膜结合鸟苷酸激酶蛋白质家族的结构与功能

MAGUKs蛋白家族成员位于细胞表面 ,通过其PDZ、SH3 、GK结构域调节离子通道受体的聚集 ,构建细胞骨架 ,参与信号转导 ,调控细胞周期进程 。

对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变

目的探讨对香豆酸(p-CA)对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法将大鼠分为6组:对照组(n=10)、DN组(n=10)、低剂量对香豆酸组(L-p-CA)(n=10)、中剂量对香豆酸组(M-p-CA)(n=10)、高剂量对香豆酸组(H-p-CA)(n=10)和RhoA激动剂U-46619组(U-46619)(n=12)。对照组大鼠为健康SD大鼠,其他组大鼠均为高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠。造模后,对照组和DN组大鼠灌胃2 mL 0.5%羧甲基纤维素溶液,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠分别灌胃2 mL剂量为50,100,200 mg/(kg·d)的对香豆酸溶液,U-46619组大鼠同时灌胃1 mL对香豆酸溶液(剂量为200 mg/(kg·d))以及1 mL剂量为30μg/(kg·d)的RhoA激动剂U-46619。各组大鼠均干预12周。治疗后检测各组大鼠生化指标水平:空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)和24 h尿蛋白;以及血清氧化应激指标水平:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)。通过苏木精-伊红(HE)和Masson三色染色评价大鼠肾脏损伤和纤维化。通过qRT-PCR检测肾脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)转录活性。通过Western blot检测肾脏TNF-α、IL-1β、MCP-1、RhoA和ROCK1蛋白表达水平。结果与对照组比较,DN组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平升高(P<0.05);肾组织发生明显病变,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与DN组比较,L-p-CA组、M-p-CA组和H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与L-p-CA组和M-p-CA组比较,H-p-CA组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平降低(P<0.05);肾组织病变减轻,肾组织纤维化面积降低(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均升高(P<0.05),MDA水平降低(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与H-p-CA组比较,U-46619组大鼠的FPG、FINS、24 h尿蛋白、HbA1c、BUN和Cr水平均升高(P<0.05);肾组织病变加重,肾组织纤维化面积升高(P<0.05);血清SOD、CAT和GSH-PX水平均降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05);肾组织TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA和蛋白水平均升高(P<0.05);肾组织RhoA和ROCK1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论对香豆酸通过抑制RhoA/ROCK信号通路减轻糖尿病肾病病变。

跨膜丝氨酸蛋白酶6在低氧及运动中对机体铁代谢的影响

跨膜丝氨酸蛋白酶6（transmenbrane serineproteases 6,TMPRSS6）也称matriptase-2,属于Ⅱ型跨膜型丝氨酸蛋白激酶家族（typeⅡtransmenbrane serine proteases,TTSPs）。2008年Du等发表在《Science》上的论文首先报道了TMPRSS6在维持机体铁稳态中发挥重要作用。

突触相关蛋白102的结构、功能及相关研究进展

突触相关蛋白102(SAP102)是突触后膜区域中一种重要的支架蛋白,属于膜相关鸟苷酸激酶家族(MAGUK),在新生和成熟的神经元中均有高表达。SAP102有助于特化结构域的受体,如N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和α-氨基-3羟基-5甲基-4异恶唑(AMPA)受体和通道蛋白定位在特定膜区域上,并在囊泡内NMDA受体簇的胞质运输过程中起重要的调节作用。此外,SAP102还可参与调节皮质突触的发育。SAP102的表达或功能异常与多种疾病,如阿尔茨海默病与精神分裂症等的发生发展相关。尽管SAP102与神经系统正常生理功能及某些疾病关系密切,但目前人们对SAP102的认识尚不够充分,我们将对SAP102蛋白的结构、生理功能及与之相关疾病的研究进展进行综述。

膜相关性鸟苷酸激酶与脑缺血

膜相关性鸟苷酸激酶（membrane associated guanylate kinase,MAGUK）是一类突触后致密蛋白（postsynaptic density,PSD）,定位于突触后膜的突触后致密区,包括PSD-95、SAP-102、PSD-93和SAP-97.MAGUK家族成员含有多个蛋白结合位点,这些特殊的结合位点负责介导多种信号的转导.MAGUK参与中枢神经系统疾病发生和发展机制,已成为神经科学研究的热点.文章简要综述了MAGUK在缺血性脑损伤中的作用.

基于ROCK/NOX4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响

目的基于RAS同源基因家族成员相关激酶(ROCK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4信号通路探究刺芒柄花素对2型糖尿病大鼠内质网应激损伤及肾功能的影响。方法SPF级健康8周龄雄性C57BL/6大鼠60只,随机分为5组,各12只,健康组、模型组、刺芒柄花素低、中、高组,除健康组外均建立2型糖尿病大鼠模型,刺芒柄花素低组、刺芒柄花素中组、刺芒柄花素高组分别给予20、40、100 mg/kg刺芒柄花素灌胃,其余组别灌胃等体积生理盐水。采用自动生化分析仪测定肾功能指标。苏木素-伊红(HE)染色与Masson染色观察大鼠肾组织病形态。TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡。免疫组化检测RAS同源基因家族成员(Rho)A、NOX4、ROCK阳性表达。Western印迹检测内质网应激相关蛋白表达。结果HE染色结果显示:健康组肾脏组织结构正常;模型组肾小球有一定程度萎缩,组织结构排列不均匀,并且有肿胀、脱落现象、还存在空泡样变性、鲍曼囊腔扩,而经过刺芒柄花素干预后,上述情况有所改善,且呈现出明显的剂量依赖性。Masson染色结果显示:健康组肾组织正常;模型组肾小球、肾小管基底膜增厚,产生空泡样病变,肾间质胶原纤维沉积明显;在经过刺芒柄花素干预后上述状况明显改善,且呈现出明显的剂量依赖性。健康组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素低组(P<0.05)。刺芒柄花素低组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素中组(P<0.05)。刺芒柄花素中组24 h MAU、SCr、BUN、细胞凋亡率、RhoA、NOX4、ROCL、eIF2α、GRP78水平显著高于刺芒柄花素高组(P<0.05)。结论刺芒柄花素可能是通过调控Rho/ROCK/NOX4信号通路抑制了2型糖尿病大鼠内质网应激,改善肾功能,对肾脏起保护作用。

神经突触中枢神经突触膜相关鸟甘酸激酶锚定蛋白参与疼痛调节的研究进展

背景中枢神经突触膜相关鸟苷酸激酶（membrane-associatedguanylatekinase，MAGUK）蛋白家族包含4种突触相关蛋白：PED-93、PSD-95、SAP-102、SAP-97，它们参与调节谷氨酸突触信号传递，与学习记忆和疼痛等有关。目的综述神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和分子之间的相互作用及其在疼痛信号调节及传递中的作用。内容神经突触MAGUK锚定蛋白可通过与N．甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体、神经元型一氧化氮合酶（neuronalnitricoxidesynthase，nNOS）、使君子酸（a-amino-3-hydroxy-5．nlethy4_isoxazolepropionate，AMPA）受体以及突触细胞黏附分子（synaptiecell-adhesionmolecules，SynCAM）等相互作用参与调节疼痛信号在突触的传递，影响突触传递强度。趋向干扰神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和重要分子间的相互作用可影响疼痛信号在突触的传递，是疼痛治疗的新靶点。

皮动蛋白及微丝相关蛋白2/3复合物介导的细胞运动的分子机制

皮动蛋白(cortactin)是一种含有特殊重复序列结构域的微丝肌动蛋白结合蛋白,它直接参与了细胞皮层(cortex)微丝细胞骨架的组建。它又是细胞内Src类酪氨酸蛋白激酶的主要底物之一,代表了一类高度保守的胞内皮层信号蛋白质家族。近几年来,对于细胞运动分子机制的研究取得很大进展,利用组织培养细胞进行的体外实验证明,皮动蛋白能够活化微丝相关蛋白2/3复合物(actinrelatedprotein2/3complex,Arp2/3complex),调控皮层微丝细胞骨架的组装,在细胞运动过程中具有重要作用。

NLRP3炎症小体参与Ⅱ期特发性膜性肾病发生的研究

目的观察特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, IMN)患者肾活检组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors family, pyrin domain containing, NLRP3),肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor6,TRAF6)以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK1/2)、p38、JUN氨基末端激酶(Jun n-terminal kinase, JNK)信号通路蛋白的表达,分析尿蛋白与NLRP3以及TRAF6与NLRP3之间的相关性。方法收集未行肾上腺皮质激素及免疫抑制剂治疗且肾活检诊断为Ⅱ期IMN患者38例,应用免疫组化方法检测各样本肾组织TRAF6、NLRP3及核因子κB(nuclear factor, NF-κB)、磷酸化ERK1/2MAPK、磷酸化p38MAPK、磷酸化JNK等因子的表达情况,并对正常组与Ⅱ期IMN患者各因子表达情况进行分析,同时收集患者的血液和24 h尿液,分析24 h尿蛋白定量、血肌酐、肌酐清除率、尿素氮等一般临床资料,对尿蛋白与NLRP3以及NLRP3与TRAF6进行相关分析。以10例因肾结核及肾肿瘤行肾切除的患者肾脏组织作为正常对照组。结果 (1)Ⅱ期IMN患者24 h尿蛋白定量、血肌酐明显高于正常组(P<0.01);(2)Ⅱ期IMN患者肾脏中TRAF6、NLRP3蛋白表达明显高于正常组(P<0.01);(3)24 h尿蛋白定量与NLRP3呈正相关(r=0.689,P<0.01),TRAF6与NLRP3呈正相关(r=0.490,P<0.01);(4)NF-κB、磷酸化ERK1/2、磷酸化p38、磷酸化JNK在Ⅱ期IMN均高于正常组(P<0.01)。结论 NLRP3和TRAF6可能参与Ⅱ期IMN的发病,并与NF-κB和ERK1/2、p38、JNK信号通路的激活相关。

子宫腺肌病小鼠子宫内膜基底/功能层上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞中ROCK1蛋白表达观察

目的观察子宫腺肌病(AM)小鼠子宫组织及内膜基底/功能层上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞中与Rho相关的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(ROCK1)的表达变化,并分析其与内膜侵袭能力相关性。方法 出生2d的雌性ICR小鼠38只,随机分为空白组8只、模型组30只。模型组采用初生小鼠枸橼酸他莫昔芬灌胃法制作AM模型,空白组不做任何处理。饲养至12周龄,引颈处死两组小鼠后取子宫组织,HE染色后镜下观察两组小鼠子宫组织AM病灶内膜浸润程度,采用Westernblotting法检测小鼠子宫组织ROCK1蛋白、ras同源基因家族(Rho),采用免疫组化法检测两组小鼠子宫内膜基底层(NJ)、内膜功能层(NG)上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞ROCK1蛋白,分析AM小鼠病灶的子宫内膜浸润深度与ROCK1蛋白表达的相关性。结果 空白组子宫组织无内膜浸润,模型组AM病灶轻度、中度、重度浸润分别为8、12、6例。模型组、空白组子宫组织ROCK1相对表达量分别为1.554±0.079、0.079±0.006,二者比较,P<0.01;模型组、空白组子宫组织Rho相对表达量分别为0.442±0.094、0.109±0.073,二者比较,P<0.01。与空白组比较,模型组NJ平滑肌细胞、NJ上皮细胞、NJ间质细胞、NG上皮细胞、NG间质细胞ROCK1蛋白OD值均升高(P均<0.05)。在模型组NJ处,上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高,显著高于间质细胞及平滑肌细胞(P均<0.05);与模型组NG上皮细胞比较,NJ间质细胞ROCK1蛋白OD值降低(P<0.05)。与无浸润者比较,轻、中、重度浸润小鼠子宫NJ及NG平滑肌细胞、间质细胞、上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高(P均<0.01);与轻度及中度浸润组比较,重度浸润组小鼠子宫NJ及NG平滑肌细胞、间质细胞、上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高(P均<0.01)。AM小鼠子宫NJ间质细胞及上皮细胞间、NG间质及上皮细胞间ROCK1蛋白表达均呈正相关(r分别为0.913,0.893,0.866,0.897;P均<0.05)。结论 AM小鼠子宫组织Rho、ROCK1高表达,子宫NJ、NG不同细胞ROCK1蛋白均呈高表达。子宫不同部位上皮细胞ROCK1蛋白的表达与间质表达呈正相关,ROCK1蛋白高表达与AM的侵袭能力相关。

CARMA蛋白家族与疾病关系的研究进展

含半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白(CARMA),属于膜相关鸟苷酸激酶家族成员。CARMA蛋白家族有三个成员,分别是CARMA1、CARMA2和CARMA3。CARMA蛋白家族三个成员均可通过与B细胞淋巴瘤10(BCL10)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤基因1(MALT1)组成CARMA1-BCL10-MALT1(CBM)复合体参与人核转录因子κB(NF-κB)的激活过程,从而发挥其生物学功能,广泛参与各种人类疾病的发生、发展过程。

TRAF6/MST4在未足月胎膜早破胎盘组织中的表达及对不良妊娠结局的预测价值

目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(MST4)在未足月胎膜早破(PPROM)合并宫内感染中的临床意义,以及其对不良妊娠结局的预测价值。方法:选取2015年5月至2016年5月在江苏省扬州大学临床医学院住院分娩的PPROM孕妇60例和健康孕妇30例。采用HE染色、免疫组化及Western blot法检测胎盘组织,分析TRAF6及MST4表达与临床病理特征之间的相关性。结果:对照组30例中合并宫内感染3例,PPROM组60例中合并宫内感染43例。PPROM组的孕周及新生儿体重均小于对照组(P<0.05)。免疫组化及Western blot结果均显示,PPROM组合并宫内感染组中TRAF6与MST4表达明显强于对照组和PPROM组未合并宫内感染组(P<0.05),后两组比较则无显著差异(P>0.05)。胎盘组织中TRAF6与MST4阳性表达呈正相关(P<0.05)。TRAF6/MST4表达水平与新生儿入住NICU、肺部感染及病理性黄疸存在相关性(P<0.05)。结论:TRAF6/MST4参与PPROM合并宫内感染的发生与发展,为PPROM合并宫内感染的早期诊断提供了新的检测标记物,对预测母儿结局具有重要参考价值。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

miR-93-5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-93-5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1(protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法使用LipofectamineTM2000分别将质粒inhibitor NC、miR-93-5p inhibitor、pcDNA、pc-PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA组和pc-PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT-PCR检测细胞中miR-93-5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与PKMYT1的靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)的蛋白表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比,SPC-A-1细胞、A549细胞、LTEP-α-2细胞中miR-93-5p表达水平均升高(均P<0.01),PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.05),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-93-5p NC+3′UTR-WT组相比,miR-93-5p mimic+3′UTR-WT组细胞相对荧光素酶活性下降(P<0.001)。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc-PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.001),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。结论沉默miR-93-5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

下调PKMYT1表达对宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:探究下调膜相关酪氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PKMYT1)表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:利用UALCAN数据库平台分析PKMYT1在宫颈癌组织的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PKMYT1在END1/E6E7细胞和宫颈癌细胞的表达。将c-33A细胞、SiHa细胞分为转染对照组(转染siRNA-NC)和siRNA-PKMYT1组(下调PKMYT1表达)。RT-qPCR和Western blot分析无翅型MMTV整合位点家族成员1(WNT1)、β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的mRNA和蛋白的表达。利用MTT、划痕实验和Transwell实验分析细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果:PKMYT1在宫颈癌组织和细胞表达上调(P<0.05)。siRNA-PKMYT1组c-33A和SiHa细胞中Wnt1、β-catenin和c-Myc表达水平均低于转染对照组,c-33A和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于转染对照组(均P<0.05)。结论:沉默PKMYT1可以抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭过程,并降低Wnt/β-catenin信号通路活性,表明PKMYT1在宫颈癌可能发挥抑癌作用。

法舒地尔对心力衰竭大鼠心室重塑干预与Rho GTPases活性的作用

目的:以升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠为研究对象,观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对心室重塑和心肌组织Rho家族的小分子鸟苷酸三磷酸酶(Rho GTPases)活性的影响,并探讨两者之间的关系。方法:将雌性心力衰竭Wistar大鼠随机分2组(n=10),法舒地尔(5 mg·kg^(-1))组和模型组,同时制备假手术组;模型组、假手术组用等量生理盐水每日2次腹腔注射。测定治疗4 wk后组织Rho GTPases活性。结果:法舒地尔组左室重量-体重比明显下降(P<0.01),心室重构减轻,心肌组织Rho GTPases活性降低(P<0.01)。结论:Rho激酶抑制剂法舒地尔抑制左室重塑与心肌组织Rho GTPases活性有关。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

慢病毒介导的CARMA1稳定沉默抑制K562细胞的侵袭和转移能力

目的研究RNAi技术稳定沉默caspase募集结构域膜相关鸟苷酸激酶蛋白1(CARMA1)基因后对K562细胞增殖、克隆形成和侵袭转移的影响。方法应用慢病毒介导的RNAi技术构建稳定沉默CARMA1基因的K562细胞,反转录PCR和Western blot法分别检测CARMA1 mRNA和蛋白的抑制情况。应用台盼蓝拒染法分析细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞克隆形成,TranswellTM实验(含Matrigel或不含Matrigel)检测体外迁移与侵袭能力的改变。反转录PCR和Western blot技术分析相关信号通路分子的改变,并探讨可能机制。结果成功构建6株细胞株:其中1株为阴性对照(K562/sh-eGFP),另5株为CARMA1基因沉默的细胞株。K562/shCARMA 1-93对CARMA1的抑制效果最好,利用该模型进行后续研究。台盼蓝拒染法和克隆形成实验表明,K562/shCARMA 1-93的生长和克隆形成能力受到明显抑制(P<0.01)。与空白对照K562和阴性对照K562/sh-eGFP相比,细胞生长抑制率分别为29.3%和28.6%;克隆形成抑制率分别为37.6%和34.1%。体外迁移和侵袭转移实验证实,与对照组相比,K562/shCARMA1-93穿膜细胞数明显减少,有统计学差异(P<0.01)。CARMA1受抑制后,信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)及早期生长反应基因1(EGR1)的表达也随之下降。结论 CARMA1的稳定沉默会抑制K562细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,这可能与NF-κB、JNK/EGR-1信号通路受抑制有关。

神经肌肉连接形成研究进展

神经肌肉连接形成是肌细胞与运动神经元前膜相互识别、相互作用 ,从而逐步形成特异突触结构的复杂过程。突触前分化是通过插入含有活性成分细胞骨架复合体的前体小泡 ,导致功能活性区的快速形成等过程实现的。突触后分化是通过递质受体和突触后致密物的信号传导分子来收集突触后致密物的脚手架分子和稳定突触的结构等来完成的。综述神经肌肉连接形成过程中突触前后膜的特化以及相关分子研究进展。