应用骨形成蛋白与胶原膜复合物修复大鼠颅骨缺损

目的探讨骨形成蛋白(BMP)与胶原膜复合物(复合膜)修复大鼠颅骨缺损的效果。方法将BMP与胶原膜复合,在大鼠颅骨制备骨缺损,分别采用双侧覆盖复合膜、外侧覆盖复合膜进行治疗,以外侧覆盖胶原膜作为平行对照,并设空白对照。于术后2、4、6周,取标本进行X线检查及组织学观察。结果 两个覆盖复合膜组的缺损成骨面积百分比明显高于覆盖胶原膜的平行对照组(P<0.01)。术后4、6周,双侧覆盖复合膜组的成骨面积百分比明显大于单侧覆盖复合膜组(P<0.05)。双侧覆盖复合膜组的缺损术6周后已达骨性愈合。结论BMP与胶原膜复合既具有机械性阻挡作用,又具有骨诱导性,能加速骨缺损愈合。

小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定

目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．

人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型建立

目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的补体攻膜复合物C5b-9模型并确定其亚溶破剂量。方法通过体外培养HUVEC,在其表面组装攻膜复合物C5b-9,激光共聚焦检测其组装情况;增加补体浓度,通过激光共聚焦定性观察细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性定量检测,确定其亚溶破剂量。结果激光共聚焦结果显示C5b-9成功组装于HUVEC表面;当C5b6的浓度达到1.6 mg·L-1时,LDH的分泌量骤增,激光共聚焦显示该剂量下部分细胞胞膜破裂。结论成功建立人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型,为研究动脉粥样硬化药物防治奠定基础。

树突状细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型的建立

目的建立树突状细胞(DC)的补体攻膜复合物C5b-9模型,为研究补体攻膜复合物对DC的影响奠定基础。方法诱导人外周血单核细胞分化成为不成熟DC,C5b-9体外组装,激光共聚焦检测C5b-9在DC表面组装情况。结果成功诱导出不成熟DC,激光共聚焦显示C5b-9完整组装于DC表面。结论本研究成功建立了DC的补体攻膜复合物C5b-9模型,为将来进一步探讨C5b-9对DC的功能影响奠定了基础。

基因重组人骨形成蛋白-2胶原膜复合物防止大鼠矢状缝扩张后复发的作用

目的 研究基因重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2 )胶原膜复合物对大鼠顶骨矢状缝扩张后复发的影响。方法 10周龄SD雄性大鼠 32只 ,随机分为空白对照组、单纯扩张组、扩张加胶原膜植入组、扩张加rhBMP 2胶原膜复合物植入组 ,每组 8只。大鼠左右顶骨钻孔 ,建立矢状缝扩张模型 ,第 2 1天时取出扩张装置 ,第 2 8天时处死动物 ;用游标卡尺测量相应时间点骨孔间的距离并计算扩张复发率。动物处死后完整取下顶骨 ,去除表面的软组织 ,采用组织学方法观察各组大鼠矢状缝处组织改建情况 ,用原子吸收分光光度计检测该处的钙含量。结果 施加扩张力后 ,矢状缝中新骨形成活跃 ,rhBMP 2胶原膜复合物植入组形成特有的骨质桥连接 ,钙含量显著高于其他组 (P <0 .0 1) ,扩张复发率则明显降低 (P <0 .0 1)。结论 rhBMP 2胶原膜复合物可以降低扩张力作用下大鼠顶骨矢状缝的扩张复发率 ,为临床上降低扩弓复发率提供新的思路。

攻膜复合物与肾小球肾炎

作者用免疫荧光法观察了攻膜复合物(Membrane Attack Complex,MAC)及IgG、IgA、IgM、C_3在正常及40例各种病理类型肾小球肾炎的肾组织中的分布。正常肾小球内仅在系膜区发现少量的MAC的沉积,但是肾小球肾炎的肾组织中,随着病理改变的加重,MAC的沉积增加,从单纯沉积于系膜区扩大到毛细血管壁,甚至在包曼氏囊及肾小球基底膜中也可发现。我们还注意到随着MAC在肾小球内沉积的增多、尿中蛋白量高,同时基底膜上阴离子电荷消失增多,提示肾小球肾炎肾组织的损伤与MAC直接相关。

补体攻膜复合物C5b-9对人外周血树突状细胞的作用研究

目的建立人外周血树突状细胞(DC)的补体攻膜复合物C5b-9模型,并进一步研究补体攻膜复合物对DC的作用影响。方法诱导人外周血单核细胞分化成为不成熟DC,C5b-9体外组装,激光共聚焦检测C5b-9在DC表面组装情况,最后用乳酸脱氢酶和流式细胞术分析检测DC膜完整性以及细胞活性。结果成功诱导出不成熟DC,体外组装后激光共聚焦显示C5b-9完整组装于DC表面,乳酸脱氢酶和流式细胞术分析检测出不同浓度的C5b-9对DC的作用影响。结论本研究成功建立了DC的补体攻膜复合物C5b-9模型,并进一步探讨了不同浓度的C5b-9对DC的作用影响,为深入研究C5b-9对DC的功能变化奠定了基础。

骨形成蛋白与胶原膜复合物的生物学评价

目的 将骨形成蛋白（ Ｂ Ｍ Ｐ） 与胶原膜相复合， 探寻有效的复合方法并评价其生物体内的诱导活性及组织学反应。方法 采用三种不同的方法将 Ｂ Ｍ Ｐ与胶原膜相复合， 并将三种复合膜及１ｍｇ 的 Ｂ Ｍ Ｐ 分别植入小鼠股部肌肉陷窝内， 于术后１ 、２ 、３ 周处死动物， 进行组织学评价。结果 三种复合膜均能很好地诱导分化成骨， 较单纯 Ｂ Ｍ Ｐ 植入组成骨时间早且致密， 植入后三周， 复合膜已完全为骨组织所取代。但在植入早期， 采用胶粘法制得的复合膜产生了较为明显的炎症反应。结论 胶原膜能作为 Ｂ Ｍ Ｐ 的良好载体， 保持 Ｂ Ｍ Ｐ 的骨诱导活性， 在降解过程中逐渐诱导分化成骨。

络衡方不同配比组方对攻膜复合物C5b-9调节作用的研究

目的:研究络衡方不同配比组方对攻膜复合物C5b-9的调节作用。方法:不同配比的络衡方及安息香、徐长卿提取液作用于攻膜复合物C5b-9诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)动脉粥样硬化模型,观察用药前后HUVEC中TNF-α、IL-8、LDH的分泌量变化,同时对细胞进行激光共聚焦检测。结果:不同配比的络衡方作用于造模的HUVEC后,TNF-α、IL-8、LDH的分泌量均呈现不同程度的下降趋势,特别是1∶1组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:络衡方不同配比组方均能通过调节攻膜复合物C5b-9,发挥抗动脉粥样硬化的作用。以古书记载的1∶1配比较为显著。

特发性膜性肾病补体及补体攻膜复合物C5b-9的关联性分析

膜性肾病主要是以弥漫性肾小球基底膜增厚伴上皮细胞下免疫复合物沉积,引起足细胞受损为特征的一种肾小球疾病,在临床中较为多见[1]。按照病因和发病机制的不同,膜性肾病可以分为下列两种：继发性膜性肾病、特发性膜性肾病。在特发性膜性肾病的发生和发展中,足细胞自身抗原和特定抗体的结合引起的上皮下原位免疫复合物的产生发挥着至关重要的作用,而这一结合过程还会导致补体攻膜复合物C5b-9的出现,进而引起足细胞受损.

疏利分消方调控自噬对补体攻膜复合物所致足细胞损伤的内在机制研究

目的:以补体攻膜复合物诱导足细胞损伤体外模拟特发性膜性肾病发病过程,探讨疏利分消方冻干粉对自噬通路的调控作用。方法:以酵母多糖活化血清(ZAS)体外组装C5b-9,并建立C5b-9损伤足细胞模型,设置正常组、模型组和模型+中药组,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)释放率、自噬标记蛋白LC3及自噬底物蛋白P62荧光表达。结果:C5b-9孵育足细胞24 h后,模型组自噬标记蛋白LC3表达量较正常组明显增加(P<0.01),而自噬底物P62蛋白表达也显著增多(P<0.05);模型+中药组LC3、P62表达量与模型组比较明显减少(P<0.05)。结论:补体攻膜复合物可致足细胞自噬通路受阻,疏利分消方可疏通自噬通路,很可能是其对抗足细胞损伤,延缓特发性膜性肾病进展的内在机制。

人脐静脉内皮细胞清除补体攻膜复合物的机制

目的 探明内皮细胞清除补体攻膜复合物 (MAC)的途径及其清除动力学。方法 原代培养的人脐静脉内皮细胞以RH4 14荧光标记质膜双层 ,0℃组装亚溶破剂量的MAC ,37℃复苏后 ,LSCM实时监测MAC沉积诱导的质膜囊泡化形成和胞吞、胞吐情况。流式细胞仪定量检测内皮细胞表面MAC抗原的清除情况。结果 MAC沉积后 ,内皮细胞有活跃的质膜囊泡化形成 ,囊泡以胞吞和胞吐 2种方式离开细胞 ,并以前者占优。 37℃条件下 ,内皮细胞清除表面MAC的半衰期约为 5min。结论 内皮细胞可通过胞吞和胞吐 2种机制清除细胞表面沉积的MAC ,并以胞吞方式为主。

补体攻膜复合物细胞非致死性效应及其信号转导机制

有核细胞能通过自身机制抵抗同源补体溶破 ,同时亚溶破 MAC在细胞膜上沉积后 ,能刺激多种细胞的多种生物学活性改变 ,包括产生活性氧、释放花生四烯酸及其代谢产物、产生多种细胞因子、诱导膜蛋白表达和诱导细胞进入细胞周期等 ,此称 MAC的细胞非致死效应。这些效应是由 MAC活化细胞跨膜信号转导机制介导的。

Rh缺失型D--个体及家系成员Rh膜复合物蛋白的定量分析

目的考察罕见血型Rh缺失型D--个体及家系成员Rh膜复合物蛋白的变化情况。方法采用流式细胞仪测定红细胞膜上D、Band3、CD47、GPA、LW、RhAG蛋白的表达量。结果先证者、父亲、母亲、女儿、丈夫D、Band3、CD47、GPA、LW、RhAG蛋白的表达量与对照的比值为:2.38、1.61、1.83、2.00、0.62;1.03、0.72、1.12、0.85、0.99;0.35、0.79、0.66、0.88、0.91;0.86、0.80、0.91、0.81、0.87;2.46、未做、2.36、2.30、1.12;0.70、0.78、0.93、0.86、0.97。结论 D--个体及家系成员LW的表达与D抗原的表达量呈正相关,D--个体CD47的表达减少,其他蛋白变化不大。

自噬在膜性肾病补体攻膜复合物所致足细胞损伤中的作用

目的探讨自噬在补体攻膜复合物C5b-9所致足细胞损伤中的作用。方法利用酵母多糖活化正常人血清制作攻膜复合物C5b-9;分别用含C5b-9的酵母多糖活化血清(ZAS)、雷帕霉素、氯喹处理MCP-5足细胞,透射电子显微镜观察自噬泡形成,蛋白印迹、免疫荧光检测LC3、F-actin、podocin、nephrin表达。结果在ZAS刺激下,足细胞内LC3Ⅱ表达明显增加,自噬泡生成增多,骨架结构严重破坏。氯喹处理足细胞加重骨架结构破坏、下调F-actin、podocin和nephrin表达,而雷帕霉素减轻上述损伤(P<0.01或0.05)。结论自噬可保护足细胞抵抗亚溶解型C5b-9所致损伤。

用氧化染料对羊毛纤维染色时细胞膜复合物的作用

探讨了用氧化染料对羊毛纤维染色时羊毛纤维的细胞膜复合物结构变化的影响。考察了添加抗坏血酸和EDTA染色系统所获得的染色结果．可知羊毛纤维以外的纤维未染色．氧化染料对羊毛纤维的染色与羊毛纤维固有的组织结构有关。通过探讨细胞膜复合物的改性影响时（对染料等的渗透路径起作用）．可知经甲酸处理后，改性细胞膜复合物的纤维上染量降低．而且纤维的外皮层细胞未被氧化染料染色。

补体攻膜复合物与Heymann肾炎

Heymann肾炎是研究人类膜性肾病的经典动物模型 ,补体攻膜复合物与Heymann肾炎的发病密切相关 ,在Heymann肾炎的发病中 ,插入肾小球上皮细胞膜的补体攻膜复合物可造成细胞的亚溶解性损伤 ,进而介导血栓素A2 、活性氧和转化生长因子 β等炎症介质的释放 ,通过不同的作用机制导致肾小球滤过屏障的损伤和蛋白尿的产生。

补体攻膜复合物C5b-9在特发性膜性肾病发病中作用研究进展

在特发性膜性肾病发病过程中,足细胞自身抗原与相应抗体结合后引起上皮下原位免疫复合物形成,以此激活补体系统导致攻膜复合物C5b-9锚钉于足细胞膜上最终导致足细胞损伤。加强对足细胞抗原活性、补体活化以及补体攻膜复合物C5b-9的认识将为肾小球疾病的诊疗提供新的思路。本文就特发性膜性肾病中肾小球病变的发病机制、补体在介导的足细胞损伤过程中C5b-9产生及其对足细胞影响的研究进展作一综述。

热处理过程中磷脂酰胆碱对光系统Ⅱ膜复合物的保护作用

将光系统Ⅱ膜复合物与具有不同脂酰基侧链的磷脂酰胆碱(PC)重组, 然后利用氧电极、可变荧光和圆二色光谱研究在热处理过程中磷脂酰胆碱对光系统Ⅱ膜复合物的保护作用. 热处理降低了光系统Ⅱ膜复合物的放氧速率和vm/,FFⅱ 同时影响了光系统Ⅱ膜复合物的圆二色光谱, 但是PC抑制了热处理对光系统Ⅱ膜复合物的放氧速率、vm/FFⅱ和圆二色光谱的影响. 这些结果暗示在热处理过程中, PC对光系统Ⅱ膜复合物有保护作用, 并且PC的脂酰基侧链的不饱和程度对PC的热保护能力有影响.