儿童期17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症的临床及遗传学特征

目的探讨17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyase deficiency,17OHD)在儿童期的临床及遗传学特征。方法回顾性分析2016年1月至2022年12月在郑州大学附属儿童医院确诊的4例17OHD患儿的临床表现、实验室及影像学检查结果、基因突变特点,并结合文献进行汇总分析。结果4例患儿确诊时,年龄为11月21天至10岁6月;染色体核型均为46,XY;社会性别为男性1例,女性3例;主诉为阴茎短小1例、腹股沟肿块1例、高血压2级2例;彩超检查分别在阴囊、腹股沟、腹股沟内环口发现睾丸3例。4例患儿8点皮质醇、睾酮、雄烯二酮水平均降低,促肾上腺皮质激素、孕酮、促黄体生成素、卵泡刺激素水平均升高,17羟孕酮均正常。3例患儿血钾轻度减低(3.44~3.48 mmol/L)。CYP17A1纯合突变1例,复合杂合突变3例,其中c.563 A>G和c.436+1G>T为未报道过的新突变位点,3例均存在c.985_987delinsAA变异;4例均接受口服氢化可的松治疗。结论外生殖器异常、腹股沟/阴唇包块及高血压是46,XY的17OHD儿童期的主要表现,早期规范治疗可减少并发症,CYP17A1 c.985_987delinsAA变异可能为我国17OHD患儿的热点变异。

寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶（ADSL）基因mRNA的差异表达水平，构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL，转化大肠杆菌BL21（DE3），筛选阳性克隆，IPTG诱导表达，通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL，利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞，并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测。结果表明：ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp，编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征，在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变，该突变使该位点变为核呼吸因子2（NRF-2）结合位点;经SDS-PAGE电泳显示，pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现，与预期分子量大小一致，等电点为6.79，纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白。pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h，转染率在26.4%~41.2%之间，绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中，随表达量的增加，绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状，经药物筛选和克隆化培养，获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株，经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中，获得正常表达。研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构，研究其生物学功能奠定基础。

草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶克隆及序列分析

腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全长和基因组DNA全长。该基因全长1584 bp,包含一个1449 bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,与其他脊椎动物比对显示,其序列具有较高的保守性。草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因组DNA由13个外显子和12个内含子组成,其外显子拼接位点非常保守,遵循GT-AG原则。

几种离子对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性和最适pH值的影响

在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ８．０的１００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，当离子浓度＜１５０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｋ＋和Ｎａ＋离子是豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶（ＡＳＡＬ）的激活剂，其最适浓度约为７５ｍｍｏｌ／Ｌ，可分别提高酶活性４０％和３５％。Ｍｇ２＋离子是ＡＳＡＬ的抑制剂，能拮抗Ｋ＋和Ｎａ＋离子的激活效应。ＨＰＯ二４离子可显著降低酶活性，抑制效应与ＨＰＯ二４离子浓度呈正相关。在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ６．６～８．０的１００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为７．４，而在含１５％（ｖ／ｖ）甘油和ｐＨ７．４～８．６的Ｔｒｉｃｉｎｅ缓冲液中，ＡＳＡＬ的最适ｐＨ值约为８．２。

甘油对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性的影响

】在缓冲液中添加１５％（Ｖ／Ｖ）甘油可使腺苷酸琥珀酸裂解酶（ＡＳＡＬ）的活性提高２４％，对防止ＡＳＡＬ变性失活的效果显著。在４℃静置８，２３和５２ｈ后，ＡＳＡＬ活性分别为原活性的９３％，７４％和６４％，而不加甘油的对照，ＡＳＡＬ活性仅分别为原活性的３０％，３％和０。

10例17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症临床和遗传学研究

目的回顾10例17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的资料,分析17OHD的临床特征和分子遗传学特点。方法收集患者临床、基础激素测定和影像学检查资料,对患者及其直系亲属的基因型采用PCR扩增产物直接测序方法明确;对于杂合突变,采用亚克隆方法进一步明确。结果10例患者均存在第二性征不发育、高血压、低血钾;基础激素测定示睾酮、雌二醇、17羟孕酮、皮质醇明显低于正常,而促性腺激素和促肾上腺皮质激素反馈性增高,双侧肾上腺增生。基因诊断共检测到5种基因型;替代和缺失的复合突变占80%;其中D487_F489del3个氨基酸的缺失累及到了4个家系7例患者(70%),共有45%的等位基因受累,是频率最高的突变。结论对于第二性征不发育的患者,应注意该病的鉴别诊断;D487_F489del是中国人的17OHD最常见的突变类型。

1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症的临床和分子遗传分析

目的通过对1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的临床特点和基因突变研究,初步探讨17OHD临床表现的基因分子机制。方法收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点。结果患者临床表现及内分泌功能检查完全符合17OHD,PCR产物测序发现,CYP17A1基因第6外显子329位密码子发生了TAC→AA的纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并形成了一个只包含418个氨基酸的截短蛋白,从而使该蛋白完全缺乏17α-羟化酶和17,20碳链裂解酶活性。结论CYP17A1突变导致的P450 c17蛋白的结构改变是该17OHD患者临床表现的基因分子基础。

两例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症分子遗传学研究

目的从分子遗传学方面初步探讨两例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)患者的突变性质。方法用患者外周血白细胞DNA进行CYP17A1基因的8个外显子PCR扩增,并通过序列测定确定突变位置和性质。结果两患者均为CYP17A1基因突变的遗传复合体。病例1为Y329K,418X/P428L,病例2为Y329K,418X/P409R,Y329K,418X为插入缺失突变(TAC329AA),导致移码突变,在418位产生终止密码提前终止了蛋白质翻译。结论通过CYP17A1基因突变分析,确诊了两例17OHD患者。

2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者临床及遗传学分析

目的分析2例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症患者的临床特点和分子遗传学特征。方法收集2007年9月—2008年7月在河南省人民医院内分泌科治疗的2例患者临床、基础激素测定和影像学检查资料,对患者进行CYP17A1基因检测。结果 2例患者血压高于正常值,血钾低于正常值,第二性征发育不良。激素测定示血皮质醇水平低于正常,促肾上腺皮质激素反馈性增高;肾素活性受抑制;睾酮、雌二醇低于正常值,而促性腺激素增高。CT示双侧肾上腺增生。CYP17A1基因检测显示,2例患者基因第6外显子上发现c.1 045del和c.1 047C>A,329位密码子发生了TAC-AA纯合突变,引起Tyr329Lys错义突变及以后密码子的移码突变,并提前产生一个终止密码子(418TGA)。结论高血压伴低血钾患者同时存在性发育不良,应考虑17α-羟化酶缺陷症的可能,CYP17A1基因突变导致的P450c17蛋白的结构改变是17α-羟化酶缺陷症的分子基础。

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症研究进展

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)是先天性肾上腺增生的少见类型。临床主要表现为低肾素性高血压、低血钾,女性性幼稚、原发性闭经及男性假两性畸形。本文将就17OHD发生的病理生理和分子遗传学机制,以及部分少见类型的临床特点进行综述。

17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症合并睾丸精原细胞肿瘤一例的临床和分子遗传学分析

目的通过1例17α-羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17-OHD)合并睾丸精原细胞瘤患者的临床及分子生物学研究,并结合文献复习该病的发病机理。方法患者21岁,社会性别女性,临床诊断17-OHD)。收集患者的临床资料、生化检查、影像学检查、病理结果。取患者外周血白细胞,提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增CYP17A1基因的8个外显子及其内含子的边界,并通过测序确定突变位点和性质。结果患者临床表现、实验室检查、内分泌功能试验、影像学检查、病理等符合17-OHD合并睾丸精原细胞肿瘤的诊断。CYP17A1基因序列分析发现该患者携带CPY17A1基因为复合杂合突变,分别为第8外显子缺失3个氨基酸(D487～F489)和第6外显子第329密码子TAC→AA,致成其后的移码突变,并提前产生一终止密码子(418TGA)。结论通过该患者临床诊治,使我们对该疾病的认识进一步加深;通过CYP17A1基因突变分析,从分子遗传学方面证实患者的诊断。

CYP17A1基因的复合杂合突变导致17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症

目的通过1例17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶缺陷症(17-OHD)患者的临床特点和基因突变分析,探讨17-OHD的基因分子机制及突变对P450 c17蛋白功能的影响。方法收集患者临床资料,提取患者外周血白细胞DNA,PCR扩增CYP17A1基因的8个外显子及内含子边界,测序确定CYP17A1基因的突变位点,用突变位点保守性分析和计算机模拟P450 c17蛋白三维结构,分析突变对P450 c17蛋白功能的影响。结果患者临床表现及内分泌功能检查完全符合17-OHD特点,PCR产物和克隆测序发现,CYP17A1基因的一个等位基因的第2外显子125位密码子发生了CGA→CAA的突变,导致Arg125 Gln错义突变,另一个等位基因的第6外显子的第360和361密码子缺失G核苷酸及C转换为A核苷酸,导致Leu361Phe错义突变和以后的移码突变,形成一个只包含417个氨基酸的截短蛋白,该蛋白缺乏17α-羟化酶和17,20碳链裂解酶催化活性部位。通过P450 c17蛋白分子三维建模分析表明,121位色氨酸与血红素和125位精氨酸分别形成氢键,当125位精氨酸突变为谷氨酰胺时,121位色氨酸不能再与125位谷氨酰胺形成氢键,从而使P450 c17蛋白分子结构的稳定性受到影响,影响了其功能。结论通过CYP17A1基因突变分析,进一步从分子遗传学方面证实了患者的临床诊断,CYP17A1突变导致的P450 c17蛋白的结构改变是该17-OHD患者临床表现的基因分子基础。

17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症致先天性肾上腺皮质增生病例分析

目的:分析同一家系共患17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症(17α-hydroxylation/17,20-lyase deficiency,17OHD)两“姐妹”的临床表现和家系分析,并结合国内外文献报道总结该病的特点,以提高临床医生对其认识。方法:分析两例17OHD“姐妹”的临床表现、实验室和影像学检查结果,采集患者及其父母亲外周血,进行染色体核型分析和CYP17A1基因序列分析,使用Sanger测序法进行一代验证和家系验证。结果:两“姐妹”的临床表现各异。先证者(染色体核型为“46XY”)表现为难以控制的高血压、低血钾,伴有第二性征发育异常;先证者姐姐(染色体核型为“46 XX”)则以“月经紊乱”为首发症状,随着病程进展才逐渐出现轻度血压增高。实验室检查显示两者ACTH、孕酮水平均增高,醛固酮水平正常。两“姐妹”CYP17A1基因第8外显子均存在c.1283C>T(p.Pro428Leu)纯合突变,导致第428位脯氨酸变异为亮氨酸。结论:17OHD患者临床表现复杂,对疑似患者尽早行基因检测以明确诊断。

中国人17α-羟化酶/l7,20-碳链裂解酶缺陷症遗传特点的初步探讨

目的探讨中国人17α-羟化酶/l7,20-碳链裂解酶缺陷症(17OHD)种族特异性的基因突变特点。方法采集3个无血缘关系的17OHD家系的患者及其亲属的外周血,抽提DNA后,通过PCR、亚克隆测序、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)等方法对致病基因17α羟化酶基因(CYP17A1)进行突变分型,并对文献报道的26例中国17OHD患者的资料进行回顾性分析。结果 1号家系先证者为8号外显子487-488-499密码子处9碱基纯合缺失(GACTCTTTCdel),致天冬氨酸-丝氨酸-苯丙氨酸缺失(D487_S488_F489del),翻译后蛋白质肽链长度缩短;2号家系先证者为6号外显子329密码子处TAC→AA,纯合插入缺失突变致酪氨酸→赖氨酸,并在418密码子处提前出现终止密码,形成截短型蛋白(Y329K,418X);3号家系先证者为前两种突变类型的复合突变(Y329K,418X联合D487_S488_F489del)。对文献报道的中国26例17OHD病例进行基因突变分析,发现其基因突变遗传规律有明显的种族特异性:6号外显子受累程度最高,等位基因比例为55.77%(29/52);其次为8号外显子,等位基因比例为40.38%(21/52),6和8号外显子等位基因总占有率达96.15%(50/52);26例患者中,Y329K,418X纯合子共9例(基因型比例为34.62%),D487_S488_F489del纯合子共5例(基因型比例为19.23%),两者相加共14例(基因型比例为53.85%);Y329K等位基因比例为42.31%(22/52),D487_S488_F489del等位基因比例为30.77%(16/52),两者的等位基因比例达73.08%。结论17OHD在中国人中遗传具有种族特异性,第6号外显子TAC329AA突变形成截短型蛋白Y329K,418X和第8号外显子GACTCTTTC del导致D487_S488_F489del为中国人17OHD最常见的两种突变类型。

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症1例报告

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)是先天性肾上腺皮质增生症的一种少见类型。本文报道1例17OHD,患者社会性别为女性,因高血压6年伴低血钾入院。第二性征缺如,外生殖器呈女性幼稚型。有双侧隐睾存在;染色体为47,XY;皮质醇及雌、雄激素均降低,ACTH升高;基因分析示CYP17第6号外显子6436-6438(TAC→AA)发生纯合突变。行双侧隐睾切除术,地塞米松、雌激素长期维持治疗。该病例提示对高血压、低血钾且无青春期发育的患者,应警惕17OHD。糖皮质激素治疗可维持正常血压、血钾,需终身服用。男性患者隐睾切除后应根据其社会及心理性别选择相应的性激素替代治疗。

1例临床诊断为17-α羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症患儿及其父母和哥哥的基因检测分析

目的了解17-α羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyasedeficiency,17OHD)患儿的基因变异及遗传情况。方法1例主要临床表现为双侧腹股沟区肿物、外生殖器女性化的假两性畸形患儿,临床诊断为17OHD,抽取患儿、患儿父母及哥哥的外周静脉血,采用高通量测序技术(High-ThroughputSequencing,HTS)进行全基因组外显子测序,分析患儿、患儿父母及哥哥的基因情况。结果患儿细胞色素P450c17酶基因(Cytochrome P450c17 enzymegene,CYP17A1 gene)第6外显子存在c.987delC(p.Tyr329fs)纯合突变;患儿父母及其哥哥均存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)杂合突变。结论17OHD患儿存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)纯合突变,其父母、哥哥均存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)杂合突变。17OHD患儿的外显子突变遗传自父母。

17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症1例及文献复习

目的通过1例17α-羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症(17α-OHD)患者的临床及基因分析,并结合文献复习本病及其它类型先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)的临床特点。方法收集患者的临床资料、实验室及影像学检查结果,对患者及其一级亲属CYP17A1基因采用PCR扩增产物直接测序明确突变位点。结果基因测序发现该患者CYP17A1第6号外显子c.985-987delins AA纯合突变,导致第329位密码子TAC→AA,17α-羟化酶/17,20-裂解酶功能的完全丧失,明确17α-OHD诊断。结论临床中对于合并高血压、低血钾伴青春期不发育的女性表型患者应注意完善核型及基因检测。

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症的研究进展

17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)是先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的一种罕见类型,是由CYP17A1基因缺陷引起的一种常染色体隐性遗传病。CYP17A1基因突变导致细胞色素P450c17酶的功能缺陷,使糖皮质激素和性激素合成受阻、盐皮质激素堆积,临床主要表现为高血压、低血钾、第二性征发育不良,其中男性患者呈性幼稚、原发性闭经,女性患者呈女性外生殖器或假两性畸形。由于临床上对17OHD认识不足,该病特别容易漏诊或误诊,严重影响患者的预后及生活质量。为提高对该病的认识,本文将就17OHD发生的流行病学、发病机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及预后进行综述。

17a-羟化酶/17,20-碳裂解酶部分缺陷合并肾上腺腺瘤1例报道

0引言17a-羟化酶/17,20-碳裂解酶缺陷症是一种非常罕见的常染色体隐性遗传的先天性肾上腺增生疾病,由CYP17A1基因变异导致[1]。临床症状主要表现为高血压、低血钾、男性假两性畸形[2]。17a-羟化酶/17,20-碳裂解酶缺陷合并肾上腺腺瘤则更加罕见,相似病例国内外仅见少量报道[3-5]。现将昆明医科大学第一附属医院收治的1例病例报道如下。

精氨酰琥珀酸尿症导致新生儿死亡1例报告

目的报道1例早发型精氨酰琥珀酸尿症病例。方法女性患儿,于出生第2天发病,入院后经临床及实验室检查、基因检测获得诊断。结果患儿血氨显著增高,肝功能异常,伴代谢性酸中毒,血钾、血钙降低。血液瓜氨酸显著增高(1 098.12μmol/L)、精氨酸降低,尿乳清酸、尿嘧啶、精氨酰琥珀酸显著增高。经精氨酸支持、低蛋白饮食治疗无效,病情进行性加重,于生后23 d死亡。基因分析证实精氨酰琥珀酸裂解酶ASL基因存在c.544C>T(p.R182X)和c.706C>T(p.R236W)复合杂合突变,父母各携带1个杂合突变。结论此例为国内首次报道的早发型精氨酰琥珀酸尿症,死亡后获得确诊。精氨酰琥珀酸尿症是严重的遗传代谢疾病,临床诊断困难,生化特点为血瓜氨酸及尿精氨酰琥珀酸显著增高,ASL基因检测是诊断的关键。