藏红花素通过跨膜受体蛋白/发状分裂相关增强子1信号通路对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的探讨藏红花素对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的作用及其可能机制。方法于2021年1月至2022年1月采用不同浓度藏红花素处理视网膜神经节细胞RGC-5,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并用氯化钴(CoCl_(2))处理建立缺氧模型,分为缺氧组、藏红花素组、阳性对照(抗坏血酸)组和藏红花素+跨膜受体蛋白信号通路抑制剂(DAPT)组,另设对照组。Cell counting kit-8法检测细胞存活情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;钙荧光探针(Flou-4)实验检测各组细胞钙离子水平;实时定量PCR法检测跨膜受体蛋白(Notch1)、发状分裂相关增强子1(Hes-1)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、钙依赖性蛋白酶家族1(Cal⁃pain1)蛋白表达情况。结果藏红花素组细胞活力0.83±0.08高于缺氧组0.45±0.04,细胞凋亡率(17.92±1.21)%低于缺氧组(51.82±5.36)%,钙离子水平0.27±0.04低于缺氧组0.76±0.05,差异有统计学意义(P<0.05);藏红花素+DAPT组细胞活力0.50±0.06低于藏红花素组0.83±0.08,细胞凋亡率(36.50±3.50)%高于藏红花素组(17.92±1.21)%,钙离子水平0.65±0.05高于藏红花素组0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。与缺氧组比较,藏红花素组Bcl-2蛋白表达水平升高,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与藏红花素组比较,藏红花素+DAPT组Bcl-2蛋白表达水平降低,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论藏红花素对体外培养的缺氧RGC-5细胞凋亡有一定的抑制作用,可能是通过抑制钙离子内流,阻滞Notch1/Hes-1通路,提高细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平发挥作用。

轻型缺血性脑卒中患者在氯吡格雷治疗前后血小板功能检测与血小板膜受体水平的相关性

目的探讨氯吡格雷治疗前后血小板功能与血小板膜受体P2Y12表达水平的相关性,明确血小板功能检测的临床效用。方法收集2021年2月至2021年12月上海市浦东新区公利医院神经内科病区确诊轻型缺血性脑卒中患者143例,并随访180d记录终点事件。以ADP诱导血小板聚集抑制率<10%为高反应组,≥10%为非高反应组;与以ADP诱导血小板聚集抑制率<30%为高反应组;≥30%为非高反应组进行基本参数和实验室指标的比较。对P2Y12抑制率可能的相关因素进行Spearman相关性分析,并对其进行二分类Logistic回归分析。应用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验分析缺血性心血管事件的危险因素。结果两种不同分组中,ADP(7)、P2Y12(7)、P2Y12抑制率、MA(7)、MA抑制率比较差异有统计学意义(P<0.05)。P2Y12抑制率与血小板聚集抑制率存在中度的正相关关系,相关系数为0.543,P<0.001。血小板抑制率小于30%是P2Y12抑制率小于6%、11.7%和17.4%的独立预测因子(OR=0.199,95%CI 0.050~0.784,P=0.021;OR=7.095,95%CI 2.809~17.923,P<0.001;OR=9.254,95%CI 2.843~30.114,P<0.001)。生存分析中发现以P2Y12抑制率小于中位数11.7%评估治疗后缺血性心血管事件存在预测价值(P=0.041),差异有统计学意义。结论以ADP诱导血小板抑制率小于30%作为血小板高反应性定义标准能够较敏感地反映治疗后P2Y12水平的变化,临床缺血性心血管事件的预防可能从中获益。

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α通过调控跨膜受体蛋白1对子宫内膜癌病人中性粒细胞的影响

目的探究磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因通过调控跨膜受体蛋白1(Notch1)的表达对子宫内膜癌病人血中性粒细胞的影响。方法选择2020年3月至2021年9月在海南医学院第一附属医院接受治疗的50例子宫内膜癌病人(病例组)和50例健康女性(对照组)为分析对象。检测病例组和实验组血清中中性粒细胞(NE)、淋巴细胞(LY)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT),计算NLR指数(中性粒细胞计数/淋巴细胞计数)。逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测PIK3CA和Notch1的相对表达量。选取人原髓细胞白血病细胞/全反式维甲酸细胞(HL-60/ATRA细胞),在不同时间下进行培养,验证PIK3CA通过Notch1对NE的影响。结果病例组病人NE、LY、PLT指标以及NLR指数为(6.03±0.40)×10^(9)/L、(2.15±0.31)×10^(9)/L、(257.40±37.51)×10^(9)/L、(3.69±0.41)分别高于对照组的(5.13±0.50)×10^(9)/L、(1.68±0.16)×10^(9)/L、(202.10±23.39)×10^(9)/L、(2.44±0.39),病例组病人Hb水平为(138.72±13.79)g/L低于对照组Hb水平(149.52±10.65)g/L,说明子宫内膜癌病人炎症微环境异常。病例组PIK3CA和Notch1相对表达量为(3.351±0.496)、(3.467±0.440)高于对照组的(1.581±0.275)、(1.519±0.279)。HL-60/ATRA细胞培养实验验证了PIK3CA高表达促进Notch1高表达进而抑制NE的增殖。结论在NE中,Notch1表达量随着PIK3CA表达量升高而升高,NE细胞活力逐渐下降,初步证实了PIK3CA基因通过调控Notch1的表达对子宫内膜癌中NE产生影响。

刘志杰:大道不孤,揭开膜受体结构之谜

G蛋白偶联受体是人体内数量最多并且具有重要生理、病理功能的一类膜受体超家族,有超过800个家族成员。G蛋白偶联受体通过与G蛋白相互作用,将细胞外的信息,例如小分子、激素、光子、蛋白质等,传递到细胞内,以此调控人体的免疫、中枢神经、心血管、代谢、再生与发育、视觉、味觉和嗅觉等生理功能。如果受体及细胞内相关信号通路出现问题,或者受到病原体的攻击,则容易导致一系列疾病的发生。因此,G蛋白偶联受体一直被认为是重要的药物开发靶点,围绕该受体结构与功能的研究,对于细胞信号转导以及药物研发具有非常重要的意义。

膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系

背景与目的:线粒体介导的细胞凋亡大部分与细胞周期相关,但膜受体介导的细胞凋亡是否与细胞周期有关尚不清楚。本研究旨在观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞周期特异性,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系。方法:用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用AnnexinV/PI和API等方法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期特异性。结果:处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6%～8%。Molt-4、Jurkat细胞以及加入植物血凝素刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡,凋亡率是15%～28%。膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的早G1期。结论:膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期相关,具有细胞周期特异性。

雌激素膜受体非基因组效应的研究进展

雌激素受体分布于哺乳动物的许多组织中,介导了大部分已知的雌激素效应。细胞膜存在雌激素受体的非基因组效应。膜受体非基因组效应参与骨骼、神经和血管及凋亡等调节作用。笔者就雌激素膜受体介导的非基因组效应进行综述。

膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖

目的：观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞增殖，阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法：用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞；应用SubGl法和AnnexinV／PI等方法通过流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡。结果：处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感，凋亡率是6％-8％。Molt-4、Jurkat细胞以及加入PHA刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子一a、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡，凋亡率是15％-28％。经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后，进入细胞周期增殖的细胞较静止期的细胞凋亡率有明显增加。结论：膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖具有协同作用。

孕激素膜受体1在乳腺癌的表达及其生物学意义

目的探讨孕激素膜受体1(PGRMC1)在乳腺癌中的表达状况及与临床病理指标的可能关系。方法采用免疫组织化学方法回顾性分析检测60例乳腺癌PGRMC1的表达,并评价其与病理分级、临床分期、转移,化疗敏感性以及预后之间的关系。结果 60例乳腺癌组织PGRMC1表达阳性37例,阴性23例。PGRMC1的表达与乳腺癌淋巴结转移(P=0.004)、肿瘤大小(P=0.03)和临床分期(P=0.039)密切相关;与年龄(P=0.196)和肿瘤病理分级(P=0.526)无关。PGRMC1的表达与乳腺癌患者的总体生存率(Log-rank=15.638;P=0.0001)和无瘤生存率(Log-rank=4.443;P=0.035)有关。多因素分析结果提示PGRMC1是乳腺癌独立的预后因子(P=0.002)。结论 PGRMC1的表达乳腺癌随转移和临床分期升高而增强,可能是乳腺癌的预后因素之一。

跨膜受体蛋白Notch2在肺腺癌组织中的表达变化及意义

目的探讨跨膜受体蛋白Notch2在肺腺癌发生、发展中的作用。方法收集肺腺癌及其配对癌旁正常肺组织石蜡标本各130例份,采用免疫组化法检测Notch2阳性表达率,分析其与患者临床病理特征的关系;比较Notch2阳性与阴性表达者3年及5年生存率。结果肺腺癌及其配对癌旁正常肺组织石蜡标本Notch2阳性表达率分别为54.6%(71/130)、36.2%(47/130),二者比较P<0.05。肺腺癌组织Notch2阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况有关(P均<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P均>0.05)。肺腺癌Notch2阳性表达者与阴性表达者3年生存率分别为57.3%、84.7%,5年生存率分别为14.1%、40.0%;Notch2阳性表达者3年及5年生存率均低于Notch2阴性表达者(P均<0.05)。结论肺腺癌组织Notch2表达升高;Notch2表达升高可能参与了肺腺癌的发生、发展,并提示患者预后不良。

血小板膜受体P2Y12基因多态性与原发性高血压血瘀证的相关性研究

目的探讨血小板膜受体P2Y12基因G52T、-T744C多态性与原发性高血压（EH）血瘀证易感性的关系。方法选择福建省汉族人群EH血瘀证患者216例，EH非血瘀证患者220例，血压正常对照者193例。抽取受试者外周静脉血，提取DNA，采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR—RFLP）检测P2Y12基因G52T、-T744C多态性类型。结果3组间G52T的GG、GT和TT基因型分布频率差异无统计学意义（x2=2．041，P=0．728），-T744C的TT、TC和CC基因型分布频率差异有统计学意义（x2=10．500，P=0．033）；经进一步誓分割检验显示，EH血瘀证组TC／CC基因型分布频率（43．1％）高于EH非血瘀证组（30．9％）和健康对照组（33．2％），差异有统计学意义（X2=7．598，P=0．006）。多因素Logistic回归分析显示，以健康对照组为参照系，TC／CC基因型人群是患EH血瘀证的独立危险因素；调整相关混杂因素后，TC／CC基因型人群患EH血瘀证的相对危险度是1．518，95％可信区间（95％CI）为1．011～3．025，P=0．042。结论P2Y12基因TC／CC型可能是汉族人群EH血瘀证发病的易感危险因素之一。

烟碱对脑内膜受体及信号转导系统基因表达的调节作用

目的 利用基因表达芯片检测反复摄取烟碱对大鼠脑内膜受体和细胞信号转导系统相关的蛋白激酶基因表达的影响。方法 大鼠每天 2次皮下注射烟碱 (1 2mg·kg-1) ,连续用药 2wk后取全脑 ,提取RNA ,逆转录合成cD NA ,转录合成生物素化RNA ,并将其片断化后与芯片杂交 ,对荧光信号扫描分析。结合RT PCR方法对芯片分析结果进行验证。结果 反复摄入烟碱 ,脑内共有 2 2 4个重要蛋白的基因表达发生变化。其中 ,蛋白激酶、膜受体和离子通道共 94个发生变化。在蛋白激酶中 ,MAPK激酶等 13种上调 ;IP3 激酶等 7种发生下调。在膜受体中 ,NMDA受体等 9种发生上调 ;GluRD等 13种发生下调。结论 反复给予烟碱可影响多种膜受体和细胞信号转导相关基因的表达水平 ,这些变化可能与脑内N受体失敏有关。

沉默孕激素膜受体1基因抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖的研究

目的通过siRNA抑制子宫内膜癌细胞株Ishikawa孕激素膜受体1(progesterone receptor membrane component-1,PGRMC1)表达,探讨抑制子宫内膜癌细胞增殖的作用。方法应用Ambion公司siRNA设计工具设计以PGRMC1为靶标的siRNA并用该公司试剂盒化学合成。MTT法检测转染siRNA后细胞增殖抑制率,RT-PCR检测转染siRNA后PGRMC1基因mRNA水平变化,Western blot检测蛋白表达变化。流式细胞仪检测转染组与对照组细胞周期变化;Annexin V阳性细胞百分比,对比细胞凋亡率;双氢二氯荧光黄染色阳性率判定细胞内ROS水平。结果 si-PGRMC1可显著抑制该基因mRNA及蛋白的表达,使细胞增殖受抑,G2期细胞比例明显增加,凋亡细胞比率明显增加,细胞内ROS水平也随之升高。结论 PGRMC1参与了调控子宫内膜癌细胞增殖。

雌激素膜受体GPR30的研究进展

雌激素膜受体GPR30作为一个独立的雌激素受体,介导了雌激素众多的生理功能,该文就GPR30的结构、定位、信号通路和生物学效应作一综述。

参与小胶质细胞活化的膜受体研究进展

在中枢神经系统(CNS),小胶质细胞(MG)的作用越来越受到重视,MG被认为是CNS中天然免疫和适应性免疫的主要调节者〔1〕,MG以静息和活化两种状态存在,静息的MG对CNS起着支持、营养、保护和修复等作用,而活化的MG一方面营养和保护了CNS,另一方面通过释放促炎症细胞因子、自由基、超氧化物阴离子、一氧化氮(NO)、活性氧、前列腺素E2(PGE2)等多种物质,对CNS产生了更多的损伤作用。

宫颈鳞癌组织中跨膜受体蛋白Notch3的表达变化及其意义

目的观察宫颈鳞癌组织中跨膜受体蛋白Notch3的表达变化,并探讨其意义。方法收集宫颈鳞癌组织石蜡标本及其对应的正常宫颈组织石蜡标本各116例、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ+Ⅱ级病灶石蜡标本53例及CINⅢ级病灶石蜡标本41例,采用免疫组化法检测各标本中的Notch3,分析Notch3表达与宫颈鳞癌临床病理参数及预后的关系。结果宫颈鳞癌组织、正常宫颈组织、CINⅢ级组织及CINⅠ+Ⅱ级组织中Notch3的阳性表达率分别为52.6%、21.6%、43.9%和41.5%,宫颈鳞癌组织中Notch3的阳性表达率高于正常宫颈组织、CINⅢ级组织及CINⅠ+Ⅱ级组织,CINⅢ级组织及CINⅠ+Ⅱ级组织中Notch3的阳性表达率高于正常宫颈组织(P均<0.01)。Notch3表达与宫颈鳞癌肌层浸润深度、组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。Notch3表达阳性者和Notch3表达阴性者中位生存期分别为43、62.3个月,两者相比,P<0.05。Notch3表达阳性者1年生存率为93.4%、3年生存率为60.7%、5年生存率为31.1%,Notch3表达阴性者分别为98.2%、83.6%、60.0%,二者1、3、5年生存率相比,P均<0.05。结论宫颈鳞癌组织中Notch3阳性表达率升高,Notch3表达与肿瘤肌层浸润深度、组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移及预后有关,Notch3可能参与了宫颈鳞癌的发生及发展。

双参数流式细胞术检测Molt-4和Jurkat细胞膜受体途径凋亡的始动位点

目的：建立稳定的膜受体途径的细胞凋亡模型，探讨Cyclin／DNA双参数流式细胞术检测膜受体途径细胞凋亡的周期特异性的方法。方法：用典型的受体途径诱导剂TNF-α分别处理Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞；应用膜联蛋白V（AnnexinV）／碘化丙啶（PI）、API和Cyclin／DNA双参数流式细胞术等方法检测细胞凋亡。结果：AnnexinV／PI法检测早期凋亡细胞，早期凋亡率控制在8％～18％的周期特异性凋亡模型最典型；API法显示膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的G，期。Cyclin／DNA双参数流式细胞术显示受体途径的细胞周期特异性细胞凋亡的始动位点为G．早期。结论：应用AnnexinV／PI和API法能为建立稳定而典型的受体途径周期特异性细胞凋亡模型提供技术支撑；Cyclin／DNA双参数流式细胞术能够精确显示受体途径的细胞周期特异性细胞凋亡的始动位点。

褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响

目的：探讨褪黑素对小鼠胃癌细胞褪黑素膜受体MT1、MT2表达的影响。方法：应用小鼠MFC前胃癌细胞建立荷胃癌小鼠模型，不同浓度褪黑素干预后，运用免疫组织化学、实时荧光定量PCR、免疫印迹定位定量检测MT1、MT2表达的变化。结果：移植瘤肿瘤细胞表达褪黑素膜受体MT1、MT2，褪黑素促进肿瘤组织膜受体MT1、MT2表达，并呈剂量依赖关系。结论：褪黑素上调褪黑素膜受体MT1、MT2的表达，说明褪黑素可能通过膜受体信号通路抑制胃癌生长。

雌激素膜受体-α信号通路与乳腺癌的相关性

雌激素受体α和β是一类转录因子，产生多种生理功能，雌激素受体α和β调控靶基因转录是配体依赖性的，然而，近来研究表明雌激素受体仅还存在另外一条信号途径，也称作非基因组或膜启动途径，能够快速地被雌激素激活，这种雌激素受体α位于细胞膜，因此也称作膜雌激素受体α，已经报道膜雌激素受体α与多种肿瘤的发生相关，本文阐述了近年来雌激素受体α的研究成果以及与乳腺癌的相关性。

基于7次跨膜受体的药物发现基本方法——细胞检测

随着检测技术进步,含7个跨膜α螺旋结构的受体性质已渐为人们所了解。7次跨膜(7TM)受体不仅具有开关功能,更类似于信息微处理器;特定配体只能参与特定受体介导的部分信号机制,这就为药物发现开拓了一个新领域。为进一步发现7TM受体与配体间的新行为并量化评价药物对这一复杂系统的作用效能,进而指导药物化学研究,药理学检测已成为关注焦点。本文阐述从还原重组体到整体系统测定方法的回归,讨论药物效价与评价其效应的特定检测方法间的联系,强调新的检测方法在药物发现过程中的价值。