海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术

本文较为详细地介绍了海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术 ,对其关键步骤和需要注意的问题进行了重点说明 ,同时对CA1区锥体神经元突触活动的特点、电压门控性Ca2 +通道以及谷氨酸 (glutamate ,Glu)、γ 氨基丁酸 (GABA)受体通道电流性质等进行了观察和分析。实验结果为采用海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术研究海马神经元离子通道动力学性质和中枢神经系统药物对突触活动的影响提供了可靠的依据。

建立大白鼠视皮层脑片膜片钳全细胞记录技术

目的 建立大白鼠视皮层脑片膜片钳全细胞记录技术。方法 利用盲法获得膜片记录 ,即根据电极进入溶液中到获得全细胞膜片的过程中 ,测试方波脉冲的变化来寻找细胞。结果 能成功地进行视皮层全细胞记录。结论 本法操作简便 ,所需仪器简单 ,易于推广应用。

在体大鼠膜片钳全细胞记录技术初探

目的 :建立在体大鼠膜片钳全细胞记录方法。方法 :固定麻醉大鼠后对其顶叶皮层锥体神经元行全细胞记录。结果 :成功记录到顶叶内锥体层神经元电压门控性钠离子通道电流及自发突触活动电流。结论 :初步建立了在体大鼠膜片钳全细胞记录方法 。

与视皮层脑片膜片钳全细胞记录相结合的生物素标记技术

目的 在视皮层脑片膜片钳全细胞记录的同时 ,建立神经元的生物胞素标记技术。方法 利用盲法获得视皮层脑片膜片钳全细胞记录 ,在电生理记录的同时 ,Biocytin通过记录电极尖端灌注到所记录的细胞内 ,标记成功后再进行组织学染色。结果 能观察视皮层同一细胞的电生理和形态学特性及神经元之间的染色耦合。结论 本法操作简便 ,细胞标记成功率高 ,易于推广使用。

膜片钳实验技术系列讲座──第四部分 全细胞记录法和穿孔膜片钳法（续）

膜片钳实验技术系列讲座──第四部分全细胞记录法和穿孔膜片钳法（续）陈军译、李继硕校阅（第四军医大学解剖学教研室，梁琚脑研究中心，西安７１００３２）（八尾宽：日本生理学杂志１９９４，５６：３０５～３３２）２．离子通道微观性质分析２．１突触电流的分析通过...

膜片钳全细胞记录法在研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制中的应用

为了研究中性氨基酸转运蛋白-谷氨酰胺转运蛋白的结构与功能,采用膜片钳全细胞记录法测定谷氨酰胺转运蛋白2介导的电流.结果表明:谷氨酰胺转运蛋白诱导了底物氨基酸和Na+浓度依赖性电流,可用于测定底物氨基酸和Na+对转运蛋白的表观亲和常数Km,SNAT2野生型对丙氨酸的表观亲和常数KmA la为(200±5)×10-6mol/L,对Na+的表观亲和常数KmNa为(100±7)×10-3mol/L.谷氨酸转运蛋白转运底物氨基酸过程是生电的过程,在膜电势负值时氨基酸转运电流增大,可用于转运机制的研究.因此膜片钳全细胞记录法是研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制的有效方法.

穿孔膜片钳记录猪冠状动脉平滑肌细胞K^+电流技术初探

常规全细胞膜片钳模式形成的同时,细胞内液与电极液交换造成细胞内物质丢失,此现象对小细胞的影响更为明显。穿孔膜片钳技术使电极与细胞胞质之间保持电学连续性,它使细胞内环境保持稳定,利于研究胞内信息传导机制,并可改善常规全细胞膜片钳时破膜所造成的封接稳定性的破坏,有望提高实验的成功率。本研究报道应用此技术在猪冠状动脉平滑肌细胞上记录的全细胞K+电流和由大电导钙激活钾通道BKCa所介导的自发瞬时外向电流ISTOCs。

Amphotericin B在全细胞穿孔膜片钳技术中的应用研究

目的:为研究海德氏突触的电生理特性,建立用amphotericin B穿孔的膜片钳技术。方法:本文应用两性霉素B(amphotericin B)在小鼠脑干的calyx细胞上进行穿孔膜片钳技术的研究。结果:应用amphotericin B进行穿孔后,通道电流衰减现象显著变慢。Amphotericin B的最适浓度为400μg/ml。结论:本研究摸索出了一种稳定的穿孔膜片钳全细胞记录技术,可以更有效,更真实的反应神经元通道电流的电生理特性。为穿孔膜片钳技术在听觉信息传导和调控研究中的应用提供了基础资料。

单通道和全细胞记录技术

离子通道的活动是可兴奋细胞传递信息的基础 ,膜片钳技术的发明导致了生命科学的一场革命。对膜片钳的工作模式、记录模式。

活体动物全细胞记录技术及其应用

活体动物全细胞记录技术不仅可以用于研究感觉系统对自然刺激(如视觉系统的光刺激、听觉系统的声音刺激等)反应的特性和规律,还可以较准确地记录细胞的突触电位(包括阈下反应),实现EPSP和IPSP的相对分离,并实现活体细胞胞内灌流,从而进一步研究感觉信息的处理机制。本文较为详细地介绍了在活体动物上进行全细胞记录的方法,包括一些技术细节和关键仪器设备的选取原则,举例说明了该技术在视觉系统研究和体感系统研究中的应用,并讨论了这一方法在神经科学中的应用前景。

脑片盲法全细胞记录技术的应用

目的：阐明脑片全细胞记录技术的原理，介绍获得满意封接的条件和程序。方法：采用国内数据采样分析系统，进行微电极定位。常规膜片钳方法进行全细胞记录。结果：在脑片上成功记录出双向的全细胞电流。突触前施加电刺激，可在突触后记录出兴奋性电流。结论：通过提高微电极定位准确率，可有效增加盲法技术的封接成功率。

膜片钳技术在神经干细胞领域的研究现状及应用展望

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的)离子通道分子活动.此技术的出现将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同领域融汇成一体,是对生理科学和神经科学研究的重大变革.

酶分离猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道全细胞记录电学特性研究

目的 :观察急性酶分离猪冠脉平滑肌全细胞钙激活K+ 电流 (IKCa)特性及摸索可行的记录方法。方法 :采用常规膜片钳全细胞记录技术。结果 :分离的猪冠脉平滑肌细胞 (来自 15只猪的 4 7个细胞 ,膜电容 32 .3±8.8pF)上的主要K+ 电流为IKCa,此电流具电压依赖性和胞内游离Ca2 + 依赖性。IKCa选择性阻断剂Charybdotoxin(ChTX ,12 5～ 2 5 0× 10 - 9mol.L- 1 )可使外向电流降低 6 8± 8% (n =5 )。 10～ 2 0× 10 - 3mol.L- 1 TEA可阻断 74± 5 % (n =7)的外向电流。结论 :猪冠脉平滑肌细胞全细胞K+ 电流主要成分为IKCa,它与其它组织细胞报道的情况类似而又有独自的特点。我们的数据为猪冠脉平滑肌全细胞K+ 电流特性的认识提供了第一手资料 。

全细胞记录模式影响肥大细胞分泌的机制

利用细胞膜电容监测技术和显微镜形态观察的方法，研究了全细胞记录模式对肥大细胞分泌反应的影响。结果表明，机械力与电场力对细胞分泌反应有一定的抑制作用，胞浆内离子和活性小分子的冲洗流失则是影响分泌反应的根本原因。最后提出了全细胞记录模式对肥大细胞分泌反应的作用机制。

穿孔膜片钳技术在离子通道电流研究中的应用

目的:传统的全细胞膜片钳技术在离子通道电流的记录中存在机械稳定性差,对细胞的损伤大,以及胞内液的被渗析影响与细胞内信号转导和离子通道调控有关的第二信使物质的正常运行。而穿孔全细胞膜片钳技术应用二性霉素B或制霉菌素在细胞膜上形成特定的孔道,选择性地允许一些离子和大分子物质,从而使细胞内环境保持相对稳定,在一定程度上弥补了上述缺陷,实验成功率也相应提高。本文就穿孔膜片钳技术在全细胞离子通道电流记录中的应用进行探讨。

膜片钳技术与离子通道的研究

膜片钳技术（patch clamp recording techniques）是一项新兴的技术,它是通过记录离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一离子通道的分子活动[1]。以后经Neher等<sup>[2]的进一步完善,其电流测量灵敏度达1pA,空间分辨达1μm和时间分辨率达10μs,从而可对通道的电导及动力学特性、离子选择性、药物学特性,以及通道的调节机制等方面进行深入细致的研究。

大鼠海马CAⅠ区锥体细胞的急性分离及全细胞记录方法

目的寻求一种适用于膜片钳技术(PCT)的大鼠海马CAⅠ区锥体细胞的急性分离及全细胞记录方法。方法采用酶加机械分离的方法制备10～16d鼠龄的海马CAⅠ区锥体神经元。其电生理学特性测定用全细胞PCT。结果所分离的85%神经元不仅形态学特征保存完好,而且保存了主要的离子通道活性。结论成功建立了一种简单、快速、可靠的适用于PCT的大鼠皮层神经元急性分离方法。

大鼠视皮层脑片锥体神经元树突膜片钳技术

目的建立树突膜片钳技术,观察全细胞记录模式下大鼠视皮层脑片锥体神经元树突部位电生理性质。方法 采用红外微分干涉相差显微镜结合电耦合式摄像机,利用膜片钳技术进行近端树突钳制,成功形成全细胞记录模式后将膜电位钳制在不同水平,记录大鼠视皮层锥体神经元树突部位的电生理性质。结果 成功记录到电流钳模式下树突部位膜电位,及膜电位钳制在不同水平时电压钳下记录到的突触后自发及诱发反应。结论 采用可视法树突膜片钳技术可以记录到树突部位膜电位、自发及诱发反应,这项新技术对树突部位电生理性质及其上分布的离子通道功能的深入研究具有重要意义。