胃液对膀胱癌细胞系Bcl-2Bax表达的影响

目的 为了探讨胃液诱导膀胱癌细胞系细胞凋亡的机制。方法 采用流式细胞术及免疫组化方法观察了胃液对膀胱癌细胞系BIU 87细胞凋亡及Bcl 2 Bax表达的影响。结果 显示胃液处理后AI值升高 ,Bcl 2表达降低 ,Bax表达升高 ,Bcl 2 Bax比值为 0 71。结论 提示胃液诱导BIU 87细胞凋亡可能是通过降低Bcl 2 ,升高Bax而实现的。

罗格列酮对BIU-87膀胱癌细胞系转移能力的影响

膀胱癌是常见的恶性肿瘤之一，其发病率居恶性肿瘤第9位，发生机制尚不清楚，过氧化物酶体增殖物激活受体（per-oxisome proliferator activatcd receptor-γ，PPAR-γ）是一种细胞内的转录因子，与肿瘤细胞的分化、增殖密切相关，PPAR-γ可能与膀胱癌发生、转移和侵袭有关。

pCH510转染膀胱癌细胞系BIU-87对卡介苗抑瘤作用的影响

目的研究膀胱癌细胞系BIU-87体外转染pCH510后,CH50多肽的表达及其对卡介苗(bacilluscalmette-guerin,BCG)抑瘤作用的影响。方法在LipofectimineTM2000的介导下,将质粒pCH510体外转染给BIU-87细胞,采用免疫组织化学S-P法和WesternBlot法鉴定CH50多肽的表达;通过四唑盐比色法(MTT法)观察pCH510转染BIU-87对BCG细胞毒作用的影响。结果BIU-87细胞转染pCH510后阳性表达CH50多肽,对照组则不表达;CH50多肽阳性表达增强了BCG对BIU-87的细胞毒性作用(P<0.05)。结论转染pCH510后,BIU-87细胞表达CH50多肽,并因此促进了BCG对膀胱癌细胞的抑制作用。

下调uPAR表达抑制高侵袭性人膀胱癌细胞系T24的迁移与侵袭

目的探究尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u PAR)的表达对高侵袭性人膀胱癌细胞系T24体外增殖与侵袭的影响,以及哺乳动物靶向雷帕霉素靶蛋白复合物2(m TORC2)可能的作用。方法设计合成针对u PAR、Rictor、PTEN基因的siRNA和阴性对照NC siRNA。将对数增殖期T24细胞随机分为5组,并设为实验组siu PAR、siRictor、siRictor+siu PAR、siu PAR+si PTEN和对照组NC。用瞬时转染法将以上siRNA及相应组合分别转入5组T24细胞;分别用RT-qPCR和Western blot检测mRNA及蛋白的表达;用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测u PAR siRNA对T24细胞增殖及侵袭的影响。结果 T24细胞中u PAR mRNA和蛋白的表达量显著上调(P<0. 05)。沉默u PAR能够显著下调T24细胞中磷酸化Akt Serine-473(P-Akt S473)的表达量(P<0. 05),并抑制T24细胞的迁移与侵袭(P<0. 05)。敲除PTEN基因的T24细胞中,沉默u PAR基因促进Akt S473磷酸化(P<0. 05)。结论沉默u PAR能够抑制T24细胞的迁移与侵袭,在T24细胞中u PAR可能是m TORC2的上游调控因子。

BLCAP基因干扰表达载体的构建及对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。报告如下。

胃液对膀胱癌细胞系生长抑制、细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨胃液对膀胱癌生长抑制、细胞凋亡及bcl 2 /bax表达的影响。方法 采用细胞培养、四唑盐比色试验 (MTT)、DNA提取及电泳、流式细胞仪和免疫组织化学等方法 ,观察胃液对膀胱癌细胞系生长抑制、细胞凋亡及bcl 2 /bax表达的影响。结果 高浓度胃液 (19～ 3 8mmol/L)抑制膀胱癌细胞系的生长繁殖 ,低浓度胃液 (0 .5 94～ 9.5 0 0mmol/L)则促进膀胱癌细胞系的生长繁殖。胃液能诱导体外培养的膀胱癌细胞凋亡。膀胱癌细胞系BIU 87中bcl 2、bax均有表达 (分别为 63 .5 %和 41.4% ) ,经胃液、稀盐酸或阿霉素处理后 ,bcl 2表达下降 (分别为 3 4 .8%、3 7.3 %和 2 9.6% ) ,bax表达上升 (分别为 49.3 %、47.1%和 5 2 .2 % ) ,bcl 2 /bax比值小于 1。结论 胃液能抑制膀胱癌的生长 。

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU-87增殖和侵袭力的影响

PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，它通过发挥磷酸酶作用，阻断信号传导通路。抑制细胞的生长、黏附、铺展和迁移，诱导凋亡，从而对肿瘤的生长和侵袭产生负性调节作用。研究发现，在人类多种肿瘤中均有PTEN的丢失或突变，其表达与肿瘤的发生、发展及预后有一定的相关性。本实验将外源性PTEN转染入人膀胱癌细胞系BIU-87中。观察其对肿瘤细胞增殖力和侵袭性的影响，以探索膀胱癌基因治疗的新靶点。

吉西他滨、紫杉醇时序联合对膀胱癌细胞系细胞毒效应研究

目的评价吉西他滨(GEM)、紫杉醇(TAX)时序联合抗膀胱癌细胞系效应。方法MTT法检测GEM与TAX同时(A组)、先后间隔24h时序(B组为GEM先于TAX24h,C组为TAX先于GEM24h)联合用药对膀胱癌细胞系5637和EJ细胞的细胞毒活性,Chou和Talalay方法评估两药物作用关系;流式细胞仪碘化丙啶法检测药物作用细胞后的细胞周期分布变化;AnnexinV检测各组细胞凋亡率的变化;蛋白印迹法检测细胞周期CyclinD1和CyclinB1蛋白的变化。结果药物浓度为1.0μg/ml时,A组5637、EJ细胞生长抑制率为38%、40%,细胞凋亡率为29.3%、15.4%,细胞毒联合指数(CI)均<1;C组5637、EJ细胞生长抑制率为15%、13%,细胞凋亡率为11.5%、6.7%,CI均>1;B组结果与A组相仿。给药第48h细胞周期分布显示细胞B组主峰在G1期积聚(≥60%),A组G1、G2/M期略有增加,C组主峰在G2/M期积聚(≥65%)。A组CyclinD1蛋白表达较无药物对照组下降,CyclinB1表达上调。结论联合应用GEM和TAX治疗膀胱癌,存在时序效应,即同时用药产生协同作用,先用GEM,后用TAX也可产生较好的细胞毒效应,而先用TAX,后用GEM,则产生拮抗作用。

“人脐静脉内皮细胞系”ECV304实际上是人膀胱癌细胞系T24

细胞系间的交叉污染是全世界生物医学研究领域面临的重大难题之一。多项研究显示18％～36％的人肿瘤细胞系为假细胞系或身份不正确。以往假细胞系的鉴别主要依赖于细胞遗传学技术，由于缺乏准确详细的核型描述，且多数细胞系的核型极为复杂，因此识别假细胞系较为困难。短串联重复序列-聚合酶链反应（STR-PCR）技术的出现使得情况发生了很大的改变，目前已成为鉴定假细胞系最为可靠和迅速的方法，得益于这一技术，近年来大量假细胞系得以识别。

苹果酸舒尼替尼对体外膀胱癌5637细胞系增殖的影响

苹果酸舒尼替尼是靶向受体酪氨酸激酶（recep-tortyrosinekinases，RTKs）的小分子抗肿瘤药物，已被EAU肾癌临床治疗指南和NCCN肾细胞癌指南推荐为晚期转移性肾细胞癌的一线药物，可通过抑制多个RTKs磷酸化和激活阻断信号传导，抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成。苹果酸舒尼替尼的作用靶点较广泛，

二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响

目的探讨二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响。方法选用膀胱癌5637细胞,分为对照组、二甲双胍2 mM组、5 mM组、10 mM组、20 mM组,各组分别处理膀胱癌5637细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期变化,采用平板克隆形成试验检测细胞克隆形成率,采用Western blot法检测细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平。结果与对照组比较,二甲双胍各浓度组在24、48、72 h对膀胱癌5637细胞增殖抑制率较高（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞克隆形成率较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组G1期细胞比例较高,S期细胞比例较低（P〈0.05）,二甲双胍2 mM组、5 mM组G2期细胞比例较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平较低（P〈0.05）。结论二甲双胍对膀胱癌5637细胞系HSP-70、HSP-90α及VEGF表达有明显抑制作用,能够抑制细胞增殖、克隆,促进细胞发生G1期阻滞,引起细胞凋亡,作用呈剂量依赖性。

塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及机制

目的初步探讨塞来昔布对膀胱癌细胞移植小鼠的治疗作用及相关机制。方法将60只雄性BALB/c裸鼠随机分为3组:对照组、模型组及观察组。模型组及观察组利用注射人膀胱癌细胞系5637制备小鼠膀胱癌模型。观察组小鼠给予塞来昔布治疗,对照组及模型组小鼠给予同剂量0.9%氯化钠溶液。治疗4周后,取模型组和实验组小鼠瘤组织及对照组正常组织,检测3组小鼠组织中CD4^+、CD8^+表达量及CD4^+/CD8^+比值;利用Western blot检测COX-2、VEGF及cPLA2阳性表达;利用TUNEL法检测模型组及观察组小鼠肿瘤细胞凋亡率。结果对照组小鼠正常生长,皮下无肿瘤生成。模型组和观察组小鼠成瘤率100%。模型组和观察组小鼠的瘤体质量分别为(2.08±0.36)g和(1.18±0.21)g,与模型组相比,观察组小鼠瘤体质量显著降低(P<0.05)。观察组小鼠的肿瘤抑制率为43.33%。模型组及观察组小鼠移植瘤中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平均显著低于对照组,CD8+水平均显著高于对照组(P<0.05)。观察组小鼠瘤组织中CD4^+、CD4^+/CD8^+水平明显高于模型组,CD8+水平明显低于模型组(P<0.05)。COX-2及cPLA2蛋白在对照组小鼠组织中不表达,VEGF蛋白在3组中均有阳性表达。观察组小鼠中COX-2、VEGF及cPLA2蛋白表达水平明显低于模型组,细胞凋亡指数明显高于模型组小鼠(P<0.05)。结论塞来昔布对小鼠膀胱癌具有一定的抑制作用,其作用机制可能与提高膀胱癌小鼠免疫系统水平、减轻炎性反应、促进癌细胞凋亡有关。

生存素反义寡核苷酸诱导膀胱癌细胞凋亡及增强其化疗敏感性

为探讨生存素反义寡核苷酸（生存素-ASODN）对化疗药多西紫杉醇（泰索帝）诱导膀胱癌细胞系BIU87细胞凋亡的影响。将已构建成功的生存素-ASODN真核表达载体pcDNA3-Swas通过脂质体介导转染膀胱癌细胞系BIU87，并筛选转染成功的阳性克隆；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测其生存素mRNA表达；锥虫蓝拒染法观察生存素-ASODN与泰索帝联合应用对BIU87细胞生存的影响；

蛋白激酶C-α在调节人膀胱癌T24细胞多药耐药中的作用

目的探讨蛋白激酶C-α(PKCα)对人膀胱癌T24细胞多药耐药的调节作用。方法将载有PKCα基因的表达质粒GFP-PKCα导入人膀胱癌细胞系T24。应用噻唑蓝(MTT)比色法,检测T24/PKCα及亲本细胞对阿霉素的敏感性,以及在激活(10nmol/LPMA2h)和抑制(10nmol/LCalphostinC2h)PKCα的情况下,T24/PKCα细胞对阿霉素敏感性的变化。同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(MDR-1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)基因的表达。结果转染了PKCα基因后,T24细胞对阿霉素的耐药性增强(耐药指数7.52,P<0.05)。PKCα的激活显著提高了T24细胞的耐药性(耐药指数153.78,P<0.01),而抑制PKCα活性则使耐药指数降至1.20(P>0.05)。T24/PKCα的MDR-1表达水平是亲本细胞的2.28倍(P<0.01)。激活PKCα可使MDR-1基因表达水平较亲本细胞升高12.80倍(P<0.01),抑制PKCα则MDR-1表达下降(P>0.05),而MRP和LRP基因表达水平并无明显变化(P>0.05)。结论PKCα可能通过上调MDR-1表达,在人膀胱癌的化疗耐药中起到了重要的作用。

miR-203a通过靶向抑制CDK6调控膀胱癌细胞增殖及放射敏感性

目的探讨miR-203a在膀胱癌(BC)细胞系(RT-112、T24、5637、UM-UC-3细胞)中的表达及对细胞增殖及放射敏感性的影响。方法将miR-203a mimics、miR-203a inhibitor、CDK6siRNA、CDK6表达质粒及相应阴性对照(NC)转染入BC细胞中。实时荧光定量PCR检测miR-203a在RT-112、T24、5637、UM-UC-3细胞和人膀胱上皮永生化细胞系(SV-HUC-1)中的表达。CCK8实验研究miR-203a和CDK6对BC细胞系增殖的调控。克隆形成实验研究miR-203a和CDK6对BC细胞系放射敏感性的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-203a的靶基因。蛋白印迹法检测miR-203a对CDK6蛋白表达的影响。采用单因素方差分析进行多组间比较、t检验进行两组间比较。结果与SV-HUC-1细胞相比,miR-203a在RT-112、T24、5637、UM-UC-3细胞中的表达明显降低(P<0.05)。与NC相比,过表达miR-203a抑制BC细胞系增殖(P<0.05),敲低miR-203a促进BC细胞系增殖(P<0.05)。与NC相比,过表达miR-203a增加BC细胞系的放射敏感性(P<0.05),敲低miR-203a减弱BC细胞系的放射敏感性(P<0.05)。CDK6是miR-203a的作用靶点。与NC组相比,过表达miR-203a显著降低了CDK6蛋白水平(P<0.05),敲低miR-203a显著上调了CDK6蛋白水平(P<0.05)。在转染miR-203a mimics的T24和UM-UC-3细胞中过表达CDK6后,与miR-203a mimics组相比,细胞增殖能力升高、放射敏感性降低(P<0.05);在转染miR-203a inhibitor的RT-112和5637细胞中沉默CDK6后,与miR-203a inhibitor组相比,细胞增殖能力降低、放射敏感性升高(P<0.05)。结论miR-203a在BC细胞系中低表达,可作为抑癌基因抑制BC细胞系增殖和增强放射敏感性。

蛋白激酶Cα对浅表膀胱癌分化及阿霉素内源性耐药的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)α与浅表膀胱癌细胞分化及内源性耐药的关系。方法采用蛋白印迹法检测76例临床标本(浅表膀胱癌及正常组织)中PKCα的表达水平,对所有患者行标准化疗后随访4～24个月,分析PKCα表达及活化与复发的关系。应用人浅表膀胱癌细胞系RT4细胞,建立能够稳定表达PKCα绿色荧光蛋白(GFP)的人膀胱癌细胞系RT4/PKCαGFP。用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定RT4/PKCαGFP和亲代细胞对阿霉素的敏感性。分别检测PKCα激活和抑制状态下RT4/PKCαGFP对阿霉素敏感性的差异。结果在癌组织中,PKCα总体表达水平和胞膜、胞浆中表达水平的比值(M/C值),均显著高于正常组织(癌组织为正常组织的2.2倍,t=1.98,P<0.05;M/C值癌组织为0.84±0.12,正常组织为0.23±0.11,t=2.62,P<0.01)。随着肿瘤分级的升高,胞膜中PKCα的相对表达的水平显著升高(P<0.01),胞浆中的相对表达水平显著下降(P<0.01),PKCα的M/C值显著升高(P<0.01),总体PKCα相对表达水平显著升高(P<0.01)。70例获随访,共复发38例。多因素分析表明,高PKCαM/C值是影响化疗后近期复发的独立预后因素(相对危险度3.98,95%可信区间1.22～5.68,P=0.03)。转染PKCα基因后,RT4细胞对阿霉素的耐药性增强(耐药指数6.97,t=3.24,P<0.01)。

ras基因与人类肿瘤

自1982年从人膀胱癌细胞系分离克隆出第一个人癌基因EJ-Ha-ras后,迄今已发现了几十种人癌基因。在这些研究中,ras基因家族几乎占用转染技术发现的人类转化基因的90％。本文拟就ras基因的特性及功能等做一简要介绍。一、ras基因家族 ras基因首先发现于Harvey和Kirsten大鼠肉瘤(ratsarcoma)中。在诱变此两瘤的逆转病毒中,找到了能引起细胞癌变的核苷酸序列。