膜片钳法研究镁离子对萝卜液泡膜SV通道的影响

用膜片钳全液泡记录方式研究了Mg2+对萝卜(RaphanussativusL.)液泡膜上SV通道电流的影响.结果表明:用EGTA配位Ca2+后,胞质Mg2+不能够代替Ca2+来激活SV通道;外液中不同浓度的Mg2+对通道电流有抑制作用,并且呈一定的浓度依赖性,用Hill方程拟合浓度依赖性曲线,得抑制常数Ki=(1.94±0.11)mmol/L,而内液中的Mg2+不影响通道电流.这一结果为进一步研究镁对植物生理活动的影响从通道水平提供了重要依据.

稀土跨膜的荧光法与膜片钳法研究

本文主要对国内稀土离子跨膜运输研究的进展作了评述 ,着重介绍了用荧光法及膜片钳法研究的结果 。

膜片钳法研究镧离子跨心肌细胞膜的行为

应用膜片钳全细胞记录模式研究了镧离子跨大鼠心肌细胞膜的惰况.0.01～5 mmol/L的镧离子不能通过L-型钙通道产生内向电流,只有在钙离子载体ionomycin（1μmol/L）的运载下才能经由L-型钙通道进入胞内;当形成外向钠离子浓度梯度时,镧离子可以Na-La交换的形式进入细胞,且交换电流基本随胞外镧离子浓度的增加而增大,但与同浓度的Na-Ca交换电流相比较,前者仅为后者的14％～38％.这一膜片钳实验证明:镧离子一般不经L-型钙通道进入心肌细胞,而能以Na-La交换的形式痕量跨入心肌细胞内.

膜片钳法研究镧对心肌细胞钾通道的作用

用全细胞膜片钳技术研究了La3+对大鼠心室肌细胞钾通道的作用机理.灌流法酶解得到单个大鼠心室肌细胞,给细胞施一跃迁电压可引出一非钙依赖性电压激活的外向钾电流.将不同浓度的La3+加入细胞外液后,非钙依赖性电压激活的外向钾电流明显减小,且随着浓度增加抑制作用增强.心肌细胞钾通道电流作为心肌动作电位的主要复极化电流,受到La3+的抑制作用,这提示在研究稀土生物效应时应该重视它对心脏功能的影响.

膜片钳全细胞记录法在研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制中的应用

为了研究中性氨基酸转运蛋白-谷氨酰胺转运蛋白的结构与功能,采用膜片钳全细胞记录法测定谷氨酰胺转运蛋白2介导的电流.结果表明:谷氨酰胺转运蛋白诱导了底物氨基酸和Na+浓度依赖性电流,可用于测定底物氨基酸和Na+对转运蛋白的表观亲和常数Km,SNAT2野生型对丙氨酸的表观亲和常数KmA la为(200±5)×10-6mol/L,对Na+的表观亲和常数KmNa为(100±7)×10-3mol/L.谷氨酸转运蛋白转运底物氨基酸过程是生电的过程,在膜电势负值时氨基酸转运电流增大,可用于转运机制的研究.因此膜片钳全细胞记录法是研究谷氨酰胺转运蛋白分子机制的有效方法.

海马脑片锥体神经元钙离子通道的盲法膜片钳研究

目的和方法 :采用大鼠海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术研究CA1区锥体神经元电压门控性Ca2 + 通道的动力学特征。结果 :大鼠海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性Ca2 + 通道电流具有如下特点 :①激活的阈电位偏低 ,为 (- 4 9.3± 8.6 )mV ,范围为 - 6 5～ - 30mV(n =2 3)。②衰减时间常数τ值较大 ,且变化范围大 (10 0～ 70 0ms) (n =12 ) ,并且衰减具有Ca2 + 电流幅值的依赖性 ,③稳态失活呈现电压依赖性 ,半失活电压为 (- 5 5 .4± 9.7)mV ,斜率因子为 (5 .3± 0 .9)mV(n =10 )。④当细胞外Ca2 + 浓度为 2 .5mmol/L时 ,Ca2 + 通道的反转电位为 (5 5±13)mV(n =10 )。⑤尾电流成分较为单一 ,不表现电压依赖性。另外 ,Ca2 + 电流对戊脉胺及双氢吡啶类化合物硝苯地平均不敏感。结论 :根据上述Ca2 + 电流特征 ,海马脑片CA1区锥体神经元上的Ca2 +

大鼠嗜铬细胞分泌的膜片钳和 fura-2 联合检测

在原代培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞上，综合运用细胞内钙测定法和全细胞膜片钳法，以检测膜电容变化为手段测定单一肾上腺嗜铬细胞的胞吐过程．通过施加＋２０ｍＶ去极化时引起的钙电流，对细胞膜电容的变化以及细胞内钙浓度［Ｃａ２＋］ｉ变化的同时检测，多方位地确定影响细胞分泌的因素．

模拟缺血对豚鼠心室肌细胞Na^+/K^+泵电流的影响

目的观察模拟缺血对心室肌细胞Na+/K+泵电流的影响。方法采用胶原酶酶解法分离豚鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳方法记录心室肌细胞的Na+/K+泵电流(Ip)。采用代谢抑制剂2-脱氧葡萄糖和碳酸氰-4-三氟甲氧基苯腙模拟缺血灌流,造成细胞的模拟缺血,观察模拟缺血对心室肌细胞Ip的影响,并探讨模拟缺血对双氢哇巴因(DHO)高亲和力Ip和DHO低亲和力Ip的影响。结果模拟缺血2.5min时Ip抑制率为(30.15±0.05)%,与4.0min时的(49.33±0.02)%比较差异有统计学意义(P<0.05);6.0min时Ip抑制率为(62.27±0.04)%,与4.0min时的比较差异有统计学意义(P<0.05);Ip抑制程度随缺血时间延长而增加(r=0.82,P<0.05)。模拟缺血特异性抑制DHO低亲和力Ip,而不影响DHO高亲和力Ip。结论模拟缺血对DHO低亲和力Ip的特异性抑制作用,可能是缺血所致心室肌细胞内Na+浓度升高的主要因素之一。

乙酰胆碱诱发的豚鼠心室肌反跳作用研究

观察乙酰胆碱 (ACh)诱发的豚鼠心室肌肌力及钙电流的反跳作用 ,并探讨其作用机制。采用豚鼠离体左室乳头肌观察 1μmol/LACh单独对心室肌收缩力 (Fc)的影响及在 10nmol/L异丙肾上腺素 (Iso)存在时对Fc的影响 ,并应用膜片钳全细胞记录方法分别观察 1μmol/LACh和 1μmol/LACh +10nmol/LIso及迅速洗脱ACh对豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流 (ICa L)的影响。结果 :1μmol/LACh对心室肌Fc有直接抑制作用 ,抑制率为 30 .8%± 10 .7%(P <0 .0 5 ) ,而快速洗脱ACh后 ,Fc反跳性增强了 2 5 .5 %± 10 .3% (n =7,P <0 .0 1)。而在应用 10nmol/LIso后 1μmol/LACh对Fc有间接的抑制作用 ,快速冲洗ACh后亦引起Fc的反跳性增强 ,与Iso组相比增强了 2 7.1%±13.2 % (n =7,P <0 .0 1)。 1μmol/LACh对心室肌细胞基础峰电流无明显影响 (n =8,P >0 .0 5 ) ;而以基础ICa L峰值(931± 16 1pA)作对照 ,在加入 10nmol/LIso后 ,ICa L峰电流增强到 1889± 331pA(n =7,P <0 .0 1) ;再给予 10nmol/LIso +1μmol/LACh快速灌流 2min ,峰电流降低为 15 12± 2 0 2pA(P <0 .0 1) ,用含 10nmol/LIso的细胞外液快速洗脱ACh ,峰电流增强到 2 10 7± 2 0 5pA ,较Iso组反跳性增强了 15 .8%± 4 .0 % (n =7,P <0 .0 1)。结论

心房颤动患者超速激活延迟整流性钾电流重构的研究

目的:探讨心房颤动(房颤)患者超速激活延迟整流性钾电流(ⅠKur)的改变及意义。方法:采用膜片钳全细胞法分别记录窦性心律(窦律)患者心房肌细胞(窦律组)和房颤患者心房肌细胞(房颤组)ⅠKur密度,并进行对比。结果:指令电位+20～+50mV时,房颤组ⅠKur密度均较窦律组明显降低(P<0.05)。结论:ⅠKur密度下调是房颤心房电生理重构的重要离子基础,可能对心房动作电位时程的缩短具有一定代偿意义。

四氢小檗碱衍生物86035对豚鼠心室肌L型钙通道的抑制作用

目的 研究氯苄基四氢小檗碱 (CPU) 86 0 35对豚鼠单个心室肌细胞L型钙通道的抑制作用 ,分析对L型钙通道相互作用的状态依赖性。方法 采用膜片钳全细胞技术 ,记录不同浓度(5 0～ 2 5 0 μmol/L)CPU86 0 35作用前后的L型钙电流 (ICa L)。结果 (1)CPU86 0 35呈剂量依赖性地抑制L型钙电流 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 75 μmol/L。(2 )CPU86 0 35对L型钙电流的抑制依赖于保持电位(HP)。HP =- 4 0mV时 ,75 μmol/LCPU86 0 35的抑制率为 4 9%± 2 % ,HP =- 80mv时 ,抑制率为6 4 %± 4 %。 (3)CPU86 0 35作用后 ,稳态激活曲线右移 ,V1/ 2 由对照的 6 7mV± 1 6mV变为 15 4mV±0 8mV。 (4)CPU 86 0 35作用后 ,稳态失活曲线右移 ,V1/ 2 由对照的 - 19 1mV± 2 5mV变为 - 12 6mV± 2 7mV。 (5 )用药后L型钙通道从失活状态恢复的时间变长。结论 CPU86 0 35对L型钙通道有较强的抑制作用 。