n-3、n-6PUFA高脂饮食对SD大鼠肝脏胆固醇合成相关基因表达影响

目的探讨n-3、n-6多不饱和脂肪酸(PUFA)高脂饮食对SD大鼠肝脏Srebp2及Hmgcr表达的影响。方法 SD大鼠随机分为3组,分别为对照组(NC)、n-3 PUFA组(TUF)及n-6 PUFA组(SUF),8周后测量血清总胆固醇(TCH)水平,实时定量PCR检测Srebp2及Hmgcr基因表达,Western blotting检测SREBP2及HMGCR蛋白表达。结果 TUF组、SUF组血清TCH含量均显著降低(P<0.001),TUF组最低。TUF组、SUF组Srebp2及Hmgcr基因表达水平均显著增高(P=0.007,P=0.012),SUF组Srebp2最高,TUF组Hmgcr最高。TUF组HMGCR蛋白表达显著高于NC组及SUF组,SUF组与NC组差异无显著性;三组SREBP2蛋白表达。结论 n-3、n-6PUFA降低血清胆固醇不是通过抑制Srebp2及Hmgcr表达实现的。

胆固醇在高脂高胆固醇诱导非酒精性脂肪性肝炎发生发展过程中的动态作用

目的探讨胆固醇在高脂高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)发生发展过程中的动态作用。方法将SD大鼠随机分为CON组(正常饮食)、HFC0组(20%脂肪)、HFC1组(20%脂肪+1%胆固醇)、HFC2组(20%脂肪+2%胆固醇)及HFC5组(20%脂肪+5%胆固醇)。饲喂第4、6、8及12周末,采血并取肝脏组织;采用油酸(oleic acid,OA)及OA+低密度脂蛋白-胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)诱导人肝脏正常细胞(HL-7702)5 d后,构建NASH模型,同时以RPMI1640培养基(含10%FBS)为对照组。分别检测大鼠血浆及HL-7702细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)的含量,大鼠肝脏组织及HL-7702细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)及甘油三酯(triglyceride,TG)的含量;HE及Masson染色观察肝脏组织病理改变;油红O及菲律宾菌素染色观察HL-7702细胞内脂滴及胆固醇含量;Western blot法检测活性n-固醇调节元件结合蛋白-2(n-sterol regulatory element binding protein 2,n-SREBP-2)、低密度脂蛋白受体(low-density lipoproteins receptors,LDLR)及3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMGCR)的蛋白表达水平。结果动物水平:12周末,与CON组比较,HFC2组、HFC5组血浆中ALT、AST及肝脏组织中TC、TG含量均显著升高(P均<0.05),肝细胞脂肪变性、气球样变性及纤维化病变明显,HFC2组、HFC5组大鼠NASH诱导成功;经Western blot分析,4、6及8周末,HFC2组、HFC5组较CON组LDLR蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05),12周末,HFC5组较CON组LDLR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);4、6及8周末,各组n-SREBP-2蛋白表达水平与CON组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),12周末,HFC2组、HFC5组较CON组n-SREBP-2蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05);4、6及12周末各组HMGCR蛋白表达水平与CON组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),8周末,HFC5组较CON组HMGCR蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。细胞水平:OA+LDL-C组较对照组及OA组细胞内胆固醇含量、n-SREBP-2及HMGCR蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05);OA组及OA+LDL-C组较对照组LDLR蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论胆固醇摄入量和摄入时间的长短与NASH肝损伤呈正相关;胆固醇可诱导肝细胞高表达LDLR,促使胆固醇进入肝脏增加,抑制HMGCR调控的内源性胆固醇合成;随着肝内胆固醇堆积增多,肝细胞LDLR表达减少,使肝内胆固醇相对不足,反馈性调节n-SREBP-2及HMGCR表达升高,打破肝脏胆固醇代谢稳态,促进了NASH的发生发展。

柚皮苷对小鼠高脂血症的作用研究

目的探讨柚皮苷对小鼠高脂血症的影响,并阐明其作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、高血脂组和柚皮苷组。高血脂组和柚皮苷组小鼠饲喂高脂饲料,持续喂养4周,建立小鼠高脂血症模型。对照组小鼠饲喂正常饲料。造模成功后,柚皮苷组小鼠每日灌胃200 mg·kg-1柚皮苷,对照组和高血脂组小鼠均灌胃等量0.9%NaCl,连续灌胃5周。收集小鼠血液进行血脂检测。收集小鼠肝组织,用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量,用蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达水平。结果对照组、高血脂组和柚皮苷组小鼠肝组织中SOD活性分别为(58.43±6.27)、(37.16±4.10)和(51.23±4.81)U·mg prot^(-1),CAT活性分别为(176.11±13.59)、(112.65±10.02)和(158.46±14.37)U·mg prot^(-1),MDA含量分别为(3.15±0.74)、(12.62±2.07)和(5.76±1.83)U·mg prot^(-1),GSH含量分别为(91.52±11.47)、(34.16±4.62)和(71.64±8.79)U·mg prot^(-1),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白相对表达水平分别为0.28±0.05、4.26±1.13和0.94±0.19,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白相对表达水平分别为1.32±0.18、0.84±0.11和1.49±0.16,胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)蛋白相对表达水平分别为1.76±0.24、5.78±1.21和2.93±0.42,3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)蛋白相对表达水平分别为1.69±0.18、6.13±1.38和3.26±0.43。对照组和柚皮苷组的上述指标与高血脂组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论柚皮苷能够有效调节高脂血症小鼠的血脂水平,抑制氧化应激反应和细胞凋亡水平,其作用机制可能与调控AMPK/HMGCR/SREBP信号通路有关。