62,P<0.01)。结论:扁平苔藓皮损中COX-2表达上调,可能与上游P38MAPK的活化有关,可能是引起扁平苔藓发病的环节之一。

一磷酸腺苷活化蛋白激酶对环氧合酶-2表达与5氟-尿嘧啶治疗结肠癌敏感性的关系

目的探讨一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)对环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达及结肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响。方法选用HT-29结肠癌细胞株,按照HT-29细胞的培养液不同,分为空白对照组(常规培养)、5-Fu培养组、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)培养组、5-Fu+AICAR培养组。用western blot法测定各组中P-ACC和COX-2的表达,并分别于培养6、12、24小时分析5-Fu培养组和5-Fu+AICAR培养组中P-ACC和COX-2的表达水平的变化;用MTT法检测12、24、48小时各组细胞的存活率。结果5-Fu组作用后COX-2蛋白上调,AICAR致P-ACC表达后,可下调COX-2蛋白的表达;5-Fu联合AICAR可降低细胞存活率。结论AMPK的激活可能下调COX-2表达,并可能提高以5-Fu治疗为基础的结肠癌化疗敏感性。

白头翁皂苷D介导AMPK/COX-2通路对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷D调控腺苷酸活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)信号通路对人食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响。方法 体外培养EC9706细胞,不同浓度梯度白头翁皂苷D处理后,MTT法检测EC9706细胞增殖,以筛选白头翁皂苷D的作用浓度。将EC9706细胞分为对照组,白头翁皂苷D(PSD)低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L白头翁皂苷D),PSD高剂量+AMPK抑制剂(Compound C)组(40μmol/L白头翁皂苷D+10μmol/L Compound C),平板克隆形成实验检测EC9706细胞增殖;流式细胞术检测EC9706细胞凋亡;Western blot法检测EC9706细胞Bax、Bcl-2、p53、磷酸化AMPK(p-AMPK)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、COX-2蛋白表达水平。结果 与对照组比较,PSD低、中、高剂量组EC9706细胞克隆形成率、Bcl-2、COX-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax、p53、p-AMPKα、p-ACC蛋白表达水平显著升高,并呈浓度依赖性(P<0.05);与PSD高剂量组比较,PSD高剂量+Compound C组细胞克隆形成率、Bcl-2、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、p53、p-AMPKα、p-ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 白头翁皂苷D通过激活AMPK途径抑制COX-2表达,进而抑制EC9706细胞增殖,促进细胞凋亡。

银杏双黄酮介导AMPK/COX-2通路对黑色素瘤细胞凋亡的影响

目的:基于单磷酸腺苷活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)通路探究银杏双黄酮(GBB)对黑色素瘤细胞发生凋亡的影响。方法:体外培养人黑色素瘤细胞株A875,用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)GBB、10μmol/LAMPK抑制剂Compound C、200μmol/L GBB+10μmol/L Compound C作用于A875细胞24 h。采用倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染色法检测GBB对A875细胞凋亡的影响,Western blotting法检测磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、磷酸化AMPK(p-AMPK)及COX-2蛋白表达。结果:随着GBB浓度的增加,细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞形态回缩变小、变圆、变亮,细胞间接触消失,部分细胞脱落裂解为碎片状,悬浮细胞增多,折光性减弱,呈现典型的细胞凋亡形态。GBB可提高p-ACC、p-AMPK蛋白表达,降低COX-2蛋白表达(均P<0.05);Compound C逆转了GBB对p-ACC、p-AMPK蛋白表达的促进作用及对COX-2蛋白表达的抑制作用(均P<0.05)。结论:GBB可诱导人黑色素瘤A875细胞凋亡,且呈剂量依赖性,此过程可能是通过介导AMPK/COX-2通路实现的。

基于ERK/NF-κB/COX-2信号通路研究珠子参总皂苷改善对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的作用机制

研究珠子参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的影响及作用机制。将雄性昆明小鼠随机分为空白组、TSPJ组(200 mg·kg^(-1),ig)、模型组、APAP+TSPJ低剂量组(50 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ中剂量组(100 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ高剂量组(200 mg·kg^(-1),ig)和APAP+N-乙酰半胱氨酸组(200 mg·kg^(-1),ip)。给药组每天ig或ip相应的药物,每天1次,连续14 d。末次给药1 h后,除空白组和TSPJ组外,各组小鼠均灌胃给予500 mg·kg^(-1) APAP,24 h后收集小鼠血清与肝脏组织进行血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2、IL-6、IL-4、IL-10及肝组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的水平,苏木精-伊红染色观察肝组织形态学改变;实时定量PCR法测定肝组织中淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、半乳糖凝集素3(galectin 3,Mac-2)、TNF-α、IL-1β、COX-2、IL-6、IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot法测定肝组织中Ly6G、Mac-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)、COX-2、核因子κB抑制因子α(inhibitor of nuclear factorκB protein α,IκBα)、磷酸化核因子κB抑制因子α(phosphorylated inhibitor of nuclear factorκB protein α,p-IκBα)、胞浆和胞核中核因子κB亚基p65(nuclear factorκB subunit p65,NF-κB p65)蛋白表达。结果显示,TSPJ可显著降低APAP诱导小鼠肝脏系数、血清中ALT、AST、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2水平及肝组织LDH、MPO、MDA水平和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高血清中IL-4、IL-10含量及肝组织中GSH、CAT、SOD、T-AOC水平和肝组织中IL-4、IL-10 mRNA表达;改善肝脏病理损伤程度,抑制肝组织中性粒细胞浸润和巨噬细胞募集;降低肝组织中中性粒细胞标记物Ly6G、巨噬细胞标记物Mac-2和COX-2 mRNA和蛋白表达,降低p-ERK、p-IκBα、胞核NF-κB p65蛋白表达和p-ERK/ERK、p-IκBα/IκBα比率,升高胞浆NF-κB p65蛋白表达。以上结果表明,TSPJ对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著保护作用、可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制与抑制ERK/NF-κB/COX-2信号通路激活,进而抑制炎性细胞浸润、炎症因子生成和抑制肝细胞损伤密切相关。

子痫前期患者胎盘中p38MAPK及COX-2的表达及意义

子痫前期是妊娠期特有疾病,目前其病因及发病机制尚未明确。本研究通过检测子痫前期患者胎盘组织中p38MAPK及COX-2的表达及其关系,探讨它们在子痫前期的病理生理过程中,特别是胎盘血管炎症反应中发挥的作用。

健脾解毒方介导p38MAPK信号转导下调幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞环氧合酶2启动子活性

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)对人胃癌MKN45细胞环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-Basic-COX-2-promoter)活性的影响和健脾解毒方对其的调控作用及可能的机制。方法:将构建的pGL3-Basic-COX-2-promoter转染MKN45细胞,观察H.pylori对其活性的影响。运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子活性的影响。Western blot法检测健脾解毒方对H.pylori感染的MKN45细胞p38MAPK信号通路及其下游激活转录因子-2(ATF-2)表达的影响。结果:H.pylori可增加COX-2启动子活性;抑制p38MAPK信号通路后,COX-2启动子活性明显下调;健脾解毒方能够抑制H.pylori诱导的p38MAPK及ATF-)的活性。结论:H.pylori通过p38MAPK信号通路上调胃癌细胞COX-2启动子活性;健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号通路,抑制COX-2启动子活性,是其防治H.pylori诱发胃癌的机制之一。

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。

亮丙瑞林调控AMPK/COX-2通路对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探究亮丙瑞林对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡及单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)通路的影响。方法体外培养子宫肌瘤细胞,将其分为:对照组、亮丙瑞林低剂量组、亮丙瑞林中剂量组、亮丙瑞林高剂量组、高剂量+抑制剂组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力;AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡情况;免疫印迹(WesternBlot)检测Bcl-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK、COX-2的表达。结果与对照组相比,亮丙瑞林低、中、高剂量组细胞增殖活力呈现下调趋势;凋亡率呈现上调趋势(P<0.05);细胞中Bax、Caspase-3与p-AMPK/AMPK蛋白表达升高,Bcl-2与COX-2蛋白表达降低,且均呈浓度依赖性(P<0.05)。与亮丙瑞林高剂量组相比,高剂量+抑制剂组细胞增殖活力、细胞中Bcl-2与COX-2蛋白表达升高,而凋亡率、细胞中Bax、Caspase-3与p-AMPK/AMPK蛋白表达降低(P<0.05)。结论亮丙瑞林可能通过激活AMPK/COX-2通路抑制子宫肌瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。

辣椒素通过p38 MAPK/COX-2信号通路对局灶性脑缺血大鼠认知功能的影响

目的:探讨辣椒素对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的影响及可能的作用机制。方法:SD雄性大鼠随机选取12只作为假手术组,其余大鼠采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。将建模成功的大鼠分为模型组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂,1 mg·kg^(-1)]组、辣椒素低、高剂量(50、100 mg·kg^(-1))组、anisomycin(p38 MAPK激动剂,2 mg·kg^(-1))+辣椒素(100 mg·kg^(-1))组,每组12只。再灌注及给药结束后对大鼠进行神经功能缺陷评分;Morris水迷宫和新型物体识别实验检测大鼠学习和认知能力;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织海马区病理学变化;免疫荧光法检测海马组织小胶质细胞的活化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))炎性因子的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、逃避潜伏期、海马CA1区钙结合蛋白-1(Iba-1)阳性表达的小胶质细胞数量、脑组织IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平、海马组织p-p38 MAPK/p38MAPK、COX-2的表达显著升高(P<0.01);穿越平台位置次数、新颖物体辨别指数(DI)、海马组织TRPV1的表达显著减少(P<0.01),且海马神经细胞数量减少,大量炎性细胞浸润;与模型组比较,辣椒素低、高剂量组神经功能缺损评分、逃避潜伏期、海马CA1区Iba-1阳性表达的小胶质细胞数量、脑组织IL-1β、TNF-α、PGE_(2)水平、海马组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、COX-2的表达明显降低(P<0.05,P<0.01);穿越平台位置次数、DI、TRPV1的表达明显升高(P<0.05,P<0.01),少量炎性细胞浸润,神经细胞数量明显增多;且使用p38 MAPK的激活剂anisomycin可增加COX-2的表达,明显减弱辣椒素对小胶质细胞活化的抑制作用。结论:辣椒素对脑缺血再灌注大鼠的认知功能具有保护作用,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/COX-2信号通路的激活,进而抑制小胶质细胞的过度活化有关。