银纳米有序阵列SERS活性基底的制备及在膀胱肿瘤细胞检测中的应用

以多孔阳极氧化铝(porous anodic alumina,PAA)膜为模板,采用真空电子束蒸镀技术,分别在PAA多孔层以及阻挡层表面形成了银纳米孔和银纳米帽有序阵列表面增强拉曼散射(surface-enhancedRaman scattering,SERS)活性基底,并以膀胱肿瘤细胞作为分子探针,测试和分析了这两种SERS活性基底的表面增强拉曼光谱的特性。结果表明,两种SERS活性基底对膀胱肿瘤细胞的拉曼散射信号均有很好的增强作用。银纳米帽有序阵列SERS活性基底不仅具有较高的SERS增强和荧光猝灭效应,而且不存在与PAA膜中草酸根杂质相关的干扰峰,可获得膀胱肿瘤细胞拉曼散射光谱的更多细节信息。

红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞杀伤作用的实验研究

用ＭＴＴ法观察了ＬＡＫ细胞和ＰＢＭＣ对红芪多糖（ＨＰＳ）预处理的膀胱肿瘤细胞株（ＥＪ）及原代肿瘤细胞杀伤作用的影响。结果表明将ＥＪ和原代肿瘤细胞经ＨＰＳ预处理后。

膀胱肿瘤细胞mRNA致敏的树突状细胞体外抗肿瘤免疫反应

目的:研究小鼠膀胱癌BTT739细胞mRNA致敏的树突状细胞(DC)诱导特异性的抗肿瘤免疫反应。方法:使用rmGM-CSF和rmIL-4培养诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,从BTT739细胞中提取mRNA致敏DC,与小鼠淋巴细胞混合培养以诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。采用MTT比色法和软琼脂法检测CTL对BTT739细胞的杀伤作用。结果:MTT比色法和软琼脂法检测结果显示:在靶细胞∶效应细胞不同浓度组中,BTT739实验组和对照组的OD值和肿瘤集落形成个数都有显著性差异(P<0 01,P<0 05),在靶细胞∶效应细胞的比例为1∶5、1∶25、1∶50和1∶100时,其杀伤率分别为25. 0%、36 .1%、45 .9% 和58 .2%;当效应细胞作用于AGS细胞时,其OD值无显著差异。结论:以膀胱肿瘤细胞mRNA致敏DC诱导CTL可有效杀伤膀胱肿瘤细胞。

卡介苗对膀胱肿瘤细胞及代谢产物的作用影响

目的探究卡介苗对膀胱肿瘤细胞及代谢产物的作用和影响,对卡介苗治疗膀胱肿瘤细胞的可能机制进行初步的探索。方法通过膀胱灌注N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导并建立大鼠的膀胱肿瘤模型,将膀胱肿瘤细胞和正常移行上皮细胞进行原代培养。按照培养液的不同成分将其分为5组,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的浓度。利用噻唑蓝(MTT)法测定卡介苗抑制肿瘤细胞生长的药物浓度。利用末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况。结果在灌注的15只大鼠中,2只大鼠在灌注2次后死亡,3只大鼠灌注3次后死亡,解剖死亡大鼠均未发现明显的肿瘤。再对其余10只大鼠完成膀胱灌注后,其中8只大鼠解剖后发现有明显的肿瘤。MTT结果显示:卡介苗对膀胱肿瘤细胞的生长具有抑制作用,其抑制率与卡介苗的浓度呈现正相关。ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α浓度在B组为(160.654±5.775)ng/L,D组为(124.443±4.972)ng/L的浓度,与其他三组相比差异有显著性;IL-10浓度在B组为(16.973±3.428)ng/L,E组为(20.327±2.721)ng/L,蛋白水平明显高于其他三组。各组细胞均未发现细胞凋亡。对原代膀胱肿瘤细胞的鉴定显示:利用HE染色可发现肿瘤细胞的细胞核体积增大,核浆比增高,有的可发现细胞核仁数目增加,有的细胞核呈现墨水滴样,核仁比较明显。结论卡介苗对大鼠膀胱肿瘤细胞的增长具有抑制作用,没有发生细胞凋亡,且肿瘤细胞自身分泌的IL-10、TNF-α可以参与调节。

PD-1/PD-L1在膀胱癌患者外周血T细胞和肿瘤细胞表达

【目的】探讨PD-1/PD-L1在膀胱肿瘤患者外周血T细胞和膀胱肿瘤细胞上表达的特点及临床意义。【方法】选取我科收治的64例原发性膀胱癌患者作为实验组(浅表性46例,浸润性18例),对照组为正常人群,共15例。分别取外周血,通过流式细胞仪检测CD8^+T淋巴细胞表明PD-1的表达量;另外取肿瘤患者膀胱癌组织和正常人群的膀胱肿瘤行免疫组化检测膀胱细胞或膀胱肿瘤细胞表面PD-L1的表达情况。【结果】膀胱癌患者外周血中CD8^+T淋巴细胞PD-1的表达量明显高于对照组[(2.25±0.60)%vs(0.68±0.17)%,P<0.001],其中浸润性膀胱癌患者外周血T细胞PD-1的表达高于浅表性膀胱癌患者[(3.04±0.46)%vs(0.68±0.17)%,P<0.001];膀胱肿瘤细胞和正常膀胱组织细胞PD-L1的表达率分别为:40.6%(26/64)和0(0/15,P<0.001),其中浸润性膀胱肿瘤细胞与浅表性膀胱肿瘤细胞PD-L1的表达率无明显差异(41.3%vs38.8%,P>0.01)。【结论】外周血中PD-1在CD8^+T细胞的表达水平可间接反映膀胱癌的进展程度,膀胱肿瘤细胞表面高表达PD-L1,但与肿瘤的进展无相关。

PD-L1在膀胱癌组织肿瘤细胞与肿瘤相关免疫细胞中的阳性表达情况及其与临床病理特征的关系

目的:探讨细胞程序性死亡分子配体1(PD-L1)在膀胱癌组织肿瘤细胞(TC)与肿瘤相关免疫细胞(IC)中的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法:选取2020年1月—2023年1月于大理大学第一附属医院接受手术治疗的80例膀胱癌患者作为研究对象,利用免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织TC与IC中的PD-L1表达情况,分析PD-L1在TC与IC中的阳性表达情况,及其与膀胱癌患者临床病理特征的关系。结果:TC中PD-L1阳性表达率低于IC,差异有统计学意义(P<0.001)。PD-L1在TC和IC中均为阴性表达的膀胱癌组织均未见明显染色;PD-L1在TC和IC中均为阳性表达的膀胱癌组织可见大部分染色;PD-L1在IC阳性表达、TC阴性表达的组织中,膀胱癌细胞未见明显染色,周围炎性浸润细胞出现明显染色。男性、年龄≥60岁、高级别病理分级是PD-L1在TC中表达的独立影响因素(P<0.001)。肌层浸润性、年龄≥60岁、高级别病理分级是PD-L1在IC中表达的独立影响因素(P<0.001)。结论:PD-L1在TC与IC中的阳性表达率较高,与膀胱癌患者临床病理特征存在密切关系。

反义IgG寡核酸诱导膀胱肿瘤细胞T24凋亡及其增强丝裂霉素敏感性的研究

研究结果显示多种上皮来源的肿瘤细胞可产生IgG，抗人IgG抗体可以抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。为此，我们将IgG反义寡核苷酸（ASODN）作用于膀胱癌细胞系T24，观察其对T24细胞的生物学效应。

柯萨奇腺病毒受体抑制膀胱肿瘤细胞T24体外迁移的实验研究

我们通过构建重组柯萨奇腺病毒受体（CAR）的逆转录病毒载体，将CAR转导入膀胱肿瘤细胞T24中，建立了稳定表达株，利用体外迁移实验检测CAR高表达对于膀胱肿瘤细胞迁移能力的影响。

人柯萨奇-腺病毒受体基因真核表达载体的构建及在膀胱肿瘤细胞中的表达

我们通过本实验构建含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的高效、双向真核表达载体pIRES2-EGFP-hCAR，并以阳离子脂质体介导法转染人膀胱癌细胞，研究EGFP与柯萨奇腺病毒受体基因（CAR）蛋白在膀胱肿瘤中高效的表达。

膀胱肿瘤细胞克隆分析及意义

一、膀胱上皮细胞的克隆性增生与膀胱肿瘤膀胱上皮性肿瘤 常常同时或先后发生于同一患者膀胱之不同部位，不同病灶可显示相同或不同的组织学特征。对于此特征，不同学者具有不同的观点。多数学者认为多发性肿瘤起源于同一克隆，即所有肿瘤均由肿瘤性转化的同一祖先细胞增生而来，经腔道内种植或经上皮内游走而形成多数肿瘤病灶。另有学者认为，多发性肿瘤是由于致瘤因素同时作用于膀胱不同部位而导致多数部位的细胞同时或先后发生肿瘤性转化，进而形成多发的，遗传学上互不相关的多数癌灶。

治疗用卡介苗对MB49膀胱肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨治疗用卡介苗(简称BCGt)对MB49膀胱肿瘤细胞(简称MB49细胞)增殖的影响。方法体外培养MB49细胞,每天观察并采用CCK-8法检测细胞生长情况,绘制细胞生长曲线。取对数生长期的MB49细胞与不同浓度(20、15、10、8、6、3、2. 5、2、1. 5、1 mg/mL)的BCGt作用72 h,CCK-8法检测细胞增殖能力,计算细胞抑制率。同时采用ELISA法测定细胞培养液中IL-6、IL-8及IL-15的浓度。结果 MB49细胞于第1～4天处于对数生长期,细胞增殖速度较快,细胞形态正常。BCGt可有效抑制MB49细胞的增殖,且呈剂量依赖性,IC_(50)为3. 650 mg/mL。经BCGt作用后细胞培养液中IL-6和IL-15浓度明显增高(P <0. 05),IL-8浓度未发生明显变化(P> 0. 05)。结论BCGt可抑制MB49细胞的增殖,可能是通过提高IL-6和IL-15的水平,促进细胞免疫应答,从而发挥抗肿瘤作用的。

明胶酶A(MMP-2)蛋白在评估膀胱移行细胞肿瘤进展期的作用

目的 研究明胶酶A(MMP 2 )在不同病理分期、分级的膀胱移行细胞肿瘤 (TCCB)中的表达规律 ,并探讨以MMP 2来判断TCCB进展情况的可能性及方法。方法 通过免疫组织化学和明胶酶谱等方法对 4 7例手术切除的TC CB组织中MMP 2蛋白进行定量检测 ,同时取 5例正常膀胱组织作为对照。对检测结果进行统计学分析。结果 (1)MMP 2蛋白在TCCB中呈阳性表达 ,在正常膀胱组织中MMP 2不表达或呈微量表达 ;(2 )随着TCCB临床病理分期、分级的升高 ,MMP 2表达量呈现增高趋势 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 MMP 2蛋白表达与TCCB的恶性发展密切相关。临床上可将MMP 2作为判断TCCB进展情况的标志物。

膀胱非移行细胞肿瘤23例诊治分析

目的 :探讨膀胱非移行细胞肿瘤的诊断治疗方法。方法 :对收治的 2 3例膀胱非移行细胞肿瘤的诊断与治疗进行分析。结果 :2 3例膀胱非移行细胞肿瘤占同期膀胱肿瘤的5 .5 % ,其中良性肿瘤 8例 ,恶性肿瘤 1 5例 ,治疗以膀胱全切除及部分切除为主。结论 :膀胱非移行细胞肿瘤的预后与早期诊断、合理治疗有关。

C-erbB-2在膀胱尿路上皮细胞肿瘤中的表达及临床意义

目的:研究C-erbB-2在膀胱尿路上皮细胞肿瘤中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化方法检测原发性膀胱尿路上皮细胞肿瘤87例、复发性膀胱尿路上皮细胞癌18例和膀胱非肿瘤性病变20例组织中C-erbB-2的表达。结果:C-erbB-2在膀胱病变的原发尿路上皮细胞肿瘤(47.13%)与非肿瘤性病变(10.00%)中的表达差异有统计学意义(P<0.01);且在膀胱尿路上皮乳头状肿瘤中的表达随恶性程度增高而增高(P<0.05);在原发和复发的尿路上皮细胞肿瘤中表达分别为47.13%和66.67%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:C-erbB-2在膀胱尿路上皮细胞肿瘤发生、发展中可能起重要作用,它的表达与恶性程度相关。

华蟾素对人膀胱肿瘤T24细胞作用机制的实验研究

目的：研究华蟾素对人膀胱肿瘤T24细胞的作用及其机制。方法 MTT法研究华蟾素对细胞的增殖作用；将细胞分为空白对照、Caspase抑制剂、华蟾素、华蟾素＋Caspase抑制剂4组，流式细胞术分析各组细胞凋亡及细胞周期，RT-qPCR法检测各组细胞AIF、Endo G mRNA表达情况。结果华蟾素能抑制T24细胞增殖；与空白组和Caspase抑制剂组相比，华蟾素组与华蟾素＋Caspase抑制剂组细胞凋亡明显（P〈0.05），细胞周期主要阻断在S期，并且两组细胞内AIF、Endo G mRNA表达明显上调（P〈0.05）。结论华蟾素能抑制T24细胞增殖，通过Caspase依赖途径及Caspase非依赖途径诱导T24细胞凋亡。

尿脱落细胞hTERT mRNA表达在早期膀胱癌无创诊断上的探索

目的:通过检测尿脱落细胞的hTERT mRNA和端粒酶的活性,探讨建立膀胱癌早期诊断和术后检查的无创方法。方法:利用可提高灵敏度的巢式PCR技术,对尿脱落细胞中hTERT的mRNA进行RT-PCR检测,以TRAP方法加以验证。结果:28例膀胱癌患者尿脱落细胞hTERT的mRNA表达阳性率为93%(26/28)。20例泌尿系良性疾病组患者则为10%(2/20),TRAP方法有很好的一致性。结论:尿脱落细胞hTERT mRNA的检测敏感性高,特异性好,有望应用于膀胱癌的早期诊断和术后复发的无创检查。

人膀胱癌耐药细胞系T24/ADM的建立及其耐药机制

目的建立人膀胱癌耐药细胞系,对其耐药机制进行初步探讨。方法采用阿霉素浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系T24/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,应用RT-PCR和Western blot比较两种细胞P-GP、MRP和LRP的表达差异来探讨可能的耐药机制。结果建立了T24/ADM耐药细胞系,对ADM、VCR和VP16有交叉耐药,P-GP、MRP和LRP在耐药细胞系中表达升高。结论 T24/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因表达升高是T24/ADM获得耐药的主要机制之一。