补体膜攻击复合物刺激血管内皮细胞胞浆游离钙离子浓度的变化

目的 在单个细胞水平 ,观测亚溶破补体膜攻击复合物 (MAC)诱导的血管内皮细胞 [Ca2 + ]i的动态变化。方法将原代培养的人脐静脉内皮细胞 ,以Fluo 4 /AM(1～ 6 μmol/L)和 0 .0 2 %PluronicF 12 7进行细胞钙荧光指示剂负载后 ,于 0℃组装亚溶破剂量的MAC。在 37℃条件下 ,以LSCM实时监测MAC沉积引起的胞浆钙荧光强度的变化。结果 MAC沉积后 ,多数细胞的钙荧光强度迅速增强 ,以后随时间的推移 ,升高的钙荧光逐渐下降 ,直至恢复至静息水平。定量分析选定的胞浆区域钙荧光强度的变化发现 ,不同细胞在 [Ca2 + ]i 的变化高度、持续时间和胞内钙振荡的特征等方面存在异质性。结论 MAC沉积到内皮细胞表面后 ,可诱导胞浆游离钙离子的浓度增高 ,且不同细胞 [Ca2 + ]i

抗人补体膜攻击复合物新抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的 研制针对人补体膜攻击复合物 (MAC)新抗原的特异性单克隆抗体。方法 在兔红细胞表面组装人MAC ,分离纯化RBC膜蛋白。以初步纯化的MAC免疫Balb c小鼠 ,取免疫小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,采用免疫斑点杂交的方法分别以纯化的单一补体成分C5、C6、C7、C8、C9和MAC同时进行阴性和阳性筛选。结果 获得了 2株仅与MAC反应而不与各单体成分反应的单克隆抗体。进一步以体外组装的补体终末复合物进行鉴定 ,证实所获单克隆抗体可特异性识别MAC复合物中C9分子暴露出的新抗原。经ELISA法测定 ,2株杂交瘤细胞的培养上清液和腹水效价分别为 1× 1 0 -3 ,1× 1 0 -3和 1× 1 0 -6,1× 1 0 -7;单克隆抗体的重链均属小鼠IgG1亚类 ,轻链均为κ型。结论 获得了 2株特异性识别MAC新抗原的单克隆抗体。

氯胺-T氧化C5、体外组装补体膜攻击复合物及其鉴定

目的 利用氧化的方法在无酶解反应发生的情况下获得活化形式的C5 ,进而实现以纯化的补体终末成分体外组装补体膜攻击复合物 (MAC)。方法 以蛋氨酸氧化剂氯氨 T与纯化的C5相互作用后 ,加入C6组装具溶血活性的C5 6复合物。以此复合物与NHS或纯化的后续终末补体成分组装MAC ,检测复合物的溶血活性。结果 反应性溶破实验证实 ,氯胺 T氧化C5与C6组装形成功能C5 6复合物 ,后者可与NHS或纯化的补体终末成分C7～C9体外组装具溶血活性的MAC ,并且所形成的C5 6复合物在 2 4h达到最大的溶血活性 ,48h仍保持稳定。结论 氯胺 T在不裂解C5的条件下产生了C5b样活性分子 ,该分子能与C6组装形成稳定的活性复合物 ,并可与其它补体终末成分组装产生活性MAC。

体外组装补体膜攻击复合物建立肾小管上皮细胞亚溶破模型

目的体外组装补体膜攻击复合物（membrane attack complex，MAC），建立肾小管上皮细胞HK一2亚溶破模型，为进一步探讨小管间质的免疫性损伤效应奠定基础。方法用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7～C9来源，体外组装sMAC建立HK-2亚溶破模型，LDH检测评价细胞亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，流式细胞仪检测sMAC对HK-2表面HLA-DR分子表达的影响。结果确定C56 1：480，NHS 1：20为HK-2最适亚溶破量；LSCM显示sMAC沉积于HK-2细胞表面；不同时相观察sMAC刺激后HK-2细胞HLA—DR表达量逐渐升高，HLA—DR比对照组显著增加（P〈0．01）。结论成功建立了肾小管上皮细胞补体膜攻击复合物亚溶破模型，补体活化可能导致TEC本身参与了免疫炎症效应。

补体和膜攻击复合物在脉络膜新生血管形成中的作用

目的探讨激光诱导的C57BL/6小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)形成机制中补体的角色及补体膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)的表达。方法 实验分为对照组、CVF预处理组、C3-/-小鼠组。用氪红激光对小鼠行实验性视网膜激光光凝,建立CNV动物模型,小鼠于光凝后第7天,用FITC-葡聚糖荧光素灌注心脏;单克隆特定抗体标记RPE-脉络膜-巩膜复合体铺片,共聚焦显微镜观察CNV发生率,免疫组织化学分析MAC表达。结果 CVF处理组小鼠补体CH50水平光凝后第1天、第3天、第5天、第7天分别为3%、3%、3%、2%,同时间点对照组均为100%,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。激光后第7天,对照组小鼠见CNV形成,而CVF预处理组及C3-/-组小鼠未见CNV形成。激光后第1天,对照组C57BL/6小鼠RPE-脉络膜-巩膜复合体见MAC强阳性染色,CVF预处理组及C3-/-小鼠组未见MAC阳性染色。结论 氪激光诱导CNV模型,补体的存在和激活、MAC的沉积是激光诱导CNV的必要因素。

体外组装补体膜攻击复合物对肾小管上皮细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的探讨补体膜攻击复合物（membrane attack complex，MAC）对肾小管上皮细胞HK-2细胞外基质成分Ⅳ型胶原表达的影响。方法以纯化的c56及新鲜正常人血清（the normal human serum，NHS）作为C7～C9来源，体外组装sMAC建立HK-2亚溶破模型，通过流式细胞仪检测MAC刺激后的Ⅳ型胶原表达情况，荧光显微镜检测MAC的沉积。结果MAC刺激后的HK-2与对照组比较Ⅳ型胶原和合成增多（P〈0．05）。结论亚溶破剂量的MAC能使HKC的Ⅳ型胶原表达上调，可能是引起肾小管间质纤维化细胞外基质增多的原因之一。

膜攻击复合物与肾脏疾病

膜攻击复合物（ＭＡＣ）形成是补体激活造成肾脏损害的主要途径。在体内，ＭＡＣ的形成受到多种因素调节，从而保护自身无辜细胞免受损害。ＭＡＣ形成可通过细胞溶解、促进细胞因子及炎症介质释放、协同细胞因子作用。

膜攻击复合物及其在肾脏疾病中的作用

本文对膜攻击复合物(MAC)的基础研究作简要介绍,主要就晚近 MAC 在肾脏疾病领域内的研究进展作较详尽的描述。

膜攻击复合物C5b-9的研究现状

C5b-9也称膜攻击复合物，是补体系统经经典、旁路和凝集素三条途径激活后形成的共同末端效应产物。近年来，国内外许多研究发现沉积于细胞表面的C5b-9能刺激多种细胞的多种生物学活性改变，包括产生炎性介质、细胞因子，并诱导膜蛋白表达等，C5b-9的这种细胞刺激效应在多种疾病的发病机制和病程进展中发挥作用，尤其是亚溶解型C5b-9，在炎症、神经系统疾病、肾脏病和动脉粥样硬化等疾病中具有致病等多重作用。

膜攻击复合物C5b-9对创伤失血性休克大鼠肝损害的影响研究

目的 观察大鼠创伤失血性休克时肝脏是否受膜攻击复合物攻击,以及膜攻击复合物是否对肝脏细胞凋亡产生影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,按随机数字表法均分为正常组及模型1、3、6、24 h组5组.采用骨折后经颈动脉放血至血压40 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）制备创伤失血性休克模型.取血浆,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测膜攻击复合物C5b-9浓度,采用速率法测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）浓度;取肝脏组织,采用免疫组化法检测C5b-9阳性表达,用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察病理改变.结果 正常组血中能检测到少量的C5b-9;模型1、3、6 h组血中C5b-9浓度（ng/L）较正常组显著升高（272.91±9.56、192.01±9.04、156.78±8.37比25.98±5.87,均P＜0.05）.模型3 h组血ALT（U/L）、模型1 h组血AST（U/L）即显著上升（92.90±8.83、264.83±31.14）,24 h达高峰（184.30±12.98、647.36±60.02）,与正常组（38.75±5.40、66.69±19.95）比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.正常组及模型1 h、6 h组肝脏未发现C5b-9阳性表达;模型3 h组门管区大量肝脏实质细胞存在C5b-9（个）沉积（22.60±1.06）,模型24 h组C5b-9沉积明显减少（2.20±0.60,P＜0.05）.正常组未检测到凋亡细胞;模型1、6、24 h组发现散在凋亡细胞（个：1.20±0.25、5.60±0.37、1.60±0.26）,模型3 h组中央静脉周围凋亡细胞明显增加,出现凋亡高峰（20.60±0.47）,与其余各组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.模型组可见肝细胞水肿变性、肝细胞膜完整性破坏,细胞溶解,以24 h病理损害最重.结论 创伤失血性休克时大鼠肝脏受到膜攻击复合物C5b-9的攻击,并且肝脏C5b-9的表达高峰与凋亡高峰在同一时间点出现,但并不是同一部位;模型3 h后血中低水平的C5b-9提示预后极差.

膜攻击复合物C5b-9在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达

目的：探讨膜攻击复合物C5b-9在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的表达。方法健康雄性SD大鼠60只，180～200 g，随机分为5组（n＝12）：假手术组（S组）、全肝再灌组1 h组（I/R 1 h组）、3 h组（I/R 3 h组）、6 h组（I/R 6 h组）和24 h组（I/R 24 h组）。制备大鼠全肝缺血再灌注模型，再灌注1、3、6、24 h末，取血测定谷丙转氨酶（ALT）和总胆红素（TBIL）浓度。取肝脏组织，检测C5b-9 mRNA和C5b-9蛋白的表达。结果与对照组比较，I/R各组大鼠ALT和TBIL水平均明显升高，I/R 3 h组达到高峰（P＜0.05）；I/R各组C5b-9的mRNA表达和C5b-9蛋白含量均有显著升高，且随着缺血再灌注时间的延长而逐渐升高，其中I/R 24 h组最高（P＜0.05）。结论补体C5b-9参与肝缺血再灌注的损伤，尤其是在再灌注24 h时达到高峰。

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血浆补体膜攻击复合物检测及意义

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血浆补体膜攻击复合物检测及意义张鲁勤王迎伟我们检测了阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者血浆补体膜攻击复合物（ｓＣ５ｂ～９）水平，观察了ＰＮＨ溶血的发生与ｓＣ５ｂ～９血浆浓度的相关意义，报告如下。材料和方法１观察对象正常...

膜攻击复合物在特发性炎性肌肉病的表达研究

目的总结膜攻击复合物在不同类型特发性炎性肌肉病的表达规律。方法收集2011—2014年在北京大学第一医院收集的57例皮肌炎、37例多发性肌炎、9例散发性包涵体肌炎及15例抗信号识别颗粒（SRP）抗体免疫性坏死性肌病患者的肌肉活体组织标本，对其肌纤维和肌内衣毛细血管膜攻击复合物的表达率进行检测，采用x^2检验或Fisher精确概率法进行统计学分析。结果皮肌炎、多发性肌炎、散发性包涵体肌炎及抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌肉膜攻击复合物表达总阳性率分别为75．4％（43／57）、86．5％（32／37）、4／9和13／15。肌纤维膜攻击复合物表达阳性率分别为50．9％（29／57）、81．1％（30／37）、3／9和13／15，肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达阳性率分别为49．1％（28／57）、24．3％（9／37）、1／9和6／15。散发性包涵体肌炎的肌纤维和肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达均低于其他类型炎性肌肉病，多发性肌炎和抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌纤维膜攻击复合物表达阳性率差异无统计学意义，但均显著高于皮肌炎和散发性包涵体肌炎，皮肌炎和抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的肌内衣毛细血管膜攻击复合物表达阳性率差异无统计学意义（X^2=0．397，P=0．574），但均高于多发性肌炎和散发性包涵体肌炎。所有类型特发性炎性肌肉病的膜攻击复合物均存在区域性分布特点，其中11．6％（5／43）的皮肌炎患者出现束周分布。结论膜攻击复合物在各种类型特发性炎性肌肉病的表达存在差异，抗SRP抗体免疫性坏死性肌病的膜攻击复合物表达兼具皮肌炎和多发性肌炎的特点。

狼疮肾炎患者血清H因子水平膜攻击复合物变化及其意义

目的 探讨膜攻击复合物（MAC）和H因子在LN中的临床意义.方法 应用ELISA检测30例LN患者与25名健康对照组血清中MAC和H因子的浓度,并分析比较其在LN患者血清中的变化及相关实验室指标的关系.采用t检验、x2检验和Spearman相关性分析进行统计学分析.结果 ①LN患者血清MAC的浓度高于健康对照组[（74± 100） μg/ml与（18±8）μg/ml,Z=2.777,P＜0.05];活动组MAC浓度高于非活动组[（92±53） μg/ml与（32±23） μg/ml,t=3.661,P＜0.05];②LN患者血清H因子的浓度低于健康对照组[（311±146） ng/ml与（412±76） ng/ml,Z=-3.139,P＜0.05];活动组H因子低于非活动组[（282±11） ng/ml与（330±20） ng/ml,t=-8.333,P＜0.05];③LN患者血清MAC水平与补体C3呈负相关（r=-0.603,P＜0.05）,与抗dsDNA抗体、尿蛋白定量（24 h）、英国SLE评估小组（BILAG）积分、SLEDAI积分呈正相关（r值分别为0.481,0.694,0.709,0.613,P均＜0.05）;④LN患者血清H因子水平与补体C3呈正相关（r=0.568,P＜0.05）,与抗dsDNA抗体、尿蛋白定量（24 h）、BILAG积分、SLEDAI积分呈负相关（r值分别为-0.443,-0.485,-0.639,-0.597,P均＜0.05）.⑤LN患者活动组18例肾活检肾脏病理结果病变以肾小管上皮细胞变性及肾小球细胞增生为主;非活动组11例肾活检病理结果病变以系膜细胞增生为主.结论 血清MAC升高、H因子减少通过补体经典途径、旁路途径加速LN的发展,同时与LN全身活动性及肾脏病理改变密切相关,可作为生物标志物反映LN活动性,也对肾脏病理活动性病变的生物学诊断价值提供了新的线索.

膜攻击复合物对继发性脑损伤的影响

脑损伤后普遍存在的炎性反应激活补体并通过多种途径导致和加重继发性脑损伤。膜攻击复合物具有直接破坏血脑屏障、促使红细胞溶解、促进释放细胞因子、氧自由基和金属基质蛋白、加剧炎症反应的生物特性,从而加重继发性脑损伤。本文对膜攻击复合物造成继发性脑损伤的研究进行综述,希望能对相关研究和法医学鉴定提供参考。

人脐静脉内皮细胞清除补体攻膜复合物的机制

目的 探明内皮细胞清除补体攻膜复合物 (MAC)的途径及其清除动力学。方法 原代培养的人脐静脉内皮细胞以RH4 14荧光标记质膜双层 ,0℃组装亚溶破剂量的MAC ,37℃复苏后 ,LSCM实时监测MAC沉积诱导的质膜囊泡化形成和胞吞、胞吐情况。流式细胞仪定量检测内皮细胞表面MAC抗原的清除情况。结果 MAC沉积后 ,内皮细胞有活跃的质膜囊泡化形成 ,囊泡以胞吞和胞吐 2种方式离开细胞 ,并以前者占优。 37℃条件下 ,内皮细胞清除表面MAC的半衰期约为 5min。结论 内皮细胞可通过胞吞和胞吐 2种机制清除细胞表面沉积的MAC ,并以胞吞方式为主。

补体攻膜复合物细胞非致死性效应及其信号转导机制

有核细胞能通过自身机制抵抗同源补体溶破 ,同时亚溶破 MAC在细胞膜上沉积后 ,能刺激多种细胞的多种生物学活性改变 ,包括产生活性氧、释放花生四烯酸及其代谢产物、产生多种细胞因子、诱导膜蛋白表达和诱导细胞进入细胞周期等 ,此称 MAC的细胞非致死效应。这些效应是由 MAC活化细胞跨膜信号转导机制介导的。

补体攻膜复合物与Heymann肾炎

Heymann肾炎是研究人类膜性肾病的经典动物模型 ,补体攻膜复合物与Heymann肾炎的发病密切相关 ,在Heymann肾炎的发病中 ,插入肾小球上皮细胞膜的补体攻膜复合物可造成细胞的亚溶解性损伤 ,进而介导血栓素A2 、活性氧和转化生长因子 β等炎症介质的释放 ,通过不同的作用机制导致肾小球滤过屏障的损伤和蛋白尿的产生。

C5b-9复合物与肾脏疾病研究进展

C5b 9复合物是补体激活后形成的C5b 8与多个C9结合后的产物 ,可形成跨膜通道 ,介导多种活性物质的释放 ,参与肾组织的损伤 ,是许多肾脏疾病的重要致病因素。C5b 9受多种补体调节蛋白如CD5 9、Crry等的调节 ,并通过介导活性氧和花生四烯酸的释放 ,影响细胞凋亡等参与肾脏疾病的发生和发展。