猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。

云南省狂犬病病人和犬类感染狂犬病病毒及M基因序列分析

目的调查云南省部分地区狂犬病病人和疫点犬群携带狂犬病病毒（rabies virus,RABV）状况及RABV膜基质蛋白（matrixprotein,M）基因序列分析,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2008-2009年在云南省采集犬脑组织标本606份,狂犬病病人唾液8份,脑脊液1份,用直接免疫荧光试验检测RABV抗原,用RT-PCR检测RABV核酸,对阳性标本进行M基因序列测定和分析。结果所有标本经检测,RABV抗原和/或核酸阳性16份,其中疫点扑杀的貌似健康犬脑组织3.10%（10/323）,狂犬病病人唾液5份、脑脊液1份。狗肉餐馆屠宰犬的脑组织283份均为阴性。云南16株RABV的M基因核苷酸和氨基酸同源性分别为88.5%～100%和85.2%～99.5%。它们与中国人用疫苗株aG核苷酸和氨基酸同源性分别为83.9%～85.7%和82.3%～93.6%;与人用疫苗株CTN181核苷酸和氨基酸同源性分别为99%～99.7%和98.5%～99%。系统进化分析表明,云南16株RABV均属基因Ⅰ型并可分为进化Ⅰ和Ⅱ群并分别与泰国等东南亚国家和相邻省份流行株具有较近的亲缘关系。结论云南省狂犬病流行与周边省份和东南亚地区的狂犬病传播扩散有一定关系;狂犬病疫点部分貌似健康犬携带RABV并具有传染源意义;云南狂犬病病毒株M基因与我国人用狂犬病疫苗CTN株的同源性和亲缘关系较近,但与aG株同源性存在。

马动脉炎病毒RT-LAMP检测方法的建立

为建立一种快速、简便、特异性高的马动脉炎病毒反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,针对马动脉炎病毒膜基质蛋白M基因的保守序列设计特异性引物,优化反应条件,建立了马动脉炎病毒的RT-LAMP检测方法并对其特异性和灵敏性进行了检测。结果显示,建立的RT-LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为0.12pg,是普通RT-PCR的100倍,检测时间仅需1h,肉眼即可观察检测结果。表明建立的RT-LAMP检测方法可用于进出口马动脉炎病毒的检疫。