膀胱癌相关蛋白基因对HeLa细胞增殖的抑制作用

背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测54例宫颈癌组织和25正常宫颈组织中BLCAP基因的表达情况。制备BLCAP全长cDNA并克隆到真核表达载体pLXSN上,稳定转染至宫颈癌细胞系HeLa中,细胞计数方法和克隆形成实验观察稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞的细胞形态、细胞增殖及集落形成能力;利用DNAladder检测BLCAP基因引起HeLa细胞凋亡情况;裸鼠体内抑瘤实验观察BLCAP基因的抑瘤作用。结果:BLCAP在宫颈癌组织中不表达或低表达,与正常宫颈组织相比明显降低;转染BLCAP基因的HeLa细胞倍增时间为69.4h,较未转染HeLa细胞(27.5h)和转染空载体的HeLa细胞(30.2h)明显延长,差异有显著性(P﹤0.05);细胞同步对比实验显示,转染BLCAP基因的HeLa细胞的克隆形成率明显低于未转染HeLa细胞(t=5.98,P<0.01)和转染空载体的HeLa细胞(t=4.69,P﹤0.01);HeLa细胞在转染BLCAP基因后出现了DNA梯形条带。将转染BLCAP基因的HeLa细胞、转染空载体的HeLa细胞和未转染的HeLa细胞分别注射入BALB/c裸鼠体内,30天后处死动物,剥离肿瘤组织并称重,各组平均瘤重分别为1.015g、1.612g和1.530g,转染BLCAP基因的细胞抑瘤能力与两对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤病理切片结果显示,稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞所成肿瘤组织,癌组织被纤维组织包裹,边缘整齐,未侵犯肌层和脂肪组织,部分癌巢边缘癌细胞可见散在类似凋亡细胞的细胞群。而未转染质粒组及转染空载体pLXSN质粒组所成肿瘤组织癌组织突破肌层呈浸润性生长,癌巢边缘癌细胞病理性核分裂像多见。结论:BLCAP基因在宫颈癌组织中表达下调,对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,为宫颈癌相关候选抑癌基因。

人膀胱癌相关蛋白基因及其编码蛋白质的结构及功能预测

目的 :预测人宫颈癌候选抑癌基因———膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因及其编码蛋白质的结构及功能。方法 :将克隆有全长BLCAP基因的 pLXSN BLCAP质粒测序后 ,采用生物信息学的方法对其在核酸及氨基酸水平上进行分析 ,并对其编码的蛋白质的功能做了初步预测。结果 :发现了几条与BLCAP基因同源性较高的基因 :Ho mosapiensmRNA(DKFZp5 6 4M0 5 3) ,BC 1 0基因等 ,它们与BLCAP基因的序列相似性分别为 :99%和 87% ,而且不同种属间BLCAP基因较为保守。BLCAP基因编码的 87个氨基酸中亮氨酸 (1 9.5 % )、脯氨酸 (9.1 9% )、丝氨酸 (8.0 4 % )、半胱氨酸 (8.0 4 % )含量较高 ,对其二级结构的分析发现BLCAP基因编码蛋白N端以螺旋结构为主 ,C端以折叠结构为主 ,亲水性较高 ,而中间区域则以无规则卷曲为主 ,疏水性较高。在其 4 5aa～ 6 5aa处存在一个跨膜区 ,在 5 9aa～ 6 6aa处可能存在一个裂解位点 ,在 6 8位的Tyr,73位和 78位的Ser存在着 3个可能的磷酸化位点 ,且在78aa～ 81aa处发现一个典型的 [ST] X(2 ) [DE]结构 ,即酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。结论 :初步预测BLCAP基因为一个调节细胞生长的看家基因 ,其编码的蛋白质为一个Ⅰ型跨膜蛋白 。

宫颈癌候选抑癌基因的单核苷酸多态性

目的 :检测人膀胱癌相关蛋白 (BLACP)基因调控区的单核苷酸多态性 (SNP)及其基因型在宫颈癌高发区———湖北省五峰县土家族人群中的分布情况 ,并分析其不同基因型与原发性宫颈癌的相关性。方法 :采用病例 对照研究方法及动态等位基因杂交 (DASH)技术 ,对 30例原发性宫颈癌患者和 6 0例正常人BLACP基因调控区的 2个单核苷酸多态性 (SNP)位点进行检测。结果 :位于BLACP基因下游调控区的SNPrs3795 14 7位点存在AA、AC和CC 3种基因型 ,且与宫颈癌发病存在显著相关性 ,其中基因型CC和AC的相对危险度分别为 33.333和 3.76 1;位于BLACP基因上游调控区的SNPrs3795 14 8位点存在CC、CT和TT3种基因型 ,但其等位基因型频率和等位基因频率在宫颈癌患者与正常人群之间无明显差异。结论 :BLACP基因上SNP位点型别的不同 ,可能导致了个体对宫颈癌的易感性不同。