建立膜抗原荧光抗体试验评价北京株冻干水痘疫苗免疫效果

为了建立用于水痘疫苗接种后血清中特异性抗体检测的膜抗原荧光抗体(FAMA)法,并对接种水痘疫苗后儿童血清中水痘特异性抗体进行检测,评价北京株水痘疫苗的免疫效果。以水痘带状疱疹病毒(VZV)感染细胞作为抗原制备成固定抗原玻片,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG作为二抗建立FAMA法,并对该法的敏感性、特异性进行验证。运用此法对不同剂量北京株水痘疫苗接种后儿童血清中特异性抗体进行检测,分析儿童血清中水痘特异性抗体水平以及免后抗体阳转率,并与Oka株水痘疫苗进行比较。结果显示,FAMA法敏感性可达0.0196IU/ml,特异性好。应用此法检测300名观察者免前免后双份血清样本中抗VZVIgG,易感者中北京株水痘疫苗原苗(39810PFU/0.5ml)、2000PFU/0.5ml、500PFU/0.5ml接种组儿童血清免后抗体阳转率分别为100%、98.77%、85.42%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为36.4、34.3、18.6,原苗与2000PFU间的抗体阳转率和GMT均无显著性差异(P>0.05),但原苗与500PFU、2000PFU与500PFU间的抗体阳转率和GMT均有显著性差异(P<0.05)。对照国产、进口Oka株水痘疫苗接种后抗体阳转率分别为95.35%、96.97%,抗体GMT分别为13.3、16.0,不同剂量北京株疫苗抗体阳转率与国产、进口Oka株疫苗相比,差别无显著性(P>0.05),但北京株疫苗原?

假病毒中和试验对狂犬病毒中和抗体效价的检测效能分析

目的:组织不同的实验室分析假病毒中和法(Pseudo Virus-based Neutralization Assay,PBNA)对不同样品的狂犬病病毒中和抗体水平的检测能力,并比较其与经典的快速免疫荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT)以及小鼠中和试验法(Mouse Neutralization Test,MNT)的相关性。方法:共9家实验室,分别采用PBNA、RFFIT以及MNT法对6份样品进行狂犬病病毒中和抗体检测,每个实验室进行3~5次重复实验。采用配对t检验及Pearson相关系数对3种检测方法的结果进行统计学分析。结果:PBNA与RFFIT、PBNA与MNT、RFFIT与MNT Pearson相关系数分别为0.985、0.988和0.974,抗体几何平均滴度进行t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:3种方法重复检测6份样品的定量结果具有高度的相关性,PBNA法可作为《中华人民共和国药典》方法RFFIT、MNT的一种替代或补充方法,用于人用狂犬病疫苗临床血清、狂犬病人免疫球蛋白及抗狂犬病血清的狂犬病病毒中和抗体效价检测。

基于Vero E6细胞的水痘-带状疱疹病毒抗膜抗原荧光抗体试验的建立与评价

目的 建立并评价基于非洲绿猴肾细胞(Vero E6)的水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗膜抗原荧光抗体(FAMA)试验方法。方法 在VZV-Oka减毒活疫苗株在Vero E6细胞中的适应培养毒株VZV-Oka-E6的基础上,首先使用3个不同感染剂量(10、10和10TCID)的VZV-Oka-E6病毒株感染Vero E6细胞,于显微镜下观察病变情况确定最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量;然后对比使用不同固定液固定感染细胞后制备的固定抗原片可检测到的灵敏度确定最优的固定液,从而建立基于Vero E6细胞的中和抗-VZV检测FAMA试验方法;采用建立的FAMA法,检测不同效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,确定该方法的敏感性;检测人单纯疱疹病毒(HSV)1、2型特异性抗体,评价该方法的特异性;分别使用同一批次制备和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品的中和抗-VZV,确定该方法的批内和批间重复性;检测已知的3种效价的VZV免疫球蛋白国际标准品,评价该方法的相对准确性。分别应用新建立FAMA法和ELISA法检测20(人)份单采血浆样品的抗-VZV效价,对2种试验检测结果做Spearman相关性分析。结果 通过优化确定了FAMA试验中最佳的VZV-Oka-E6病毒株感染量为10TCID,-20℃预冷的丙酮作为固定液。FAMA试验检测中和抗-VZV效价的灵敏度为31.25 mIU/mL;检测HSV 1、2型特异性抗体时结果为阴性;使用同一批次和4个不同批次制备的VZV感染细胞固定抗原片检测VZV免疫球蛋白国际标准品,变异系数分别为29.95%和26.71%;对3种效价VZV免疫球蛋白国际标准品的检测(值)与其理论值一致;FAMA法和ELISA法对20份单采血浆样品检测抗-VZV结果的相关系数为0.268。结论 所建立的FAMA试验检测中和抗-VZV效价具有良好的敏感性、特异性、重复性和相对准确性,可用于单采血浆和水痘-带状疱疹免疫球蛋白(VZIG)产品的中和抗-VZV效价检测。

间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛的组织嗜性；在感染的第１０天，只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光，而以肾脏中的荧光最强，特异性荧光持续时间最长的是肾脏，可达１４天，病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实，ＩＦＡ方法具有直观、特异等特点，在抗原定位上具有独特的优点。

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12～18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。

超微量荧光抗体膜抗原法(FAMA)测定麻疹抗体

麻疹抗体的测定,现在一般采用红血球凝集抑制法(下称HI法),该法和中和抗体测定法相关,在实践中被广泛使用。但在评价疫苗接种后的抗体效价上,灵敏度存在问题。 灵敏度好的麻疹抗体测定法除中和法(下称NT法)外,还有放射免疫测定法(下称RIA法)、酶联免疫吸附测定法(下称ELISA法)。

应用螨抗原片间接荧光抗体试验(IFA)诊断肺螨病的研究

本文首次应用以粉螨类为主的混合螨种制成的螨抗原片作间接荧光抗体试验(IFA),55例患者的阳性率为90.91％,阳性滴度几何均值为121.10,15例阴性对照3例显示荧光,其中最大滴度为1:8。荧光显色的螨体轮廊清晰可辨,体表呈荧光浓染。结果提示患者体内产生了针对螨抗原的特异性IgG,螨体抗原性较强的部位在体表、螫肢和足,同时表明本文创用的螨抗原片间接免疫荧光试验具有较高的敏感性和特异性,对肺螨病的辅助诊断具有一定的实用价值。

间接荧光抗体法快速检测病禽组织中的新城疫抗原

利用间接荧光抗体法IFA对用新城疫病毒NDV攻毒鸡胚的卵黄、胚体、尿囊液、尿囊膜和人工感染鸡、自然病死鸡的心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠扁桃体、法氏囊等8种脏器进行检测。结果鸡胚收集液、6例人工感染和15例自然病例的脏器检测结果均为阳性;脏器以肝、脾、肺、脑的检出率最高,检出效果最好。

应用间接免疫荧光法检测炭疽荚膜抗体

间接免疫荧光法检测炭疽荚膜抗体,可用以协助炭疽病例的确诊,并可区分炭疽显性患者和隐性感染者及菌苗接种者。本法对于接触史不够明确或临床表现不够典型的炭疽疑似病例的诊断具有重要意义,并且简便、快速,特异性强,可以推广应用。 炭疽病人的诊断应该依靠接触史、临床表现和实验室检查结果。在实验室检验时常用细菌分离以及涂片镜检等方法。然而这些常规方法在诊断病人时往往得不到令人满意的结果,

原发性膜性肾病标志物抗PLA2R抗体检测方法比较

目的探讨磁微粒化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体的差异。方法选取2020年1月—2021年5月雅安市名山区人民医院、四川省地矿局四〇五医院、成都市郫都区人民医院接受肾脏活检的患者215例,根据病理检查结果确诊PMN 135例(PMN组),其他肾病80例。另选取健康体检者72名。将其他肾病和健康体检者归入非PMN组。比较CLIA和ELISA检测抗PLA2R1抗体的效能(精密度、准确度、相关性、一致性)。分别采用2种方法检测PMN组和非PMN组抗PLA2R1抗体水平,比较2种方法检测抗PLA2R抗体诊断PMN的敏感性和特异性差异。结果CLIA的批内精密度(低值1.23%、高值1.45%)、批间精密度(低值2.59%、高值2.12%)均优于ELISA(批内精密度:低值8.18%、高值8.51%;批间精密度:低值8.67%、高值8.91%)。CLIA平均回收率为98.7%,ELISA平均回收率为96.0%,均符合要求。CLIA与ELISA的相关性较好(r=0.846,P<0.01),一致性较高(kappa值=0.928)。CLIA检测抗PLA2R抗体诊断PMN的敏感性(88.9%)优于ELISA(79.3%)(χ^(2)=4.675,P=0.031);2种方法的特异性分别为99.4%、96.1%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CLIA检测抗PLA2R抗体的效能优于ELISA,适用于临床大批量检测。

酶联免疫吸附试验和间接荧光免疫法检测抗双链DNA抗体的评价

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）属于全身性自身免疫病，病变一般累及身体的系统器官、关节以及脏器，并且各种自身抗体出现于血清内，在表现形式上，临床上具有多样性，并且非活动期与活动期相互交替出现是该疾病的典型特点[1]。SLE这一类疾病好发于女性[2]，然而迄今为止对其发病机制尚不清楚，本研究应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法及间接荧光免疫法（IIF）检测SLE患者和对照组血清的抗双链DNA（dsDNA）抗体，以评价2种检测方法在SLE诊断中的临床价值。

间接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体检测方法的结果比较

目的探讨临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体临床检测方法的结果比较。方法选取2018年1月至2019年1月在沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部的抗中性粒细胞胞质抗体临床检测样本200例,并进行临床间接免疫荧光法(IIF)和临床酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的临床一致性比较。结果两种临床方法的一致性较好且差异具有临床统计学意义(P<0.05)。结论临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验法单独检测抗中性粒细胞胞质抗体均有漏检,临床联合检测的效果最佳,值得在临床上进一步推广。

间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验检测自身免疫性肝炎抗体的效果

目的分析采用间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测自身免疫性肝炎(AIH)抗体的效果。方法选择2017年2月—2018年6月云南省滇南中心医院(红河哈尼族彝族自治州第一人民医院)收治的231例肝炎患者作为研究对象,包括AIH组(33例)、病毒性肝炎组(136例)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)组(59例)和原发性硬化性胆管炎(PSC)组(3例);另选择同期63名健康体检者作为健康对照组。采用间接免疫荧光法检测AIH中抗核抗体(ANA),采用Western blotting检测抗线粒体抗体M2(AMA-M2)、抗肝/肾微粒体抗体Ⅰ型(LKM-1)、抗可溶性肝抗原抗体/肝胰抗原抗体(SLA/LP)、抗平滑肌抗体(ASMA)与抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体(LC-1)等。结果ANA在AIH组、PBC组、PSC组的阳性检出率明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔72.73%(24/33)、88.14%(52/59)、66.67%(2/3)比30.15%(41/136)、6.35%(4/63),均P<0.05〕;AIH组中LKM-1、LC-1、SLA/LP、ASMA的阳性率以及PBC组中AMA-M2的阳性率均明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔LKM-1:15.15%(5/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),LC-1:9.09%(3/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),SLA/LP:3.03%(1/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),ASMA:57.58%(19/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),AMA-M2:93.22%(55/59)比4.41%(6/136)、0.00%(0/63),均P<0.05〕。结论临床上针对AIH抗体采用间接免疫荧光法联合Western blotting检测,具有较高的诊断效率,值得推广应用。

间接免疫荧光法与ELISA检测抗核抗体、抗双链DNA抗体的比对分析

目的探讨间接免疫荧光法(IIFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(ds-DNA)抗体的异同。方法抽取确诊或疑为自身免疫性疾病患者血清125例,同时采用IIFA法和ELISA法检测ANA82例,抗ds-DNA抗体检测57例,其中14例同时检测ANA和抗ds-DNA抗体。对两种方法检测结果不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA)。结果82例ANA阳性率IIFA法与ELISA法分别为87.8%和73.17%,差别有统计学意义(P<0.01);57例血清中抗ds-DNA抗体检测阳性率IIFA法与ELISA法分别为77.19%和71.93%,差别无统计学意义(P>0.05)。采用不同cutoff值时两种方法符合率比较,ANA、抗ds-DNA抗体检测结果差别均有统计学意义(P<0.01)。两法对一些稀有核型ANA检测符合率较低,而抗ds-DNA抗体的符合率在不同核型上没有差异。ANA检测以1:100为cutoff滴度,抗ds-DNA抗体以弱阳性为cutoff值时,两种方法可获得较高的符合率,但在检测滴度1:100ANA、弱阳性抗ds-DNA抗体时两种方法存在明显的不一致。结论IIFA法检测总ANA、抗ds-DNA抗体的敏感性均高于ELISA法,IIFA法作为ANA的筛查方法,阳性标本再进行ELISA法检测,可在获得荧光核型信息同时观察抗体滴度的变化情况,并且更快捷经济。两种或多种不同方法学原理的实验互相佐证,有助于减少实验误差。

两种方法检测血清抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的应用分析

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)在膜性肾病(MN)中的阳性率,分析两种方法在MN的诊断效能,为临床MN的诊治提供特异度更高的实验指标。方法选取该院肾内科就诊行肾病理活检并确诊的MN患者31例,对照组50例包括该院住院自身免疫性疾病及肾病综合征、肾功能不全患者38例及健康体检者共12例,收集血清同时进行以上两种方法检测,分析两种方法在MN中的诊断效能,并分析其对MN的诊断一致性。结果 MN组中,ELISA法及IIF法检测结果均为阳性17例,两种方法分别显示阳性和阴性各1例,两种方法同时阴性12例,两种方法检测阳性率为58.06%(18/31);对照组50例均为阴性,阳性率为0.00%(0/50)。两种方法检测抗PLA2R抗体阳性率在MN组和对照组间比较,差异有统计学意义(χ~2=37.32,P<0.05)。两种方法诊断MN的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率指标依次为58.06%(18/31),100.00%(50/50),100.00%(18/18),79.37%(50/63),83.95%(68/81);两种方法单独检验与联合检验对MN的诊断性能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA法在MN组及对照组中抗PLA2R抗体水平分别为45.42(2.00,760.40)及2.00(2.00,3.21)RU/mL,两组间抗体水平比较,差异有统计学意义(Z=-5.345,P<0.05)。结论 ELISA法及IIF法检测血清抗PLA2R抗体在MN诊断中具有较高的特异度与准确率,可作为MN诊断,尤其是特发性MN及无法行肾活检患者的必要和特异性血清学检测指标。