腺苷酸琥珀酸合成酶2对肝癌细胞迁移作用的研究

目的探讨腺苷酸琥珀酸合成酶2(adenylosuccinate synthetase isozyme 2,ADSS)在肝癌发生、发展中的作用。方法使用公共数据库及肝癌细胞对ADSS在肝癌中的表达及其对肝癌患者5年生存率的影响进行分析;在HepG 2及LM3细胞中沉默ADSS基因;使用细胞划痕实验及Transwell实验研究ADSS对肝癌细胞的迁移的影响;使用蛋白印迹法检测ADSS沉默细胞中上皮间质转化标志物的表达;检测LM3-Sh-ADSS2基因及代谢产物回补后上皮间质转化标志物及迁移能力改变。结果ADSS在肝癌中表达上调且与患者5年生存率呈负相关;ADSS促进肝癌细胞的迁移;ADSS参与了肝癌细胞的上皮间质转化过程。结论ADSS基因在肝癌中表达量增高并且可能通过参与上皮间质转化过程促进肝癌细胞的转移。

腺苷酸琥珀酸合成酶与其抑制剂的分子机制研究

利用密度泛函B3LYP方法选择6-31G(d)基组对腺苷酸琥珀酸合成酶(AdSS)天然抑制剂及其衍生物的结构进行优化,并对其稳定性进行了分析,同时采用Mulliken键序、原子电荷分布、表观静电势等对AdSS抑制剂及其衍生物电子结构与其生物活性相关性进行了理论研究.基于腺苷酸琥珀酸合成酶(AdSS)与其底物肌苷单磷酸(IMP)复合物的晶体结构以及获得的天然抑制剂衍生物稳定构象,利用分子对接、分子力学优化及常温分子动力学模拟对AdSS酶与天然抑制剂及其衍生物的相互作用复合物结构进行理论预测.结果表明,AdSS酶的系列抑制剂中磷酸根基团和乙内酰脲(Hydantoin)官能团构成药效团模型,识别过程中范德华相互作用能的贡献大于静电相互作用能.

HBV感染患者2′,5′寡腺苷酸合成酶、IL-2和IL-12水平检测及意义

目的:选用2′,5′寡腺苷酸合成酶(2-5OAS)作为干扰素观察指标,IL-2、IL-12作为Th1应答观察指标,了解内源性干扰素系统和Th1应答在HBV感染发病机制中作用。方法:用放射同位素法测定单核细胞2-5OAS活性;ELISA法测定血清IL-2、IL-12。结果:无症状HBsAg携带组2-5OAS、IL-2、IL-12含量与正常对照组无显著差异(P>0.05),急性肝炎组均显著高于正常对照组(P<0.01),慢性乙型肝炎轻、中、重度组、慢性重型肝炎组、肝硬化组、肝癌组均显著低于正常对照组(P<0.05),并且随慢性肝炎病情加重以及肝硬化、肝癌发生而递减,其中肝硬化、肝癌组处于最低水平(与慢性肝炎各组比较P<0.05)。结论:在HBV感染发病过程的不同阶段和不同临床分型患者中,其内源性干扰素系统和Th1应答反应都是有显著差异的,细胞免疫对病毒感染的痊愈起主导作用。

抗粘病毒1和2′5′-寡腺苷酸合成酶1基因与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞中抗粘病毒1(MX1)基因和2′5′-寡腺苷酸合成酶(OAS)1基因的实时定量表达水平与SLE临床表现及病情活动度的相关性。方法收集50例SLE患者,20例非SLE其他自身免疫性疾病患者,25例健康对照人群的临床资料,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用SYBR green dye I实时定量聚合酶链反应(QT-PCR)在ABI PRISM 7000基因测序仪上检测患者和对照组的MX1和OAS1定量表达水平(以ΔCt值表示)的差异,并与各临床指标及病情活动度进行相关性分析。结果①SLE患者总体的MX1 mRNAΔCt值(3.55±1.39)高于非SLE患者组(2.31±0.52,P=0.000)和正常人(2.23±1.05,P=0.000)。②SLE患者组的OAS1 mRNAΔCt值(4.45±1.56)高于非SLE患者组(3.03±0.76,P=0.000)和正常人(2.75±0.64,P=0.000)。③SLE患者组的OAS1 mRNAΔCT值与SLEDAI积分之间有相关性(r=0.338,P=0.019),与血浆IgA水平有相关性(r=0.475,P=0.001)④SLE患者组的MX1 mRNAΔCT值与SLEDAI积分之间无相关性(r=0.064,P=0.661),与甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)2、4 h尿蛋白均有相关性(r=0.428,P=0.003;r=0.383,P=0.009;r=0.394,P=0.007;r=0.316,P=0.025)。⑤在有关节炎的SLE患者中,其MX1和OAS1表达水平升高更明显(3.04±1.42,P=0.004;3.89±1.49,P=0.006)。结论MX1与OAS1在SLE患者中均有表达上调现象,OAS1 mRNA实时表达定量水平对SLE患者的病情活动度判断有意义。二者作为Ⅰ型干扰素诱导表达的基因在SLE发病中均有各自作用。

2′,5′-寡腺苷酸合成酶L和干扰素诱导蛋白2基因与系统性红斑狼疮相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞中干扰素诱导表达2′,5′-寡腺苷酸合成酶L(OASL)和干扰素诱导蛋白2(IFIT2)基因的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和疾病活动的相关性。方法收集50例SLE患者,25例非SLE自身免疫性疾病患者,25例健康对照人群的临床资料,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用SYBR green dyeI实时定量聚合酶链反应(PCR)在Bio-Rad 96孔基因测序仪上检测SLE患者组和非SLE患者组及健康对照组的OASL和IFIT2 mRNA定量表达水平(以ΔCT表示)的差异,并根据各病情不同进行分组比较,以及对其与SLEDAI和临床各相关指标相关性进行评价分析。结果SLE患者总体OASLmRNAΔCT值(4.83±0.41)与非SLE患者(3.26±0.47)差异有统计学意义(P=0.029),与健康对照者(3.07±0.54)差异有统计学意义(P=0.014)。SLE患者总体IFIT2 mRNAΔCT值(2.85±0.41)与非SLE患者(1.19±0.52)差异有统计学意义(P=0.019),与健康对照组(1.07±0.47)差异有统计学意义(P=0.011)。SLE患者总体OASLmRNAΔCT值与SLEDAI有相关性(r=0.324,P=0.022),与免疫球蛋白A(IgA)有相关性(r=0.357,P=0.012),IFIT2 mRNAΔCT值与SLEDAI有相关性(r=0.399,P=0.004),与血白细胞有相关性(r=0.393,P=0.005),与IgA有相关性(r=0.283,P=0.049)。结论OASL和IFIT2在SLE患者中均表达上调,对SLE患者的病情活动度判断有意义,两者在SLE发病中均有一定作用,抑制其过度表达可能成为治疗SLE的新方法。

腹透液的生物相容性对2′,5′-寡腺苷酸合成酶活性的影响

目的 :观察使用商业腹透液时 2′ ,5′-寡腺苷酸合成酶活性的动态变化和腹膜病理改变 ,探讨长期腹膜透析腹透液生物相容性对机体免疫功能影响和腹膜间皮的病理改变。方法 :①使用 3种常用腹透液建立腹膜透析动物模型 ;②用纸层析法动态测定实施和停止腹膜透析时 ,2′ ,5′ -寡腺苷酸合成酶活性的消长 ;③在光镜下观察腹膜间皮病理变化。结果 :腹膜透析时 ,各腹膜透析组和生理盐水组 2′,5′ -寡腺苷酸合成酶活性均升高 ;停止腹膜透析 ,生理盐水组 2′ ,5′-寡腺苷酸合成酶活性恢复正常 ,各腹膜透析组则持续降低 ;在腹膜透析时 ,各腹膜透析组均发生程度不等的间皮细胞脱落、腹膜增厚和急、慢性炎症细胞浸润 ;而Baxter组无急性炎症发生。随着停止腹膜透析时间延长 ,腹膜透析组病理改变逐渐修复。结论 :长期腹膜透析时 ,腹膜透析液对机体免疫功能均有长时间抑制 ,并造成不同程度的腹膜病理改变。腹透液的非生物相容性是导致机体免疫功能降低 ,腹膜损伤的重要因素。

2'-5'寡聚腺苷酸合成酶的抗病毒作用及机制研究进展

2'-5'寡聚腺苷酸合成酶(OAS)是干扰素诱导产生的重要抗病毒蛋白,可利用细胞内游离的三磷腺苷合成2',5'-磷酸二酯键连接的寡聚腺苷酸(2-5As),后者活化核糖核酸酶L(RNase L),进而抑制DNA病毒和RNA病毒感染。OAS也是细胞内识别病毒双链核糖核酸(dsRNA)的模式识别受体,能够识别具有一定长度或基序特征的病毒dsRNA分子,避免自身免疫应答产生,维持细胞稳态。本文对活化OAS蛋白的dsRNA特征、活化机制、OAS的抗病毒作用以及病毒逃逸OAS-RNase L通路的作用机制进行总结,以期为后续研究提供参考。

腺苷酸活化蛋白激酶及脂肪酸合成酶在乳腺癌合并2型糖尿病患者中表达水平分析

目的研究腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及脂肪酸合成酶(FASN)在乳腺癌合并2型糖尿病患者中表达水平。方法选取2012年5月至2016年5月入住我院确诊为乳腺癌的女性患者共160例,其中80例乳腺癌患者合并患有2型糖尿病,采用免疫组织化学方法对AMPK和FASN在患者乳腺中的表达水平进行测定和统计分析。结果腺苷酸活化蛋白激酶在乳腺癌患者组中的表达水平高于乳腺癌合并2型糖尿病患者组的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);脂肪酸合成酶在乳腺癌患者组中的表达水平低于乳腺癌合并2型糖尿病患者组的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AMPK和FASN可能是肿瘤组织产生和进一步发展过程中的重要影响因子,在此过程中AMPK活性受到抑制,FASN活性得到增强。

2',5'-寡腺苷酸合成酶基础活性对干扰素α治疗慢性丙型肝炎信号传导的影响机制研究

目的观察慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中2',5'-寡腺苷酸合成酶(2-5AS)基础活性对干扰素(IFN)信号分子改变的影响,探讨IFN-α治疗慢性丙型肝炎的作用机制。方法选择60例慢性丙型肝炎患者,抽取外周血分离出PBMC,每份标本进行2-5AS基础活性测定后分为实验组和对照组,对照组PBMC体外培养时不加IFN-α,实验组PBMC体外培养时加入IFN-α。培养24 h后,测定PBMC中2-5AS活性、IFN-α受体(IFN-αR)、信号传导及转录激活因子(Stat)1、Stat2、两面神激酶1(Jak1)和酪氨酸激酶2(Tyk2)等指标。结果实验组PBMC培养24 h后2-5AS活性、Jak1、Stat1、Stat2和Tyk2等表达明显增高(P<0.05),IFN-αR表达降低(P<0.05)。2-5AS基础活性与IFN-α刺激下PBMC中2-5AS、Tyk2和Stat1的表达呈负相关(P<0.05),而与IFN-αR、Jak1和Stat2的表达无相关性(P>0.05)。结论 2-5AS基础活性可下调PBMC对外源性IFN-α的敏感性,Stat1、Tyk2表达降低可能是下调机制发生的原因。

HCV基因型与2′-5′寡腺苷酸合成酶活性的相关性研究

目的 了解丙型肝炎病毒基因型在不同人群中的分布规律与流行优势型及其与 2′ 5′寡腺苷酸合成酶 (2 5AS)的相关性。方法 分别对门诊体检、住院病人和血液透析患者抗 HCVIgG阳性标本 ,采用RT nested PCR方法检测HCVRNA ;用 5′端非编码区 (5′ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型 ;用PEI cellulose薄板层析法检测外周血单个核细胞的 2 5AS。结果 三组人群HCVRNA感染率分别为 1 .2 1 %、2 .6 6 %、38.84 % ;HCV基因型以 1b亚型为主 ,1b及 1b的相关型占 91 .6 7%。以ATP转化率表示 2 5AS活性水平 ,1b型和 1b相关的混合感染 2 5AS活性显著升高。而其他基因型与健康对照组无明显差别。结论 2 5AS活性的基础水平显著升高可能是HCV

中药复方对肝纤维化小鼠2′,5′-寡腺苷酸合成酶活性影响和超微结构研究

目的:研究中药复方(二参泽术汤和丹参桃芎汤)防治肝纤维化时,对机体免疫功能的影响和肝细胞超微结构的改变。方法:制备小鼠肝纤维化模型;观察其病理组织学和超微结构,并测定2′,5′-寡腺苷酸合成酶活性。结果:模型组肝细胞广泛脂肪样变性,汇管区大量胶原纤维增生。2′,5′-寡腺苷酸合成酶水平低下。二参泽术汤预防组肝组织超微结构基本正常,未见有胶原纤维增生;治疗组肝细胞间有少量胶原纤维增生。该药预防组和治疗组2′,5′-寡腺苷酸合成酶活性显著高于模型组(P 均<0.01)。丹参桃芎汤预防组和治疗组有严重的细胞变性坏死,胶原纤维大量增生,2′,5′-寡腺苷酸合成酶活性与对照组比较,有明显降低(P<0.01)。结论:在肝纤维化治疗时,机体免疫功能的高低与疗效有密切关系;二参泽术汤对提高肝纤维化小鼠机体的免疫功能和防治肝纤维化的效果均优于用丹参桃芎汤。2′,5′-寡腺苷酸合成酶的测定能反映肝纤维化的转归和预后。

慢性乙型肝炎2',5'—寡腺苷酸合成酶活性与干扰素疗效的关系

探讨慢性乙型病毒性肝炎患者血液中单个核细胞的 2 ',5 '—寡腺苷酸合成酶 (2 ',5 '-OAS)活性与干扰素疗效的关系 ,为临床预测干扰素疗效 ,避免盲目使用干扰素提供依据。将 17例HBeAg、HBV -DNA双阳性的慢乙肝患者干扰素治前、治疗一周及治疗三月后进行 2 ',5 '-OAS检测。结果示 11例治前 2 ',5 '-OAS活性较低 ,治疗一周有明显升高。其中 8例HBeAg、HBV -DNA双项转阴。 3例HBeAg单项转阴。其余 6例治疗前 2 ',5 '-OAS活性较高 ,治后 1周升高幅度不大 ,双项均无转阴。提示 2 ',5 '-OAS的水平可能是临床预测干扰素疗效的指标之一。

相对荧光定量法检测人体2',5'-寡聚腺苷酸合成酶相对表达水平

目的:建立相对荧光实时定量法(RT-QPCR 2_(-ΔΔCt)),考察聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液临床Ⅰ期试验中给药后外周全血中2',5'-寡聚腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)相对药前点的相对表达水平变化。方法:根据Gen Bank中查询的2',5'-OAS的序列构建质粒,并纯化定量作为方法标准品,制作标准曲线及验证样品,考察该方法的准确度及精密度;采用RT-QPCR 2_(-ΔΔCt)方法,以个体药前样品为对照,GAPDH为内参,比较考察给予聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液(受试品160μg/人)与阳性对照药派罗欣(180μg/人)后外周血中2',5'-OAS mRNA表达变化倍数;同时,基于ELISA方法对2',5'-OAS蛋白浓度表达进行分析。结果:2',5'-OAS标准曲线有相对较好的线性(R2=0.99),cDNA 2',5'-OAS与2',5'-OAS标准品的PCR产物熔解曲线温度一致,说明引物特异性好。2个剂量组中m RNA表达水平均在20 h左右达到峰值,其中160μg剂量组中峰浓度较高。ELISA检测血清中2',5'-OAS浓度无明显变化。结论:与传统蛋白水平检测的ELISA方法相比,RT-QPCR 2_(-ΔΔCt)灵敏度较高,可以作为一种检测外周全血中生物标志物的替代方法,以给予药效学研究的临床支持。

cGAS蛋白促进PCV-2茎环结构诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应研究

为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15细胞中表达;将SL-DNA转染至过表达及敲除cGAS蛋白的PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR检测细胞中cGAS、干扰素刺激基因(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的表达水平。结果表明:SL-DNA转染后,PK15细胞中cGAS蛋白表达量上升;过表达cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著升高(P<0.01);敲除cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著降低(P<0.01)。说明cGAS蛋白可以识别PCV-2的茎环结构,并且促进其诱导的cGAS-STING信号通路天然免疫反应。

腺苷酸琥珀酸合成酶双基抑制剂类似物的合成及生物活性

以丁内酯为原料,通过缩合、水解、亚胺化、关环、还原、偶联、甲酰化以及脱保护等反应设计并探索了腺苷酸琥珀酸合成酶双基抑制剂类似物的合成方法,目标化合物的结构经1H NMR和HR-ESI-MS数据进行表征.初步生物活性测试结果表明,目标化合物在100μg/m L浓度下对油菜和稗草具有较弱的抑制活性.

2',5'-寡腺苷酸合成酶1基因多态性与自发性早产和胎膜早破易感性的病例对照研究

目的探讨2',5'-寡腺苷酸合成酶1(OAS1)基因多态性和自发性早产和胎膜早破易感性的关系。方法收集自发性早产儿599例作为病例组,其中包括胎膜早破171例;孕母无自发性早产和胎膜早破病史的673例足月儿作为对照组。采用病例-对照研究,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析检测OAS1内含子区rs10774671位点的单核苷酸多态性。结果病例组和对照组两组间OAS1 rs10774671基因型AA、GA、GG以及等位基因A、G的频率之间的差异均无统计学意义;有无胎膜早破病例组分别和对照组比较,上述频率之间的差异均无统计学意义;不同胎龄的自发性早产亚组分别和对照组比较,上述频率之间的差异均无统计学意义。结论 OAS1基因多态性与自发性早产和胎膜早破易感性之间缺乏关联。

猪2′,5′寡腺苷酸合成酶OAS1a基因克隆与序列分析及其在Marc-145细胞上对PRRSV复制的影响

旨在探索猪2’，5’寡腺苷酸合成酶OASla对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRs）的复制是否有抑制作用，进而为探索抑制病毒复制寻求新的思路。从PAM猪肺泡巨噬细胞中克隆了猪2’，5‘寡腺苷酸合成酶OASln基因，将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1中，测序与序列分析之后将该基因转染Marc-145细胞，然后接种PRRSV病毒，与对照组比较病毒的抑制效果。结果显示，病毒的滴度明显下降，病毒的RNA水平也明显下降，由此推断猪2’，5，寡腺苷酸合成酶OAS1a可以在Marc-145细胞上抑制PRRS的复制。

2′-5′寡腺苷酸合成酶1基因多态性与乙型肝炎病毒易感性和抗病毒疗效的相关性

人体感染HBV后,可自身清除病毒或持续性感染,在成人感染者中有5%～10%不能清除病毒,导致慢性病毒携带状态。其造成肝损伤的程度不一,发展为肝硬化或肝癌进程不一、药物治疗的反应个体差异亦很大,宿主的遗传因素对乙型肝炎的这些临床转归起了关键作用。目前干扰素诱导抗病毒基因2′-5′寡腺苷酸合成酶1（OAS1）与HBV易感性和抗病毒疗效的相关性研究鲜见报道，

2',5'-寡聚腺苷酸合成酶作为抗病毒药物乐复能的临床药效评价指标的研究

目的：考察抗病毒蛋白I期临床试验受试者的2＇,5＇-寡聚腺苷酸合成酶水平,初步评价抗病毒蛋白乐复能的药效学特性。方法：采用2＇,5＇-寡腺苷酸（2-5A）放免检测试剂盒对I期临床试验血样进行分析,观察2＇,5＇-OAS水平。结果：10μg单次给药后2＇,5＇-OAS活性24-48 h达峰,至给药后120 h,除3#受试者外基本恢复至本底水平。10μg每日连续给药后血清2＇,5＇-OAS活性迅速升高,药后d 5变化趋势接近平台期,至第1次给药后25 d仍能维持在较高水平,至药后39 d,患者血清2＇,5＇-OAS活性值明显降低。10μg隔日连续给药组血清2＇,5＇-OAS活性变化趋势与每日连续给药组近似,但药后39 d尚能维持在较高水平。20μg隔日连续给药组连续7 d给予10μg乐复能后,血清2＇,5＇-OAS活性已升高至平台期,随后的20μg隔日连续给药将血清2＇,5＇-OAS活性值一直维持在较高的水平至连续给药结束。结论：2＇-5＇寡聚腺苷酸合成酶可以作为乐复能的临床疗效评价指标。

干扰素抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS在肝胚瘤细胞株中的差异表达

目的了解α干扰素(interferon-α,IFN-α)诱导的抗病毒蛋白MxA和2',5'-寡腺苷酸合成酶(2',5'-OAS)在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2.2.15细胞中的表达情况。方法将培养的HepG2和HepG2.2.15细胞用IFN-α刺激6h,分离细胞总RNA,经逆转录、32P标记后与尼龙膜上的探针微矩阵(macroarray法)进行分子杂交;并以此来分析HepG2和HepG2.2.15细胞IFN抗病毒基因表达谱。用免疫印迹分析IFN抗病毒蛋白;如,MxA、2',5'-OAS等在肝胚瘤细胞中的表达。结果分析发现在HepG2和HepG2.2.15细胞仅有部分IFN诱导基因表达,多数IFN诱导基因呈低表达或不表达。比较HepG2和HepG2.2.15细胞,发现两者表达IFN诱导基因有差异,即对IFN应答有差异。研究中发现,MxA蛋白在HepG2.2.15细胞中不表达,而在HepG2细胞中却能正常表达。另一种重要的IFN抗病毒蛋白2',5'-OAS,在HepG2.2.15和HepG2细胞中均能表达;在拉米夫啶处理下,HepG2.2.15细胞甚至比HepG2细胞能更好地表达。结论IFN抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS在人肝胚瘤细胞株HepG2和HBV稳定转染的HepG2.2.15细胞中表现出差异的表达模式;HBV及其抗原成分影响人肝胚瘤细胞株的IFN抗病毒基因表达。