Gabra3通过AKT/mTOR途径促进膀胱癌T24细胞侵袭和迁移

目的:探究γ-氨基丁酸受体亚基α-3(Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-3,Gabra3)基因对膀胱癌T24细胞凋亡、迁移和侵袭的作用及其机制。方法:TCGA数据库分析Gabra3基因在膀胱癌中的表达以及转移和生存的相关性。建立Gabra3过表达和Gabra3突变的T24细胞株,根据转染质粒不同,分为空白T24细胞(Control)、空pDONR223载体转染T24细胞(NC)、野生型Gabra3过表达T24细胞株(wt-Gabra3)、突变型Gabra3 T24细胞株(mut-Gabra3)。在回补实验中,分为转染突变型Gabra3 T24组(mut-Gabra3)、转染空pDONR223载体mut-Gabra3组(mut-Gabra3-NC)、转染野生型Gabra3过表达组(mut-Gabra3+wt-Gabra3)。用TUNEL染色检测T24细胞凋亡,细胞划痕和Transwell分别检测T24细胞迁移和侵袭,Western blot检测AKT/mTOR通路相关分子生物表达水平。结果:Gabra3基因在膀胱癌中显著高表达(P<0.05),生存曲线证实远处转移存在的患者生存期明显较短(P<0.05)。成功构建Gabra3过表达和突变的T24细胞株。与Control组相比,wt-Gabra3组细胞凋亡能力显著降低,迁移、侵袭能力显著增强(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞凋亡显著增加,侵袭能力显著减弱(P<0.05);wt-Gabra3组细胞p-AKT、p-mTOR、p-4E-BP1、p-S6K蛋白表达均显示上凋(P<0.05),而mut-Gabra3组细胞上述蛋白无差异。在回补实验中,过表达wt-Gabra3的mut-Gabra3突变T24细胞凋亡能力受到抑制(P<0.05),迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),并且该组细胞AKT/mTOR通路相关分子显著激活(P<0.05)。结论:外源性的未编辑的Gabra3可以促进膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭能力,并且可能与激活AKT/mTOR途径通路密切相关。

醛缩酶A对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响

目的探索醛缩酶A(ALDOA)过表达和基因敲减对膀胱癌T24细胞生长和侵袭的影响,为探讨泌尿系统肿瘤发病机制提供理论依据。方法通过慢病毒感染构建稳定表达的ALDOA过表达和基因敲减膀胱癌T24细胞重组细胞株,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测重组细胞ALDOAmRNA的表达情况;采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室实验检测重组T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-PCR检测结果显示,过表达组重组T24细胞ALDOAmRNA的相对表达量较对照组更高,基因敲减组较对照组更低,证实膀胱癌T24细胞重组细胞株构建成功;CCK-8法检测重组细胞增殖结果显示:在培养72、96 h时,过表达组重组T24细胞生存率均较对照组更高;在培养96 h时,基因敲减组T24细胞生存率较对照组更低;划痕愈合实验结果显示:在培养24 h时,过表达组重组T24细胞划痕愈合率较对照组更高;Transwell小室细胞实验结果显示:在培养48 h时,过表达组重组T24细胞迁移数较对照组更多,过表达组重组T24细胞侵袭数较对照组更多(均P<0.05);培养24 h时,基因敲减组重组T24细胞划痕愈合率较对照组更低;在培养48 h时,基因敲减组重组T24细胞迁移数较对照组更少,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论ALDOA过表达可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,ALDOA基因敲减可减少膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭。

siRNA沉默RIP1对膀胱癌细胞株T24恶性生物学行为的影响

目的利用siRNA转染干扰沉默膀胱癌细胞株T24的受体相互作用蛋白1(RIP1)基因,并观察沉默前后T24恶性生物学行为的变化。方法使用Lipofectamine誖2000和RIP1siRNA与膀胱癌细胞株T24共孵育48 h,RT-PCR和Western-blot检测孵育前后RIP1mRNA和蛋白质的表达变化以观察沉默效率,并观察沉默前后T24增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力的变化。结果与siRNA孵育48 h后,RIP1的沉默效率可以达到85%,RIP1沉默后T24的增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力下降。结论沉默RIP1基因可以降低T24的恶性程度,提示RIP1在膀胱癌T24中起癌基因的作用。

茶多酚对膀胱癌细胞株T24和SCaBER体外生长抑制的实验研究

目的 研究茶多酚对膀胱癌细胞株生长的抑制作用及其可能的分子机制。方法 采用MTT法和流式细胞术 ,分析膀胱癌细胞株 (T2 4及SCaBER )经不同浓度的的茶多酚作用前后 ,细胞生长抑制率、细胞凋亡率、细胞周期以及细胞PTEN蛋白表达变化的影响。结果 培养液中加入 0、5 0、10 0、2 0 0、40 0 μg·ml-1茶多酚 ,T2 4细胞和SCaBER细胞的生长抑制率分别为 0、11.2 %、3 3 .4%、3 6.9%、67.5 %和 0、16.5 %、19.1%、3 0 .3 %、3 1.4%。流式细胞仪直方图上见亚二倍体峰 ,2株癌细胞均出现凋亡 ,凋亡率分别为 6.8%、2 5 .1%、2 8.6%、3 6.6%、41.1%和 2 1.4%、2 7.2 %、2 8.5 %、3 6.8%、47.7% ;同时 ,随茶多酚作用浓度的提高 ,阻滞于G1期的 2株癌细胞均明显增加 ,细胞分裂增殖指数 (PI)均降低 ;而细胞PTEN蛋白表达水平分别由 ( 3 7.66± 0 .49)、( 3 8.2 8± 0 .61) (TP ,0 μg·ml-1)增加至 ( 163 .92± 3 .3 6)、( 177.3 6± 10 .79) (TP ,40 0 μg·ml-1) (P均 <0 .0 1)。结论 茶多酚对T2 4及SCaBER细胞生长具有抑制作用 ,其机制之一可能是通过上调PTEN蛋白表达阻滞细胞由G1期进入S期和诱导细胞凋亡。TP抑制T2

全反式维甲酸诱导膀胱癌T24细胞株凋亡的研究

目的 :探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人膀胱癌 T2 4细胞株的凋亡诱导作用。方法 :应用荧光显微镜、流式细胞仪及 DNA琼脂糖凝胶电泳等技术研究 T2 4细胞凋亡。结果 :用 3× 10 - 6 m ol/ L 的 ATRA处理 T2 4细胞6天 ,荧光显微镜下计数 T2 4细胞凋亡率为 15 .2 0 % ,对照组为 0 .0 1% (P <0 .0 5 ) ;流式细胞仪测定 T2 4细胞凋亡率为 15 .31% ,对照组为 1.49% ;T2 4细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带。结论 :ATRA对人膀胱癌 T2 4细胞株有凋亡诱导作用 ,为

小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。

姜黄素通过调控MicroRNA-1246激活P53蛋白对膀胱癌T24细胞进行放疗增敏的作用机制研究

目的探讨姜黄素对膀胱癌化疗增敏作用机制。方法对经过姜黄素和放射处理的T24细胞进行microRNA表达(miRNA芯片测序)、细胞活力(细胞增殖试验试剂盒)、集落形成、凋亡(AnnexinV-F)分析、ITC/7-AAD流式细胞计数(ITC/7-AAD)、miR-1246和p53mRNA(实时PCR)和蛋白质(Westernblot)表达的分析。结果芯片测序分析鉴定出17个差异表达的miRNA,在姜黄素处理的细胞中,与对照组相比,姜黄素显著降低T24细胞活力,并呈现浓度依赖性。miR-1246在T24细胞中的表达显著高于SV-HUC-1细胞,且高浓度的姜黄素(10或20μg·mL^(-1))可显著下调T24细胞miR-1246的表达。20μg·mL^(-1)浓度的姜黄素组和放疗处理联合应用对抑制miR-1246的表达、细胞活力和集落形成的作用优于姜黄素或者进行单独放疗处理组。通过与对照组相比,抑制miR-1246显著降低T24细胞的存活率。转染antagomiR-1246可显著提高T24细胞处于G0/G1期细胞比例,而转染antagomiR-NC细胞则诱导细胞凋亡。荧光素酶试验显示,miR-1246的过表达会抑制p53 3‘-UTR基因的荧光素酶活性。结论 miR-1246通过靶向抑制p53基因在膀胱癌细胞中的表达,参与到姜黄素和放疗的抗肿瘤治疗中。

慢病毒介导NDRG2基因过表达抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭和迁移

目的:观察N-Myc下游调节基因-2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)过表达对人膀胱癌T24细胞体外侵袭和迁移的影响。方法:采用携带NDRG2基因的慢病毒Lenti-NDRG2感染T24细胞,构建稳定过表达NDRG2的细胞株。Western blotting检测T24细胞中NDRG2、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的表达,Transwell体外迁移和侵袭实验观察过表达NDRG2对T24细胞体外迁移和侵袭的影响。结果:建立了稳定过表达NDRG2的T24细胞株。与Lenti-Lacz组和空白对照组相比,Lenti-NDRG2组NDRG2蛋白的表达[(30.1±1.27)vs(9.9±1.24)、(8.2±1.28),P<0.01]明显提高;Lenti-NDRG2组MMP-2[(13.5±1.32)vs(30.7±1.29)、(28.8±1.30),均P<0.01]和MMP-9[(11.7±1.27)vs(25.2±1.28)、(26.4±1.31),均P<0.01]的表达明显降低;Lenti-NDRG2组T24细胞的侵袭细胞数[(18.1±3.4)vs(88.5±4.2)、(90.2±4.1)个,均P<0.01]和迁移细胞数[(20.1±3.5)vs(109.4±5.6)、(113.0±4.9)个,均P<0.01]明显减少。结论:慢病毒介导的NDRG2基因过表达可能通过降低MMP-2和MMP-9的表达而抑制人膀胱癌T24细胞的转移与侵袭。

姜黄素通过调控microRNA-7641及其靶基因p16抑制膀胱癌T24细胞增殖的机制研究

目的确定可能导致膀胱癌的mi RNAs,并研究其在姜黄素抗癌作用中的机制。方法对T24和SV-HUC-1细胞进行了芯片测序和q PCR分析。检测mi R-7641在含姜黄素或不含姜黄素的T24和SVHUC-1细胞株中的潜在致瘤性。并使用蛋白质印迹分析p16是mi R-7641在T24细胞中作用的重要靶基因。结果姜黄素诱导mi R-7641的表达下调及p16的上调,而p16是mi R-7641的转录后水平靶点之一,从而导致膀胱癌细胞凋亡增加。结论研究表明姜黄素可能是治疗无肌肉浸润性膀胱癌的临床治疗的潜在有效药物。

姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的:旨在探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞传代培养:培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素,观察对细胞的增殖、凋亡作用;应用四唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率(碘化丙啶染色)。结果:姜黄素各组较对照组增殖降低,存在剂量-效应关系。姜黄素各组较对照组凋亡升高,存在剂量-效应关系。结论:姜黄素抑制人膀胱癌T24细胞增殖,姜黄素促进人膀胱癌T24细胞凋亡。

VX-680诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞凋亡的诱导作用及对Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响及意义。方法:体外培养T24细胞,分别给予不同浓度及作用时间的VX-680,Annexin V/PI检测细胞凋亡;Hoechst染色法检测细胞凋亡形态学改变;RT-PCR和Western blot检测细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果:Annexin V/PI显示,凋亡率分别随着浓度增高和时间增长而增加,呈浓度及时间依赖性;Hoechst染色发现细胞在处理72 h后,其凋亡增多程度及Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调水平均随浓度增高而增加,呈浓度依赖性。结论:Aurora激酶抑制剂VX-680可能通过下调Bcl-2表达显著诱导人膀胱癌T24细胞凋亡,且具有浓度依赖性。

半乳糖凝集素3在膀胱癌组织中表达和临床意义及其对T24细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨半乳糖凝集素3(galectin-3)在膀胱癌组织中的表达与患者临床病理特征的关系及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:收集2014年5月至2016年6月在川北医学院附属医院收治的、经病理切片确诊的104例膀胱癌患者的癌和癌旁组织标本,用免疫组织化学法检测膀胱癌和癌旁组织中半乳糖凝集素3蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理特征的相关性。将siRNA-Gal3、siRNA-Control分别转染至T24细胞,用Weatern blotting检测细胞的半乳糖凝集素3蛋白表达水平,MTT法检测细胞的增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭,流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:膀胱癌组织中半乳糖凝集素3阳性表达率显著高于癌旁组织(73.1%vs 9.6%,P<0.05),膀胱癌组织中半乳糖凝集素3的表达与组织学分级、肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和TNM分期均有关(均P<0.05),与性别和年龄无关(P>0.05)。siRNA-Gal3显著下调半乳糖凝集素3蛋白的表达水平(P<0.05),干扰半乳糖凝集素3表达后:T24细胞的增殖能力和侵袭能力均明显降低(均P<0.05);细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:半乳糖凝集素3在膀胱癌组织中呈高表达,并与膀胱癌患者临床病理特征存在密切关系。干扰半乳糖凝集素3蛋白的表达可抑制膀胱癌T24细胞的增殖与侵袭,促进细胞的凋亡。

猪苓多糖对膀胱癌T24细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的:探讨中药猪苓多糖(PPS)对膀胱癌 T24细胞的作用。方法:应用细胞计数形态学观察和流式细胞分析技术观察 PPS 对 T24细胞形态、细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:PPS 组细胞数量减少,细胞形态改变,较多细胞伸出伪足。PPS 组凋亡细胞与对照组比较差异无显著性,但细胞周期分布中 S期细胞增加,G_2期细胞减少。结论:PPS 有抑制 T24细胞增殖作用,可能是通过阻止 T24细胞由 S 期进入G_2期所致。

膀胱癌T24中肿瘤干细胞样细胞的分离与鉴定

目的观察使用无血清培养基悬浮培养能否从膀胱癌T24中分离出微球体,并证实其是否有肿瘤干细胞的特点。方法使用无血清培养基DMEM/F12添加生长因子EGF、bFGF、胰岛素、B27对膀胱癌T24进行悬浮培养,并从长期增殖能力、克隆形成能力、自我更新能力、对放化疗的抵抗能力、迁移和侵袭能力等方面证实这些微球体是否有肿瘤干细胞的特点。结果从培养的第4天开始长出微球体,微球体细胞比普通贴壁T24细胞有更强的增殖能力和克隆形成能力,对放化疗的抵抗能力更强,有更强的迁移和侵袭能力,微球体有自我更新能力,具有肿瘤干细胞的特点。结论使用无血清悬浮培养可以从T24中分离出微球体,而且这些微球体细胞有肿瘤干细胞的特点。

nm23-H1基因转染对膀胱癌T-24细胞转移能力及化疗敏感性的影响

目的探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力及化疗敏感性的影响。方法将nm23-H1真核表达质粒通过电击穿孔转染技术导入人膀胱癌细胞株T-24,G418筛选阳性克隆,免疫组织化学方法检测nm23-H1基因的表达情况。Transwell小室和冲刷实验观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。MTT法检测T-24细胞转染前后对化疗药物敏感性的变化。结果以电穿孔技术将nm23-H1基因转入T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学结果显示T-24细胞株在nm23-H1基因转染前后其表达水平有明显差异;转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低。转染后T-24细胞对顺铂(CDDP)明显增敏。结论nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。nm23-H1基因能增强T24细胞对顺铂的化疗敏感性。

AMPKα过表达对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭和EMT的抑制作用及其机制

目的:探讨AMP依赖的蛋白激酶α(AMP-activated protein kinaseα,AMPKα)过表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的作用及其机制。方法:建立AMPKα过表达的膀胱癌T24细胞株,依据转染质粒的不同分为T24空白组、pc-DNA空载组和pc-AMPKα组。用Wb检测T24细胞AMPKα、EMT相关蛋白及EMT通路相关分子的表达水平,用Hoechst染色法检测转染后T24细胞的凋亡,CCK-8法检测T24细胞的增殖,细胞划痕愈合实验检测T24细胞的迁移,Transwell实验检测细胞的侵袭。结果:成功构建AMPKα过表达的膀胱癌T24细胞株。与T24空白组和pc-DNA空载组比较,pc-AMPKα组T24细胞上皮钙黏蛋白水平显著升高(P<0.01)、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平显著降低(均P<0.01),EMT通路相关信号分子P38、STAT3活性受到显著抑制(均P<0.01),细胞发生明显凋亡、增殖能力显著减弱(均P<0.01);T24细胞迁移和侵袭能力显著降低(均P<0.01)。结论:AMPKα过表达可使EMT通路相关分子活性受到抑制,使得膀胱癌T24细胞发生明显凋亡、增殖受限并使其侵袭和迁移能力降低及伴随EMT的逆转。

微小RNA-106a在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响

目的:观察微小RNA-106a(miR-106a)在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭作用的影响。方法:提取35例膀胱癌组织及正常膀胱组织中的总RNA,实时定量RT-PCR法检测miR-106a在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达量;培养膀胱癌T24细胞,分成实验组及对照组,实验组转染miR-106a mimics,对照组转染空白脂质体,噻唑蓝(MTT)法检测转染miR-106a mimics后对T24细胞增殖的影响,流式细胞仪检测T24细胞周期变化,Transwell侵袭小室检测T24细胞侵袭能力。结果:膀胱癌组织中miR-106a的表达量显著低于正常膀胱组织。膀胱癌T24细胞转染miR-106a mimics后,T24细胞增殖能力降低,细胞周期停滞于G_1期,Transwell侵袭小室检测提示T24细胞侵袭能力降低。结论:miR-106a的表达量在膀胱癌组织中减少,miR-106a过表达抑制膀胱癌T24细胞的增殖及侵袭能力。

原苏木素B对膀胱癌细胞BTT和T24的增殖抑制作用

苏木为豆科云实属植物苏木（Caesalpinia sappan L）的干燥心材,具有行血祛瘀,消肿止痛的功能。近年来的研究结果表明,苏木提取物对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用[1-3]。原苏木素B是苏木中主要成分之一[4,5],也是中国药典中苏木药材的质量标准检测指标[6],目前尚未见到关于原苏木素B的抑癌作用报道,本文以小鼠膀胱癌细胞BTT和人膀胱癌细胞T24肿瘤细胞为靶细胞。

姜黄素对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响。方法培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素,观察对细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率(碘化丙啶染色)。结果姜黄素各组较对照组凋亡率升高,存在剂量-效应关系。结论姜黄素促进人膀胱癌T24细胞凋亡。

瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及生存素(Survivin)表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理T24细胞,分别用MTT法检测膀胱癌细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测药物作用后细胞中Survivin蛋白的表达。结果瑞香狼毒水提取物干预细胞后,①膀胱癌T24细胞增殖受到抑制,抑制效应呈剂量依赖性并随时间的延长逐渐升高;②瑞香狼毒水提取物可以促进膀胱癌T24细胞的凋亡;③膀胱癌T24细胞中的Survivin蛋白表达下降。结论瑞香狼毒水提取物可以通过下调Survivin蛋白的表达从而抑制膀胱癌T24细胞增殖,促进其凋亡,并具有浓度和时间依赖性。