阻滞腺苷A2A受体抑制胶质瘤细胞干性特征并诱导保护性自噬

目的 探究阻滞腺苷A2A受体(A2AR)对胶质瘤细胞干性特征与保护性自噬的影响。方法 将人胶质瘤U87细胞分为四组:对照组、shNC组、shA2AR组、SCH58261组,分别将shNC、shA2AR转染至shNC组与shA2AR组细胞中,SCH58261组使用A2AR拮抗剂SCH58261处理细胞,收集处理后的4组U87细胞,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中A2AR mRNA表达水平,蛋白质免疫印记(Western Blot)检测细胞中A2AR蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期分布,细胞肿瘤球形成实验检测细胞干性,LC3自噬双标腺病毒实验检测自噬溶酶体与自噬体形成,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中干细胞标记物巢蛋白(Nestin)、SRY相关高迁移率族盒蛋白2(SOX2)、八聚体结合转录因子4(OCT4)以及自噬相关分子微管相关蛋白3(LC3)II/LC3I、Beclin1的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,shA2AR组和SCH58261组U87细胞中A2AR mRNA相对表达量与蛋白相对表达量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);G1期细胞比例增加,差异具有统计学意义(P<0.05);S期细胞比例减少,差异具有统计学意义(P<0.05);肿瘤球形成数目减少,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞中红色斑点代表的自噬溶酶体与黄色斑点代表的自噬体均明显增多,细胞凋亡率增加,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞中Nestin、SOX2、OCT4蛋白相对表达量减少,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,LC3II/LC3I蛋白比值升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Beclin1蛋白相对表达量也增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 阻滞A2AR能够使人胶质瘤U87细胞发生G1期阻滞,抑制肿瘤细胞干性特征,并促进保护性自噬,诱导细胞发生凋亡。

腺苷A2a受体/Krüppel样因子5对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的:探讨腺苷A2a受体/Krüppel样因子5(KLF5)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响。方法:42只250~300 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组,n=6)、缺血再灌注组(I/R组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体特异性激动剂CGS21680组(I/R+CGS组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体拮抗剂ZM241385组(I/R+ZM组,n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支再灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。I/R+CGS组于再灌注前5 min静脉注射CGS21680后持续泵注60 min,CGS+ZM组于再灌注前5 min静脉注射ZM241385。于造模前,缺血5 min,再灌注10 min、45 min及120 min时分别记录各组大鼠的心率(HR)、平均动脉压(MAP)以及心率与收缩压乘积(RPP)。再灌注结束后取血液,酶联免疫吸附测定法检测血清心肌钙蛋白I(c TnI)和成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平。再灌注结束后再次结扎左冠状动脉前降支,采用TTC染色法确定心肌梗死面积。处死大鼠,采用Western blot法检测缺血区心肌组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和KLF5的蛋白表达水平。结果:各组造模前、Sham组各时间点HR、MAP及RPP差异无统计学意义。与Sham组比较,I/R组缺血5 min时HR、MAP及RPP降低;与I/R组比较,I/R+CGS组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP降低,I/R+ZM组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP升高(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积增大,血清cTnI水平升高,FGF21水平降低;与I/R组比较,I/R+CGS组心肌梗死面积减小,血清cTnI水平降低,FGF21水平升高,I/R+ZM组心肌梗死面积增大,血清c TnI水平升高,FGF21水平降低(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高;与I/R组相比,I/R+CGS组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显降低,I/R+ZM组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:激活腺苷A2a受体可抑制缺血心肌细胞中KLF5表达,降低心肌梗死再灌注损伤程度,缓解心肌细胞缺氧状态,促进心肌细胞损伤后修复,对缺血再灌注损伤大鼠心肌起保护作用。

电针联合人脐带间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠血脑屏障及腺苷A2A受体、GSK-3β/β-catenin表达的影响

【目的】观察电针百会、风府、双侧肾俞穴联合人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对缺血性脑损伤大鼠的脑保护作用及机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、移植组、联合组,每组10只。除正常组,其他各组大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型。在造模结束24 h后,移植组大鼠给予0.5 m L 2×10^(6)个hUC-MSCs细胞悬液一次性尾静脉植入,联合组在移植组治疗基础上,给予电针百会穴、风府穴、双侧肾俞穴,每次30 min,每日1次,连续针刺3周。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马组织病理形态,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察脑组织细胞凋亡情况,免疫荧光法检测脑组织腺苷A2A受体(ADORA2A)表达,免疫组织化学法检测脑组织糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,Western Blot法检测脑组织跨膜蛋白闭锁蛋白(Occludin)、胞质附着蛋白(ZO-1)表达。【结果】与正常组比较,模型组脑组织细胞凋亡率升高,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平升高,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示,模型组海马组织结构明显异常;与模型组比较,移植组和联合组大鼠脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),海马组织病理程度明显减轻;与移植组比较,联合组脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】电针百会、风府、双侧肾俞穴联合hUC-MSCs可改善缺血性脑损伤大鼠血脑屏障,抑制脑组织ADORA2A、GSK-3β表达,提高β-catenin表达,抑制脑组织细胞凋亡,起到脑保护作用,且作用效果优于单纯hUC-MSCs移植。

腺苷A2a受体激动剂对脓毒症急性肾损伤中内质网应激的调节作用

目的:探究腺苷A2a受体激动剂对脓毒症诱导急性肾损伤(AKI)模型大鼠内质网应激(ERS)途径及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法:实验分为4组,包括对照组、腺苷A2a受体激动剂(CGS21680)组、模型(AKI)组、腺苷A2a受体激动剂干预(CGS21680+AKI)组,每组10只SD大鼠,CGS21680组和CGS21680+AKI组腹腔注射CGS21680,接着将除对照组外的其余3组大鼠均制备AKI模型。1周后,全自动生化仪检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平,苏木精-伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾组织病理形态学变化情况,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色观察肾组织内细胞凋亡情况,免疫组化染色检测肾组织内CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78),蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定肾组织X-盒-结合蛋白-1(XBP1)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核起始转录因子2α亚基(eIF2α)及磷酸化真核细胞起始因子2α(p-eIF2α)表达水平,免疫组化染色检测肾组织内MCP-1阳性表达情况,Western blot法测定肾组织中MCP-1蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AKI组大鼠SCr、BUN、KIM-1、NGAL水平升高(P<0.05),肾组织内可见肾小管扩张、变性及肾小球水肿等病理损伤现象,TUNEL阳性率增加(P<0.05),GRP78、CHOP阳性表达比例升高(P<0.05),肾组织内XBP1、PERK蛋白相对表达量及eIF2α/p-eIF2α比值均上调(P<0.05),MCP-1阳性表达比例与蛋白相对表达量也升高、上调(P<0.05)。与AKI组比较,CGS21680+AKI组大鼠SCr、BUN、KIM-1、NGAL水平降低(P<0.05),肾组织病理损伤情况明显改善,TUNEL阳性率减少(P<0.05),GRP78、CHOP阳性表达比例降低(P<0.05),肾组织内XBP1、PERK蛋白相对表达量及eIF2α/p-eIF2α比值均下调(P<0.05),同时,MCP-1阳性表达比例与蛋白相对表达量也降低、下调(P<0.05)。结论:腺苷A2a受体激动剂能够减轻AKI大鼠急性肾损伤,这可能与其缓解内质网应激,抑制MCP-1水平有关。

腺苷A2a受体在系统性硬化症相关间质性肺病中的作用及机制研究

目的研究腺苷A2a受体(A2a receptor,A2aR)的激活对小鼠系统性硬化症相关间质性肺病(systemic sclerosis associated interstitial lung disease,SSc-ILD)的保护作用及机制。方法选取24只野生型雌性Balb/c小鼠,随机分为三组:正常对照组(wild normal control group,WN组)、造模组(wild model group,WM组)、造模+A2aR激动剂(CGS21680)组(WM with CGS21680 group,WMC组)。建模结束2周后,取小鼠的肺组织和血清。对肺组织进行苏木精-伊红染色、马松染色及羟脯氨酸含量测定,观察炎症浸润及纤维化程度。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠的血清及肺组织晚期氧化蛋白产物、肺组织还原型谷胱甘肽,测定血清及肺组织的氧化应激水平。结果(1)苏木精-伊红染色和马松染色下,WM组小鼠肺部呈现炎症浸润及纤维化,WMC组小鼠较WM组小鼠减轻;(2)WM组小鼠肺组织的羟脯氨酸含量、血清及肺组织晚期氧化蛋白产物含量均较WN组小鼠升高(P<0.01),WMC组小鼠较WM组小鼠降低(P<0.01);(3)WM组小鼠的肺组织还原型谷胱甘肽含量较WN组小鼠降低(P<0.01),WMC组小鼠较WM组小鼠升高(P<0.05)。结论A2a R激活可通过抗氧化作用机制减轻SSc-ILD的炎症和纤维化程度。

腺苷A2a受体介导人参皂苷Rb1增加脑缺血／再灌注损伤大鼠的脑血流量

目的探讨腺苷A2a受体是否介导了人参皂苷Rb1对脑缺血／再灌注（I／R）损伤大鼠脑血流量的影响，为人参皂苷Rb1的脑保护机制提供新的理论基础。方法将60只sD大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组、模型组、人参皂苷Rb1组、人参皂苷Rb1＋A2a受体拮抗剂组、A2a受体拮抗剂对照组5组，每组12只。采用大脑中动脉闭塞（MCAO）法建立大鼠脑I／R损伤模型。人参皂苷Rb1组在制模后即刻腹腔注射人参皂苷Rb1（40mg／kg）；人参皂苷Rb1＋A2a受体拮抗剂组在制模前30min腹腔注射A2a受体拮抗剂CSC（0．01mg，kg），制模后即刻腹腔注射人参皂苷Rb1（40mg／kg）；A2a受体拮抗剂对照组只在制模前30min腹腔注射A2a受体拮抗剂CSC（0．01mg／kg）；生理盐水对照组于制模后即刻腹腔注射等量生理盐水。每组6只大鼠于脑I／R损伤后24h进行行为学评分，并测量局部血流量，断头取脑组织测量脑梗死体积；另6只大鼠处死后取大脑皮质，测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果与生理盐水对照组和模型组比较，人参皂苷Rb1组大鼠行为学评分明显降低[分：1（1～2）比3（2—4）、3（2～4），均P〈0．05]，局部脑血流量明显增多（L／min：223．25±67．15比127．23±64．16、125．75±57．65，均P〈0．05），脑梗死体积明显减小[（24．73±8．29）％比（63．72±8．81）％、（65．13±7．92）％，均P〈0．05]，MDA含量明显减少（U／mg：15．16±5．89比30．35±5．78、28．65±9．12，均P〈0．05），SOD活性明显增加（nmo1／mg：125．19±12．39比92．42±9．82、89．59±10．85，均P〈0．05）。与人参皂苷Rb1组相比，人参皂苷Rb1＋A2a受体拮抗剂组大鼠行为学评分明显升高[分：3（2-4）比1（1～2），P〈0．05]，局部脑血流量明显减少（L／rain：181．35±61．33比223．25±67．15，P〈0．05），脑梗死体积明显增大[（40．25±9．14）％tt（24．73±8．29）％，P〈0．05]，MDA含量明显增加（U／mg：25．38±6．78比15．16±5．89，P〈0．05），SOD活性明显降低（nmo1／mg：95．61±13．12比125．19±12．39，P〈0．05）。A2a受体拮抗剂对照组各指标与模型组比较差异均无统计学意义。结论腺苷A2a受体可能介导了人参皂苷Rb1对脑I／R损伤大鼠脑血流量的增加，为人参皂苷Rb1的脑保护机制提供了新的理论基础。

大鼠癫痫持续状态对海马神经元的损害及腺苷A2A受体阻断剂的保护作用研究

目的研究大鼠癫痫持续状态对海马神经元损伤及腺苷A2A受体阻断剂的保护作用。方法取36只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(正常大鼠)、癫痫组(通过氯化锂-毛果芸香碱构建大鼠癫痫持续状态模型)、干预组(造模前15 min给予0.05 mg/kg SCH58261,腹腔给药),三组各12只。造模24 h后,观察三组大鼠脑组织海马CA3区神经元病理形态学改变,比较大鼠磷酸化C-Jun N-末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及p-p38蛋白的表达水平。结果癫痫组造模成功率为91.67%(11/12),干预组造模成功率为83.33%(10/12)。对照组脑组织海马CA3区可见大量锥体细胞,且结构致密、排列整齐、结构完整,细胞核内染色质分布均匀,细胞膜边缘清晰可见;癫痫组大鼠脑组织海马CA3区大量神经元明显变性和坏死,大量细胞体积增大、肿胀明显、边缘模糊,细胞核溶解、碎裂、固缩,细胞明显脱失;干预组大鼠脑组织海马CA3区神经元脱失明显少于癫痫组,神经元变性不明显,少数胞质Nissl小体减少。p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白均表达于三组大鼠脑组织海马区,其中癫痫组和干预组p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达水平较对照组均显著升高(P<0.01),干预组p-p38和p-JNK蛋白的表达水平较癫痫组均显著下降(P<0.01),干预组p-ERK蛋白的表达水平与癫痫组比较,并无显著差异(P>0.05)。结论大鼠癫痫持续状态可导致脑组织海马神经元损伤,给予腺苷A2A受体阻断剂SCH58261腹腔给药可通过阻滞MAPK通路,从而具有保护海马神经元的作用。

腺苷A2受体激动剂对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的研究腺苷A2受体激动剂对大鼠缺血再灌注损伤(I/R)时肝细胞凋亡的影响。方法通过门静脉插管,分别用60mL 4℃HTK保存液和含有腺苷A2受体激动剂CGS21680(30μg/100 mL)HTK保存液灌注大鼠肝脏,然后切取肝脏4℃HTK液中保存24h,Krebs-Henseleit缓冲液常温连续再灌注45min。检测灌注期间丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷氨酸乳酸脱氢酶(GLDH)及门静脉压力(PVP)的变化。灌注结束时检测灌洗液中细胞凋亡、脂质过氧化物(LPO)和胆汁分泌量的变化。结果与对照组相比,CGS21680组大鼠灌注液中ALT,GLDH和PVP明显降低(均P<0.01),胆汁分泌量明显增加(P<0.01),LPO含量明显降低(P<0.05),细胞凋亡明显减少(P<0.05)。结论腺苷A2受体激动剂可减轻离体大鼠肝脏I/R损伤和细胞凋亡的发生率,其作用机制可能与氧自由基的减少有关。

补肾活血颗粒对帕金森大鼠脑腺苷A2A受体影响的研究

目的探讨补肾活血颗粒治疗帕金森病的作用机制。方法用6-羟基多巴损毁脑右侧内侧前脑束的方法建立帕金森大鼠模型。将33只SD模型大鼠随机分为治疗组18只和对照组15只,另设正常组15只,治疗组以中药补肾活血颗粒灌胃每日1次,连续8周。对照组及正常组同法以生理盐水灌胃8周,灌胃结束、观察帕金森大鼠旋转行为变化,后断头取脑,免疫荧光法观察大鼠脑腺苷A2A受体变化。结果治疗组大鼠旋转行为较对照组改善,治疗组大鼠脑纹状体A2A受体表达较对照组明显减弱(P<0.01),模型组比正常组表达显著增强(P<0.01)。三组大鼠黑质中A2A受体均无表达。结论补肾活血颗粒能改善帕金森大鼠旋转行为,抑制大鼠纹状体腺苷A2A受体表达,对帕金森病治疗起到较好疗效。

腺苷A2受体激动剂对大鼠胰腺缺血再灌注损伤时氧自由基和细胞凋亡的影响

目的:研究腺苷A2受体激动剂对大鼠胰腺缺血再灌注损伤时的氧自由基和细胞凋亡的影响.方法:大鼠随机分成3组(n=18),即假手术组、对照组和实验组,对照组和实验组大鼠脾下动脉钳夹30min,假手术组不进行缺血处理;三组再灌注前经阴茎背静脉分别注射生理盐水(2mL/kg)或A2受体激动剂CGS21680(300μg/kg);再灌注15min、30min和60min分别检测胰腺组织中脂质过氧化物(lipoperoxides,LPO)、细胞凋亡的变化以及观察胰腺组织的形态学变化.结果:再灌注15、30和60min后,对照组胰腺组织中LPO和细胞凋亡明显高于假手术组(LPO:8.25±1.15vs1.63±0.46,10.67±2.04vs1.85±0.62,15.31±3.02vs2.02±0.86,均P<0.05;细胞凋亡:0.55±0.08vs0.18±0.04,1.21±0.15vs0.20±0.06,2.63±0.52vs0.23±0.06,均P<0.05或0.01)和实验组(LPO:8.25±1.15vs6.51±1.38,10.67±2.04vs6.84±1.74,15.31±3.02vs10.22±2.91,均P<0.05;细胞凋亡:0.55±0.08vs0.32±0.16,P<0.05;1.21±0.15vs0.44±0.20,2.63±0.52vs0.50±0.43,均P<0.05或0.01);.对照组中,再灌注30min和60min同15min相比,前两者LPO、细胞凋亡增高明显,且差异有统计学意义(P<0.05orP<0.01).假手术组和实验组胰腺组织损伤不明显,而对照组胰腺组织随再灌注时间的延长损伤加重.结论:腺苷A2受体激动剂可减轻大鼠胰腺缺血再灌注损伤时氧自由基和细胞凋亡的发生,从而减轻胰腺缺血再灌注损伤.

腺苷A2a受体激动剂后处理对兔缺血再灌注心肌的保护作用

目的观察三磷酸腺苷（ATP）、腺苷A2a受体激动剂CGS-21680及缺血后处理对兔缺血再灌注心肌的影响，并探讨后处理与腺苷受体亚型的关系及其保护机制。方法健康新西兰大耳白兔48只，随机分成4组：缺血再灌注组（IR组）、缺血后处理组（IPO组）、ATP后处理组（ATP组）和CGS．21680后处理组（CGS-21680组），每组12只。建立兔急性心肌缺血再灌注模型，实验终点测定血清肌酸激酶同工酶（CK—MB）、丙二醛（MDA）水平及超氧化物歧化酶（SOD）活力；采用Evans蓝和四氮唑蓝（NBT）双重染色测定心肌梗死面积。光镜下观察心肌组织病理形态变化。结果IR组心肌损伤较重，有心肌断裂、坏死，间质肿胀、出血及中性粒细胞浸润，IPO组、ATP组及CGS-21680组心肌组织损伤明显轻于IR组。与IR组比较，IPO组、ATP组和CGS-21680组血清MDA生成量减少[（3．68±0．60）U／ml、（3．75±0．82）U／ml和（4．05±0．86）U／ml比（5．05±0．65）U／ml，均为P〈0．05]，CK—MB活性降低[（231．83±16．22）U／L、（225．83±9．22）U／L和（238．33±22．26）U／L比（343．42±21．55）U／L，均为P〈0．01]，心肌梗死面积降低（13．86％±2．77％、14．22％±2．24％和14．57％±1．66％比30．49％±1．57％，均为P〈0．01）以及SOD活力升高[（238．08±38．22）nmol／ml、（261．75±40．27）nmol／ml和（294．78±23．38）nmol／ml比（149．98±42．42）nmol／ml，均为P〈0．05]；而CGS-21680组、IPO组和ATP组组间比较，差异无统计学意义。结论ATP和CGS-21680后处理可减轻心肌缺血再灌注损伤，保护强度与机械性缺血后处理相似，且后处理对再灌注心肌的保护与腺苷A2a受体的激活有关，其机制可能与清除氧自由基，抑制脂质过氧化反应从而提高机体的抗氧化能力有关。

腺苷A2a受体介导利血平引起的行为性抑郁(英文)

研究腺苷在利血平引起的大鼠行为性抑郁中的作用。应用Porsolt游泳试验 ,观察注射利血平引起的大鼠行为性抑郁 ,通过腹腔注射非特异性腺苷受体阻断剂咖啡因和特异性A1和A2腺苷受体阻断剂 ,确定腺苷在利血平诱导的大鼠行为性抑郁中的作用以及介导这种作用的受体。结果发现 :腹腔注射利血平 (4、6和 8mg/kg)可导致大鼠在游泳试验中漂浮时间明显延长 ,咖啡因和A2a腺苷受体阻断剂能明显缩短利血平导致的漂浮时间的延长。结论 :腺苷通过A2a受体介导利血平引起的大鼠的行为性抑郁。

腺苷A2a受体、caspase-3与新生儿缺氧缺血性脑病

腺苷是一种重要的神经递质,其受体共分为A1、A2a、A2b、A3四种类型,其中A2a受体在中枢神经系统的纹状体、海马区和皮质区分布较多。当缺氧缺血性脑损伤发生后,大量的腺苷A2a受体数量增加,其与腺苷结合后,引起兴奋性神经递质及中枢炎性因子的释放增加,最终引起神经元细胞的死亡或凋亡。而胱天蛋白酶(caspase)3在缺氧缺血性神经元凋亡过程中也发挥了非常重要的作用。该文就腺苷A2a受体、caspase-3与新生儿缺氧缺血性脑病的相关发病机制进行综述。

腺苷A2a受体对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的上调作用

目的研究腺苷A2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4、8、24、48h)的腺苷A2a受体激动剂CGS-21680干预A549细胞,分别用RT-PCR和Western blot检测α-ENaC mRNA和蛋白表达情况。结果①不同剂量CGS-21680作用A549细胞8h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平从0.1μmol/L开始增加,并与CGS-21680剂量呈正相关(mRNA表达:r=0.959,P<0.01;蛋白表达:r=0.988,P<0.01),与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②100μmol/LCGS-21680作用A549细胞1h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平开始增加,4h后与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论激动腺苷A2a受体能上调α-ENaC的表达,有益于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后。

腺苷A2A受体激活缺血后处理保护皮瓣作用研究

目的:缺血后处理需要反复夹闭血管蒂,可能对血管造成机械性损伤。药物缺血后处理成为缺血后处理的发展方向。腺苷A2A是调控皮瓣炎症的关键靶点,进行相关研究进一步探究腺苷A2A激活缺血后处理对皮瓣有否保护作用。方法:健康成年新西兰大白兔,分为3组。A组为假手术组;B组为缺血再灌注损伤组;C组,再灌注前5min注射腺苷A2A激活剂。分别进行皮瓣存活率检测和ELISA检测TNF以及IL-6。结果:腺苷A2A激活剂组皮瓣存活率高,炎症因子检测活性低于缺血再灌注损伤组。结论:腺苷A2A激活剂缺血后处理可以抑制炎症因子,具有保护皮瓣作用。运用腺苷A2A受体激活缺血后处理可能成为保护皮瓣的新措施。

腺苷A2A受体基因对脓毒症肝损伤小鼠肝脏超微结构改变的影响

目的探讨A2A受体基因对脓毒症肝损伤小鼠肝脏超微结构的影响和意义。方法选用雄性清洁级C57BL/6腺苷A2A受体基因敲除小鼠为A2A受体基因敲除(KO)组,其同窝野生型C57BL/6小鼠,随机分别为野生型(WT)阳性组和WT阴性组。KO组和WT阳性组经腹腔注射热灭活大肠杆菌菌液,WT阴性组注射生理盐水。检测小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平;透射电镜观察肝脏超微结构的变化并对肝脏线粒体进行半定量评分。结果 WT阳性组ALT、AST水平比WT阴性组升高(P<0.05)。结论腺苷A2A受体基因敲除小鼠正常线粒体数量减少,肝细胞结构破坏严重,肝功能下降明显。

腺苷A2A受体拮抗剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱所致癫痫模型的影响

目的研究腺苷A2A受体阻断剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱癫痫持续状态(SE)模型的影响。方法选取50只WD大鼠随机分为对照组、模型组及A2A受体阻断剂组。模型组采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射复制癫痫模型,A2 A受体阻断剂组在氯化锂-毛果芸香碱注射前15 min予腹腔给药(SCH58261 0.05 mg/kg),对照组给予同等剂量生理盐水。在成功诱导癫痫发作40 min后予地西泮及水合氯醛终止发作,并于发作终止后24 h留取标本。尼氏染色法检测三组中海马神经元损伤情况,Westernblot法检测MAPKs(JNK/p-JNK、P38/p-P38和ERK/p-ERK)表达变化。结果对照组、模型组及A2A受体阻断剂组双侧海马CA3区正常形态神经元计数分别为158.6±8.4、59.8±7.4和123.4±5.0,模型组神经元计数显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),A2A受体阻断剂组神经元计数显著高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Westernblot法检测显示p-JNK、p-P38和p-ERK在模型组中表达明显增多,在A2A受体阻断剂组中p-JNK和p-P38表达减少。结论氯化锂-毛果芸香碱模型中,腺苷A2A受体阻断剂可能通过抑制p-JNK他p-P38的表达对神经元损伤起到保护作用。

腺苷A2AR拮抗剂对中枢炎症性小胶质细胞形态和功能的影响

目的:探讨腺苷A2A受体拮抗剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用及其对中枢炎症性小胶质细胞形态和功能的影响。方法:MOG35-55免疫诱导建立EAE模型,EAE小鼠出现神经功能缺损症状后开始腹腔注射腺苷A2AR拮抗剂至发病后第10天。ELISA法检测中枢神经系统内IFN-γ、IL-17、TGF-β、IL-10的表达情况,免疫荧光双重染色法检测小胶质细胞内M1型细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型细胞标志物精氨酸酶I(ArgI)的合成情况。离体培养BV-2小胶质细胞,LPS诱导的小胶质细胞炎症反应,并予A2AR拮抗剂干预,Real-time PCR和ELISA法检测M1型和M2型细胞相关的细胞因子RNA表达水平和分泌水平。Western Blot法检测各组小胶质细胞内M1型和M2型细胞标志物的表达量。结果:腺苷A2AR拮抗剂能有效缓解发病后EAE小鼠的神经功能缺损症状,降低IFN-γ的分泌水平,使M1型细胞相关的iNOS合成减少,M2型细胞相关的ArgI合成增多。腺苷A2AR拮抗剂能减少LPS刺激后BV-2小胶质细胞M1型细胞相关的细胞因子IL-1β的mRNA表达量和分泌量,对M2型细胞相关的细胞因子及蛋白无显著影响。结论:腺苷A2AR拮抗剂对发病后的EAE小鼠有肯定的治疗作用,其机制可能与改变中枢炎症过程中小胶质细胞的表型(M1/M2转换)改变(形态和功能)有关。

腺苷A2A受体激动剂CGS21680对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响

目的探讨腺苷A2A受体激动剂CGS21680对伴刀豆球蛋白(ConA)引起的小鼠急性肝损伤的影响及其可能机制。方法雄性C57BL/6小鼠随机分为ConA组和CGS21680+ConA组。ConA组小鼠经尾静经脉注射ConA(20 mg/kg),CGS21680+ConA组小鼠经腹腔注射腺苷A2A受体激动剂CGS21680(2.1 mg/kg)10 min后再经尾静经脉注射ConA(20 mg/kg)。检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;光学显微镜下观察肝组织病理改变,评估肝损伤程度;采用流式细胞仪检测肝组织单个核细胞(MNCs)中CD4+T细胞IFN-γ和IL-4的表达。结果与ConA组比较,CGS21680+ConA组小鼠血清ALT、AST、IFN-γ、IL-4和TNF-α水平显著降低;肝脏组织中炎症细胞浸润明显减少,肝脏损伤程度较轻;肝组织CD4+T细胞IFN-γ和IL-4的表达减少。结论腺苷A2A受体激动剂CGS21680预处理能够显著减轻ConA引起的小鼠急性肝损伤,这可能与CGS21680激活CD4+T细胞表面的A2A受体进而抑制促炎因子的释放有关。