腺苷酸激酶4在脑缺血早期神经损伤中的作用研究

目的:脑供血不足导致的神经元损伤是缺血性脑卒中神经功能障碍的直接原因,线粒体功能异常与神经元损伤密切相关,腺苷酸激酶4(AK4)是能量代谢关键因子,本研究旨在探讨AK4在脑缺血早期神经损伤中的作用。方法:研究样本为60只雄性C57BL/6J小鼠,3~4周龄,体质量18~20 g,构建神经元特异性过表达AK4腺相关病毒(AAV)-空载(AAV-Ctrl组)以及AAV-AK4过表达(AAV-AK4组)小鼠。通过建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟体内脑缺血,分别在缺血1 h、2 h和3 h后采用免疫印迹法测定AK4的蛋白表达水平;在单纯缺血3 h后,分别采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测缺血脑组织损伤程度,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法检测神经元凋亡情况。结果:实验结果表明,MCAO 2 h和MCAO 3 h时梗死侧(I)相较于非梗死侧(NI)的AK4蛋白表达开始下调,其中MCAO 3 h最明显,差异均具有统计学意义(P <0.05)。与AAV-Ctrl组比较,MCAO 3 h后,AAV-AK4组小鼠的脑梗死体积明显缩小,且AAV-AK4组比AAV-Ctrl组小鼠的神经元凋亡数量明显减少,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论:脑缺血早期神经元过表达AK4可明显减少脑梗死体积,抑制神经元凋亡,发挥神经保护作用,AK4可能是缺血早期神经元损伤干预的新靶点。

胃癌组织中腺苷酸激酶4和HIF-1α的表达及其临床意义

目的观察胃癌组织中腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)和低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,探讨AK4和HIF-1α在胃癌发生、发展过程中的作用及其相关性。方法采用免疫组化EnVision法检测79例胃癌及其癌旁正常组织中AK4和HIF-1α蛋白表达,分析两者表达与胃癌临床病理特征之间的关系以及两者表达的相关性。结果胃癌组织中AK4和HIF-1α的高表达率分别为73.4%和69.6%,明显高于癌旁正常组织(25.3%和16.5%)(P<0.05)。AK4高表达与胃癌淋巴结转移、脉管侵犯和临床分期密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、Lauren分型、分化程度及浸润深度无关(P>0.05);HIF-1α高表达与肿瘤Lauren分型、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05),与患者性别、年龄、分化程度、浸润深度和脉管侵犯等无关(P>0.05)。胃癌组织中AK4和HIF-1α表达呈正相关(P<0.05)。结论AK4和HIF-1α协同作用参与了胃癌的发生、发展。AK4和HIF-1α联合检测可有助于预测胃癌的生物学行为。

肌肉浸润性膀胱癌中腺苷酸激酶4的表达及临床意义

目的探讨腺苷酸激酶4(AK4)在肌肉浸润性膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法回顾性分析2006年3月至2012年11月天津市第一中心医院接受膀胱癌根治手术治疗的85例肌肉浸润性膀胱癌患者的临床资料。采用免疫组织化学法检测85例膀胱癌组织和对应的癌旁组织中AK4的表达,分析其与临床病理学特征的关系。结果 AK4的阳性表达主要在细胞质内,呈棕黄色颗粒。AK4在膀胱癌组织中均有一定的阳性表达,而在癌旁组织中无表达。AK4的阳性高表达率为70.6%(60/85)。膀胱癌远处转移的AK4高表达率高于无远处转移者,有脉管内瘤栓的AK4高表达率高于无脉管内瘤栓者(P<0.05),不同性别、年龄、肿瘤分期和分级、淋巴结转移和复发的AK4高表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。生存分析提示,在膀胱癌中AK4高表达的患者生存时间明显短于低表达患者(P<0.05)。结论肌肉浸润性膀胱癌组织中存在AK4表达水平上调,并与膀胱癌远处转移和脉管内瘤栓有关,且AK4异常表达可能提示膀胱癌患者预后不良。

胰腺导管腺癌中腺苷酸激酶4的表达及临床意义

目的:探讨腺苷酸激酶4(AK4)在胰腺导管腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:回顾性分析76例接受胰腺癌根治手术治疗的胰腺癌患者的临床与随访资料。采用免疫组织化学法检测76例胰腺癌组织和对应的癌旁组织中AK4的表达,分析其与临床病理学特征及预后的关系。结果:AK4的阳性表达主要在细胞浆内,呈棕黄色颗粒。AK4在胰腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为78.9%(60/76)和38.2%(29/76),前者表达率显著高于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。AK4的异常表达与肿瘤分期、淋巴结转移、神经受侵、脉管内瘤栓相关(P<0.05)。生存分析提示在胰腺导管腺癌中AK4高表达的患者生存时间明显短于低表达的患者(P<0.05)。结论:胰腺导管腺癌组织中存在AK4表达水平的上调,AK4的表达可能提示胰腺癌患者分期较晚和预后不良。

腺苷酸激酶4在恶性肿瘤中的研究进展

腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)是腺苷酸激酶家族的成员之一,具有调节细胞腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphos⁃phate,ATP)浓度的生物学功能,在调节细胞能量代谢过程中起重要作用,同时也在缺氧耐受、肿瘤的发展、抗肿瘤药物耐药、调节线粒体活性等方面发挥重要作用。恶性肿瘤一直是严重威胁人类健康的疾病,许多肿瘤的死亡率居高不下。恶性肿瘤的发生、发展及治疗一直是科学研究的热点,肿瘤的治疗在不断改进,尽管在部分领域取得一定进展,但总体来说,我们对肿瘤的认识,尤其是治疗、耐药后治疗仍未突破瓶颈。AK4被用作抗癌治疗的潜在治疗靶点,而AK4与肿瘤之间的确切关系尚未得到进一步的阐明。本文拟对AK4的研究现状作一综述,以期对AK4及其在临床及疾病中的研究提供新思路。

腺苷酸激酶4慢病毒过表达质粒的构建及鉴定

目的构建腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)慢病毒过表达质粒,并进行鉴定。方法从Hep G2细胞中扩增AK4基因,将其克隆至载体LV5,构建重组质粒LV5-AK4,经测序鉴定后,将鉴定正确的LV5-AK4和包装质粒p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G共转染HEK293T细胞,包装慢病毒;将慢病毒原液进行10倍系列稀释(10^(-1)~10^(-4)),感染HEK293T细胞,检测病毒滴度;慢病毒感染Hep G2细胞,Western blot法检测AK4蛋白的表达水平。结果重组质粒LV5-AK4经测序鉴定证明构建正确,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为5×10~8 TU/ml。试验组Hep G2细胞中AK4蛋白的表达水平显著高于空白对照组及阴性对照组(P<0.01)。结论成功构建了携带AK4基因的重组慢病毒过表达质粒,为进一步研究低氧应激细胞中AK4的功能及其分子作用机制奠定了基础。

腺苷酸激酶4的表达对张氏肝细胞增殖的影响

目的检测腺苷酸激酶4(adenylate kinase 4,AK4)在张氏肝细胞中的表达及其对张氏肝细胞增殖的影响。方法用慢病毒介导的RNA干扰法干扰AK4在张氏肝细胞中的表达,Western blot法检测干扰AK4表达后对AK1和AK2表达的影响;细胞计数法检测干扰AK4表达后对细胞增殖速度的影响;流式细胞术检测干扰AK4表达后对细胞周期的影响。结果 AK4在张氏肝细胞中高表达,使用慢病毒干扰AK4表达后,AK1表达下降,AK2表达明显上升;细胞增殖速度明显降低;细胞周期阻滞在S期,G2期细胞明显减少。结论 AK4能够促进张氏肝细胞由S期进入G2期,从而影响细胞增殖。

前列腺癌中腺苷酸激酶4的表达及临床意义

目的 探讨腺苷酸激酶4（AK4）在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。 方法 回顾性分析85例接受根治手术治疗的前列腺癌患者的临床资料。使用免疫组织化学法检测前列腺癌组织和相应癌旁组织中的AK4表达，分析其与临床病理学特征的关系。 结果 AK4在前列腺癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为85.9%和38.8%，差异具有统计学意义（P〈0.05）。AK4的异常表达和癌症复发及远处转移相关（均P〈0.05）。AK4高表达的前列腺癌患者生存时间明显低于低表达的患者，差异具有统计学意义（Ｐ＜0．05）。 结论 前列腺癌组织中，AK4的表达上调，与癌远处转移和脉管内瘤栓有关，AK4的表达可能提示前列腺癌患者预后不良。

腺苷酸激酶4在大鼠胚胎内胚层前期细胞中的表达

为了研究腺苷酸激酶4(AK4)在大鼠胚胎内胚层前期细胞(XEN-P)分化过程中所起的作用,试验采用蛋白免疫印迹和RNA干扰的方法,检测了AK4在XEN-P细胞中的表达。结果表明:AK4的表达随着XEN-P细胞的分化呈逐渐上升的趋势;干扰AK4的表达后对XEN-P细胞的形态和细胞周期均无影响。说明AK4的表达与XEN-P细胞的分化程度呈正相关。

HER2过表达型乳腺癌中AK4的表达及临床意义

目的探讨人类表皮生长因子受体2(HER2)过表达型乳腺癌组织中腺苷酸激酶4(AK4)的表达及临床意义。方法回顾性分析2010年3月至2018年11月保定市第四中心医院收治的接受乳腺癌根治性切除手术治疗的82例HER2过表达型乳腺癌患者的临床病理资料。采用免疫组织化学法检测82例癌组织和对应的癌旁组织中AK4的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果 AK4主要表达于乳腺癌癌细胞的细胞质中,呈棕黄色颗粒状。AK4在HER2过表达型乳腺癌组织中的阳性高表达率为63. 4%(52/82),而在癌旁组织中则为低或无表达。p TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期的HER2过表达型乳腺癌AK4高表达率高于Ⅰ~Ⅱ期[85. 7%(24/28)比52. 0%(28/54)],有转移的HER2过表达型乳腺癌AK4高表达率高于无转移者[78. 9%(30/38)比50. 0%(22/44)](P <0. 05)。生存分析结果显示,AK4高表达的HER2过表达型乳腺癌患者生存时间短于低表达者(总生存率:χ~2=4. 891,P=0. 021;无病生存率:χ~2=6. 014,P=0. 016)。结论 HER2过表达型乳腺癌组织中存在AK4的异常高表达,并与乳腺癌的TNM高分期和淋巴结有转移有关,且AK4的高表达可能提示HER2过表达型乳腺癌患者预后不良。

固本降消汤联合达格列净经AMPK信号通路、沉默信息调节因子调治2型糖尿病伴肥胖的效果及机制探究

目的探讨固本降消汤联合达格列净经腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、沉默信息调节因子调治2型糖尿病(T2DM)伴肥胖的效果及机制。方法选取2021年1—12月收治的T2DM伴肥胖120例,根据治疗方案不同将其分为观察组和对照组2组各60例。观察组采用固本降消汤联合达格列净治疗,对照组采用达格列净治疗,连续治疗3个月。比较2组治疗3个月后临床效果,治疗前及治疗1、3个月后血糖指标[空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、餐后2 h血糖(2 h PG)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]、腺苷酸活化蛋白激酶α1/Toll样受体4(AMPKα1/TLR4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、核因子-κB(NF-κB)、能量平衡相关蛋白(Adropin)、鸢尾素(Irisin)、趋化素(Chemerin)及沉默信息调节因子1(SIRT1)、沉默信息调节因子3(SIRT3),以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗3个月后,总有效率观察组为96.67%高于对照组83.33%(P<0.05)。治疗1和3个月后,FPG、HbA1c、2 h PG、MDA、ROS、TGF-β1、NF-κB及Chemerin 2组均较治疗前降低,且观察组低于对照组;GSH-Px、AMPKα1/TLR4、Adropin、Irisin及SIRT1、SIRT32组均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05,P<0.01)。治疗期间,不良反应总发生率观察组为13.33%,对照组为10.00%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论固本降消汤联合达格列净调治T2DM伴肥胖可提高临床效果,改善血糖水平,减轻氧化应激损伤,并可经AMPK信号通路抑制肾损伤,调节SIRT1和SIRT3,延缓病情进展。