白藜芦醇调控腺苷酸活化蛋白激酶-内皮型一氧化氮合酶信号通路促进大鼠心肌微血管内皮细胞的血管生成

目的观察不同浓度白藜芦醇(Res)对体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs)血管生成的影响,并探讨可能机制。方法植块法培养并鉴定大鼠的MMVECs,取第2代细胞。先采用0、1、5、10、50、100、120μmol/L Res干预MMVECs(分别为Res 0、1、5、10、15、100、120组)。后又分为4组:对照组,未予Res和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C);Res组,予100μmol/L Res干预MMVECs;Res+comp C组,先予Compound C 20μmol/L预处理MMVECs 40min后,再予Res 100μmol/L;comp C组,予Compound C 20μmol/L干预MMVECs。观察其对MMVECs的增殖、迁移和体外管腔样结构形成能力的影响。采用Western印迹法测定磷酸化AMPK(p-AMPK)/总的AMPK(T-AMPK)和磷酸化内皮型一氧化氮合酶(peNOS)/总的内皮型一氧化氮合酶(T-eNOS)比值。结果干预MMVECs 24h时,Res1、5、10、50、100组间增殖能力的差异均有统计学意义(P值均<0.05),呈剂量依赖性增强,以Res 100组最高。Res5、10、50、100、120组干预MMVECs后的迁移细胞数、体外管腔形成数均显著多于Res 0、1组(P值均<0.05),且呈剂量依赖性。Res 0、1、5、10、50、100、120组Res干预MMVECs后p-eNOS/T-eNOS、p-AMPK/T-AMPK比值逐渐升高,呈剂量依赖性,以Res 100组最高(P值均<0.05)。Res组的迁移细胞数、管腔形成数、p-eNOS/T-eNOS和pAMPK/T-AMPK比值均显著高于对照组、Res+comp C组和comp C组(P值均<0.05),comp C组均显著低于Res+comp C组(P值均<0.05)。结论不同浓度Res干预MMVECs后,呈剂量依赖性促进了内皮细胞的血管生成,且在浓度为100μmol/L时作用最显著,这一生物效应很有可能是通过促进AMPK和eNOS的磷酸化来实现的。

基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路,浅谈中医药治疗慢传输型便秘的研究进展

慢传输型便秘(Slow Transit Constipation,STC)是一种慢性功能性肠病,其主要特征为结肠传导动力不足,结肠传输速度缓慢,致肠内容物排出时间延长,淤积于肠道,不能顺畅排出体外。STC的病因及发病的机制复杂,目前尚无统一定论,大多数观点认为STC的病因及发病机制与Cajal间质细胞功能异常、水通道蛋白异常表达、肠神经功能病变、胃肠神经递质的异常分泌、肠道微生态紊乱及精神心理障碍等有关。近年来,细胞信号转导通路的异常改变,导致细胞信号转导通路下游的相关分子及蛋白的异常表达导致STC的发病,逐渐引起广大临床学者的关注。基于细胞信号转导通路,探讨STC的研究逐渐增多。大量研究表明,中医药治疗STC具有层次多、靶点丰富且通路广泛的优势,并且临床疗效显著。其中的机制也引起广大临床研究者的好奇。磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)细胞信号转导通路是近年来中医药治疗STC研究的热点通路之一。故文章基于PI3K/Akt/eNOS细胞信号转导通路,探讨中医药治疗STC的研究进展,以期为厘清STC的病因及发病机制提供些许理论支撑,为中医药治疗STC提供现代理论支持,为后期开展更深层次的STC的研究作铺垫。

内皮型一氧化氮合酶与心肌缺血再灌注损伤的关系研究进展

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)调控机制和信号通路,其不仅在内皮细胞中表达,也在心肌细胞、肥大细胞、肾上皮细胞、红细胞、白细胞和血小板中表达;eNOS既可以合成NO,扩张血管,也可以合成超氧化物,加剧氧化应激。在MIRI中抑制eNOS解偶联和增加其有益磷酸化,可保护血管内皮功能、抑制氧化应激、逆转凋亡和减轻炎症反应等;eNOS可通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/eNOS、沉默信息调节剂1/eNOS、腺苷单磷酸活化蛋白激酶/eNOS/一氧化氮等信号通路在MIRI中发挥重要作用。

腺苷酸环化酶及蛋白激酶A在β受体激动增加eNOS活性信号通路中的作用

目的阐明β受体激动增加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性信号通路中腺苷酸环化酶(AC)及蛋白激酶A(PKA)的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞;运用同位素两步色谱法([3H]-L-精氨酸转化法)检测eNOS活性。本研究设置空白对照组、AC组和PKA组,每组因素下再分ISO及BSS两个干预因素组,观察AC特异性阻断剂SQ-2256(5×10-5mol/L)及PKA特异性阻断剂H-89(1×10-7mol/L)分别与人脐静脉内皮细胞孵育10min,再与异丙肾上腺素(ISO)孵育30min后eNOS活性变化。结果ISO明显增加eNOS活性(30.7±3.9)%,P<0.01;分别阻断AC、PKA,ISO诱导的eNOS活性增加均受到抑制(12.1±3.53)%、(4.73±2.19)%,P<0.01。结论ISO激活eNOS活性的信号通路上,AC和PKA均有参与。

白藜芦醇通过激活腺苷酸活化蛋白激酶预防酒精性心肌病

目的探索白藜芦醇对酒精性心肌病的作用及其分子机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、酒精组和酒精+白藜芦醇组,每组10只,干预6个月后采用介入生理记录仪检测大鼠的心功能,采用常规石蜡切片和HE染色法评估心脏结构改变,采用免疫印迹法检测心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶及其磷酸化蛋白的表达,并运用硝酸还原酶法检测心肌组织中一氧化氮水平。结果 6个月酒精摄入可显著损害大鼠的心功能和心肌显微结构,添加白藜芦醇能显著削弱酒精对心脏功能和结构的损害作用。酒精摄入可显著降低心肌组织中腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并降低一氧化氮水平,而添加白藜芦醇能显著增加腺苷酸活化蛋白激酶和内皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平,并增加心肌组织中一氧化氮水平。结论白藜芦醇能通过激活腺苷酸活化蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶系统和增加一氧化氮水平来预防酒精性心肌病。

秋水仙碱通过激动PI3K/AKT/eNOS信号通路对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探究秋水仙碱通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响。方法:78只大鼠中随机选取12只作为假手术组,剩余大鼠构建AMI模型,造模成功大鼠分为模型组、秋水仙碱组[4 mg/(kg·d)]、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+LY294002(20 mg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+MK-2206(60μg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+L-NAME(1.6 mg/mL)组,每组12只。超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)。处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠心肌组织石蜡切片病理学变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)水平;免疫印迹法(Western Blot)测定大鼠心肌组织PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS降低(P<0.05);与模型组相比,秋水仙碱组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率降低,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与秋水仙碱组相比,秋水仙碱+LY294002组、秋水仙碱+MK-2206组、秋水仙碱+L-NAME组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。结论:秋水仙碱可能通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路对AMI大鼠发挥心功能保护作用。

miR-375-3p过表达调控Akt-eNOS信号通路促进心肌梗死大鼠心肌修复作用机制

目的探究miR-375-3p过表达调控丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)-内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路促进心肌梗死(MI)大鼠心肌修复作用的机制。方法将大鼠分为假手术(sham)组、MI组、阴性对照(NC)组、miR-375-3p组,各10只。比较各组miR-375-3p相对表达、心功能指标[左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)]、心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTnT)I、脑钠肽前体(Pro-BNP)]、心肌梗死面积、心肌组织病理学变化及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达。结果与sham组比较,MI组、NC组miR-375-3p表达显著降低;miR-375-3p组miR-375-3p表达显著高于sham组及MI组(P<0.05)。与sham组比较,MI组、NC组及miR-375-3p组LVEDD、LVESD及LDH、cTnTI、Pro-BNP显著升高,FS、LVEF及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达显著降低,MI面积显著增加(P<0.05)。与MI组比较,miR-375-3p组LVEDD、LVESD及LDH、cTnTI、Pro-BNP显著降低,MI面积显著减少,FS、LVEF及Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论miR-375-3p过表达可激活Akt-eNOS信号通路促进MI大鼠心肌修复。

MAPK信号途径在一氧化氮抑制大鼠心肌肥大中的作用

实验观察了一氧化氮 (NO)前体L 精氨酸对肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量、MKP 1蛋白表达及MAPK活性的影响 ,以及与心肌肥厚的关系。采用两肾一夹Goldblatt肾性高血压模型 ,随机分为 5组 :L 精氨酸高、中、低剂量组 ,分别于术后第 5周给予L 精氨酸 5 0、15 0及 45 0mg/kg;L NAME组 ,腹腔注射L NAME 10mg/kg,同时给予L 精氨酸 15 0mg/kg ;高血压对照组 ,正常饮水 ,以及另设的一假手术对照组。用药 8周后 ,用插管法测量大鼠动脉血压、左心室重与体重比值 ,用胶内原位磷酸化法测MAPK活性、免疫印迹法检测心肌组织eNOS及MKP 1蛋白表达、酶还原法测定心肌组织亚硝酸盐 /硝酸盐含量。结果表明 :(1)L 精氨酸可明显抑制肾动脉狭窄术后的血压升高、左心室重与体重比增加 ,增加心肌组织eNOS、MKP 1蛋白表达及亚硝酸盐 /硝酸盐含量 ,降低心肌组织MAPK活性 ,其中以 15 0mg/kg组作用最为明显 ;(2 )NOS抑制剂L NAME可明显抑制L 精氨酸的以上作用。肾性高血压大鼠心肌组织eNOS蛋白表达下降。NO生成减少及MKP 1蛋白表达下降以及MAPK活性增强可能与高血压及心肌肥厚形成有关 ,L 精氨酸通过促进心肌组织eNOS蛋白表达、增加NO产生和MKP 1表达。

化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号通路及血管活性肽的影响

目的:研究化瘀通便汤对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路及血管活性肽(VIP)的影响,探讨该方药对慢传输型便秘大鼠的治疗机制。方法:90只大鼠随机抽取15只为正常组,其余75只按复方地芬诺酯灌胃造模法制造慢传输型便秘模型,根据简单随机抽样方法分为5组(模型组、化瘀通便汤低剂量组、化瘀通便汤中剂量组、化瘀通便汤高剂量组、麻仁软胶囊组),每组15只。化瘀通便汤低、中、高剂量组分别予化瘀通便汤24 g/(kg·d)、48 g/(kg·d)、96 g/(kg·d)灌胃。麻仁软胶囊组用常温蒸馏水调配麻仁软胶囊至2.4 g/mL,灌胃量为20 mL/(kg·d)。模型组与正常组均与等量常温蒸馏水进行灌胃,日1次。各组干预2周后,检测大鼠首次排黑便时间、粪便含水率及结肠组织磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)阳性细胞、VIP、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)水平。结果:与模型组比较,化瘀通便汤各组及麻仁软胶囊组均能缩短大鼠首次排黑便时间,增加大鼠粪便含水率,提高大鼠结肠组织P-Akt含量、P-Akt阳性细胞水平,降低VIP的表达,降低结肠组织中NO及eNOS的含量(P<0.05);与麻仁软胶囊组比较,化瘀通便汤低剂量组与麻仁软胶囊组相近(P>0.05),化瘀通便汤中、高剂量组明显优于麻仁软胶囊组(P<0.05)。结论:化瘀通便汤可通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路及VIP表达,对慢传输型便秘大鼠起治疗作用。

p38 MAPK通路在TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞分泌ET-1与eNOS中的作用及通心络干预影响

目的观察p38 MAPK信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达内皮素-1(ET-1)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)中的作用及通心络干预影响。方法分别采用放免法及ELISA法测定不同浓度TNF-α(0、2.5、5、10、15、20μg·L-1)在不同时间点(0、1、2、4、8、12、24h)干预后HUVEC培养上清液中ET-1和eNOS含量;分别采用Western blot和Realtime RT-PCR方法检测TNF-α干预24h后HUVEC中ET-1、eNOS蛋白及mRNA表达;采用Western blot方法检测TNF-α干预10min、30min、60min后HUVEC磷酸化p38 MAPK蛋白表达。结果不同浓度TNF-α随时间延长均明显增加HUVEC培养上清液中ET-1含量,降低eNOS含量;TNF-α升高细胞中ET-1蛋白及mRNA水平、降低eNOS蛋白及mRNA水平、在各时间点均可升高细胞p-p38 MAPK蛋白表达。通心络可降低TNF-α诱导的HUVEC培养上清ET-1含量、降低细胞中ET-1蛋白及mRNA的异常升高;增加HUVEC培养上清中eNOS的表达、增加细胞中eNOS蛋白及mRNA的表达;明显抑制TNF-α诱导的细胞p-p38 MAPK表达。结论p38 MAPK信号通路参与了TNF-α诱导HUECV细胞分泌ET-1和eNOS,通心络对内皮细胞保护作用机制与抑制该通路有关。

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)中的作用及机制。方法将大鼠随机分为6组:未使用p38MAPK抑制剂SB203580的假手术组(Sham组)、使用抑制剂的假手术组(Sham/SB组)、未使用抑制剂再灌注24 h组(I/R 24 h组)、未使用抑制剂再灌注48 h组(I/R 48 h组)、使用抑制剂再灌注24 h组(SB 24 h组)和使用抑制剂再灌注48 h组(SB 48 h组)。采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,使用抑制剂的各组于造模前30 min经腹腔注射SB203580(5 mg/kg,溶于5 mg/ml DMSO)。采用免疫荧光双标法检测大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)和脑微血管(microvascular,Mic.V)周围IgG的渗出;Western blot和RT-PCR法检测大鼠脑组织中p38、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)、胶原Ⅳ型(collagenⅣ)蛋白和基因表达的变化。结果随着再灌注时间的延长,大鼠脑血管内IgG渗出量增加(P<0.01);经p38MAPK抑制剂预处理后,IgG的渗出程度有所减轻。脑缺血再灌注后,大鼠脑组织中p38、iNOS、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平均明显升高(P<0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,能显著抑制p38、iNos、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平(P<0.05);collagenⅣ蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平随着缺血时间的延长而逐渐下降(P<0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,其下降程度有所减轻(P<0.05)。结论 MAPK通路中的关键蛋白p38、iNOS、MMP-9在脑缺血时表达显著增加,其过度表达直接导致血脑屏障的破坏,抑制其表达,从而遏制对血脑屏障的破坏,有望为I/R的治疗提供新的途径。

天香丹胶囊预处理激活ERα介导的AKT/eNOS通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤的实验研究

目的:观察天香丹(TXD)胶囊通过雌激素受体(ER)α介导的蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将70只SD雌性大鼠随机分为正常对照组(Control组,10只)和去卵巢组(OVX组,60只),OVX组摘除双侧卵巢。将OVX组分为假手术组(Sham组)、模型组(MIRI组)及雌二醇组(OVX+MIRI-E2组,0.8 mg/kg)、OVX+MIRI-TXD高剂量组(0.6 g/kg)、OVX+MIRI-TXD中剂量组(0.4 g/kg)、OVX+MIRI-TXD低剂量组(0.2 g/kg),每组10只,连续灌胃给药60 d。通过结扎心脏冠状动脉左前降支30 min后再灌注60 min方法建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型。记录各组大鼠心脏血流动力学指标;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化,微量法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清雌二醇水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织雌激素受体ERα、AKT蛋白磷酸化水平、eNOS磷酸化水平。结果:与MIRI组比较,OVX+MIRI-E2组及OVX+MIRI-TXD各剂量组大鼠心脏血流动力学指标、心肌组织形态结构改善,血清LDH、CK和MDA含量降低,NO、SOD和ERα蛋白含量升高,抗氧化能力、AKT和eNOS磷酸化水平增强(P<0.05)。结论:TXD胶囊预处理可减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与激活ERα介导的AKT/eNOS信号通路、增加内源性NO释放、舒张血管、减轻心脏负荷和心肌需氧量、对心肌缺血的保护作用有关。

Z-没药甾酮通过激活PI3K/AKT/eNOS通路发挥脑微血管内皮细胞保护作用

目的:探讨Z-没药甾酮(Z-GS)对大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用及药理机制。方法:脑微血管内皮细胞制作氧糖剥夺模型体外模拟缺血性脑卒中,培养的脑微血管内皮细胞分为对照组、模型组、 Z-GS低、中、高(12.5,25,50μmol·L^(-1))剂量组。给药组细胞在OGD造模前分别给予不同剂量的Z-GS处理。在机制研究中,50μmol·L^(-1) Z-GS+抑制剂组在造模给药前加入PI3K抑制剂LY294002。试剂盒检测细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放和血管活性物质水平;免疫印迹分析磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及磷酸化水平;LY294002用于特异性抑制PI3K表达。结果:Z-GS给药可提高细胞活力、降低LDH释放。同时Z-GS可通过降低内皮素-1和血栓素B2水平、升高血栓调节蛋白和6-酮-前列环素1α水平缓解血瘀。机制研究表明,Z-GS给药可激活PI3K/AKT/eNOS通路,增加一氧化氮(NO)的生成。而在LY294002特异性抑制PI3K后,Z-GS对该通路的调控作用消失。结论:Z-GS可通过调控血管活性物质发挥血管内皮保护作用,其机制与激活PI3K/AKT/eNOS通路,进而促进NO的生成有关。

隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔腹主动脉TNF-α、p38MAPK及eNOS蛋白表达的影响

目的观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)易损斑块兔肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响,探讨其稳定AS易损斑块的作用机制。方法将58只普通级新西兰兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组和西药组。通过高脂饲料喂养+腹主动脉球囊损伤术+基因转染+触发斑块破裂建立AS易损斑块兔模型。直接灸组和隔药饼灸组分别直接灸及隔药饼灸“巨阙”、双侧“天枢”“丰隆”或双侧“心俞”“肝俞”“脾俞”,每日1次,连续8周。ELISA检测兔血清载脂蛋白A(apo-A)、载脂蛋白B(apo-B)含量,透射电镜观察腹主动脉超微结构,免疫组化法检测腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK、eNOS蛋白表达。结果与空白组比较,模型组兔血清apo-A含量显著减少(P<0.01),apo-B含量显著增加(P<0.01),腹主动脉血管壁严重破坏,有大量泡沫细胞聚集和脂滴沉积,TNF-α、p38MAPK蛋白表达显著升高(Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著降低(Ρ<0.01);与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和西药组兔血清apo-A含量显著增加(P<0.05,P<0.01),apo-B含量显著减少(P<0.05,P<0.01),直接灸组兔腹主动脉内皮细胞损伤,脂滴散在分布于泡沫池中,隔药饼灸组及西药组兔腹主动脉内皮细胞损伤程度较轻,各干预组兔腹主动脉组织TNF-α、p38MAPK蛋白表达均显著降低(Ρ<0.05,Ρ<0.01),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与直接灸组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量显减少(P<0.01),腹主动脉组织TNF-α蛋白表达显著降低(Ρ<0.05),eNOS蛋白表达显著升高(Ρ<0.05,Ρ<0.01);与西药组比较,隔药饼灸组兔血清apo-B含量明显减少(P<0.05)。结论隔药饼灸可能通过抑制TNF-α、p38MAPK蛋白表达,促进eNOS蛋白表达,保护血管内皮功能,稳定AS易损斑块。

AMPK在内皮细胞中对血管形成的影响

在真核细胞中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞及全身能量稳态的一个重要调节器,受体内AMP/ATP比率调节,通常被称为代谢敏感性激酶。新近的研究发现,AMPK的激活参与了许多细胞(如骨骼肌细胞、内皮细胞)的分化、迁移和管腔形成。该文就AMPK在血管生成这一生物效应中的显像和作用机制予以综述。

尿石素A改善高糖致血管内皮损伤的作用与机制

目的探讨尿石素A(urolithin A,UA)对高糖所致的内皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为正常组(5.5 mmol葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol葡萄糖)、高糖+UA处理组、高糖+UA+Compound C处理组。分别检测了细胞存活及细胞的一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素(endothelin-1,ET-1)浓度。通过二氢乙锭荧光探针染色和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分析细胞氧化应激水平。采用Western blot进一步分析了细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化水平。结果与高糖对照组相比,UA干预使内皮细胞的存活升高(P<0.05);SOD活性升高(P<0.05),活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平降低(P<0.05);NO分泌增高及ET-1浓度降低(P<0.05);明显上调AMPK和eNOS磷酸化水平(P<0.05),差异有统计学意义。而在AMPK抑制剂Compound C处理后UA对内皮细胞的上述作用被逆转。结论 UA通过激活AMPK/eNOS通路,抑制高糖介导的血管内皮氧化应激,改善内皮功能障碍。

N-乙酰半胱氨酸对COPD肺动脉高压大鼠肺组织PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的影响

【目的】探讨N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)肺动脉高压大鼠肺组织PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的影响。【方法】以烟熏、低氧、气道内滴注脂多糖法制备COPD肺动脉高压大鼠模型,随机分为模型组、N-乙酰半胱氨酸低剂量(50 mg/kg)组、N-乙酰半胱氨酸中剂量(100 mg/kg)组、N-乙酰半胱氨酸高剂量(200 mg/kg)组、波生坦(100 mg/kg)组,每组12只,另取12只设为对照组,检测各组大鼠肺平均动脉压;HE染色检测各组大鼠肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附实验试剂盒检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、NO水平;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肺组织PI3K/Akt/eNOS通路相关蛋白表达。【结果】与对照组比较,模型组大鼠肺小动脉呈现管壁增生且明显增厚,管腔变窄甚至闭塞等病理损伤,肺平均动脉压、大鼠血清中TNF-α及IL-6水平升高(P<0.05),大鼠血清中eNOS及NO水平、大鼠肺组织磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinases,p-PI3K)/磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)及p-eNOS/eNOS降低(P<0.05);与模型组比较,N-乙酰半胱氨酸低、中、高剂量组及波生坦组大鼠肺小动脉病理损伤减轻,肺平均动脉压、大鼠血清中TNF-α及IL-6水平降低(P<0.05),大鼠血清中eNOS及NO水平、大鼠肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/Akt及peNOS/eNOS升高且N-乙酰半胱氨酸各组呈剂量依赖性(P<0.05);N-乙酰半胱氨酸高剂量组与波生坦组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】N-乙酰半胱氨酸可改善COPD肺动脉高压大鼠临床症状,可能是通过激活PI3K-Akt-eNOS-NO通路实现的。

丙泊酚对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2的影响

目的观察丙泊酚对野百合碱（MCT）诱导大鼠肺动脉高压血管紧张素转化酶2（ACE2）的影响，并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将32只SD大鼠平均分为4组（n＝8）：对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋Mas抑制剂A779组，后3组腹腔注射60 mg/kg MCT（对照组注射等量生理盐水）诱导后，后两组每日分别持续注射丙泊酚10 μmol/L、丙泊酚10 μmol/L和A779（浓度为2 mg/ml），前两组注入等量生理盐水；4周后测量大鼠平均肺动脉压（mPAP），肺组织苏木素-伊红（HE）染色分析肺动脉中膜厚度指数（WT）及肺小动脉梗阻程度；Western blot检测肺组织内ACE2、Mas、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）表达水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织内血管紧张素1-7[Ang-（1-7）]水平；硝酸还原酶法检测肺组织内一氧化氮（NO）浓度。结果对照组、MCT组、丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠的mPAP分别为（11.37±2.17）、（32.43±4.22）、（15.82±2.12）、（18.13±2.31） mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），WT分别为（15.63±11.12）%、（78.01±17.40）%、（22.64±12.95）%、（63.67±16.43）%。与对照组比较，丙泊酚组、丙泊酚＋A779组大鼠mPAP稍升高（P＝0.001，P＝0.005），而MCT组显著升高（P＝0.000）；对照组肺动脉血管无明显狭窄、MCT组管腔基本闭塞、丙泊酚组管腔基本正常、丙泊酚＋A779组管腔明显增生；与MCT组比较，对照组、丙泊酚组大鼠WT显著降低（P＝0.003，P＝0.002），与丙泊酚组比较，丙泊酚＋A779组大鼠WT明显升高（P＝0.000）。丙泊酚组及对照组中ACE2、Mas、p-Akt、p-eNOS较MCT组明显升高（丙泊酚组及对照组与MCT组比较，均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组大鼠肺组Mas表达水平较丙泊酚组明显下降（P＝0.005）。ELISA法检测各组大鼠肺组织Ang-（1-7）水平表达：丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]和对照组[（81.75±5.80） pg/ml]较MCT组[（34.55±5.72 ） pg/ml]明显升高（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（41.14±8.03） pg/ml]较丙泊酚组[（75.31±6.51） pg/ml]明显下降（P＝0.000）。硝酸还原酶法检测大鼠肺组织NO含量：丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]及对照组[（6.70±0.84） μmol/g]较MCT组[（2.83±0.82） μmol/g]明显增加（均P＝0.000）。丙泊酚＋A779组[（2.99±0.98） μmol/g]较丙泊酚组[（6.17±0.90） μmol/g]明显降低（P＝0.000）。结论丙泊酚可以通过调节肺动脉高压中ACE2来抑制肺动脉高压的发展，该作用可能与激活ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴，继而激活下游Akt/eNOS信号通路有关。

cGMP及其介导的信号通路在血小板聚集中的作用的研究进展

血栓是缺血性心脑血管疾病的主要杀手,血小板聚集在血栓形成过程中发挥着重要的作用。抗血小板聚集在血栓性疾病的治疗中无可替代。cGMP对血小板功能的调节起到非常重要的作用,且主要通过eNOS-NO-cGMP-PKG通路进行调节。本综述主要阐明cGMP在血小板聚集中的作用和机制。

山楂叶总黄酮对高脂血症大鼠心脏保护作用的实验研究

目的研究山楂叶总黄酮(HLF)对高脂血症(HLP)大鼠心脏的保护作用及其机制。方法取48只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、辛伐他汀对照组(8mg/kg)、HLF低、中、高剂量组(100、200、400mg/kg),每组8只,除空白组外,其余各组采用高脂饲料喂养8周建立HLP大鼠模型。8周后,大鼠处死、取材,计算心脏指数,测定有关生化指标,采用HE病理切片染色观察心肌组织病理学变化,Western blot法测定心肌组织AMPK、p-AMPK、eNOS、p-eNOS蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆CK、LDH、NEFA、MDA含量升高(P<0.01),而GSH、GSH-px、SOD含量降低(P<0.01),心肌AMPK、p-AMPK、eNOS、p-eNOS表达减少(P<0.01);与模型组比较,HLF高剂量组和辛伐他汀对照组CK、LDH、NEFA、MDA含量降低(P<0.05),GSH、GSH-px、SOD含量升高(P<0.01),给药各组AMPK、eNOS蛋白表达无明显差异,而p-AMPK、p-eNOS蛋白表达降低(P<0.05)。结论HLF可降低HLP大鼠血脂,其机制可能与HLF抗氧化作用以及调节心肌组织中p-AMPK、p-eNOS的蛋白表达升高有关。