膜结合型前列腺素E合成酶1及其表达与肿瘤相关性的研究进展

膜结合型前列腺素E合成酶1(membrane-associated prostaglandin E synthase-1,mPGES-1)是前列腺素(prostaglandin,PG)E2生物合成过程中重要的终端限速酶,与环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)功能性偶联参与机体多种生理及病理过程。近年来研究发现,mPGES-1在多种肿瘤组织中过度表达,与肿瘤的发生、发展密切相关。抑制mPGES-1的活性能有效降低PGE2的产生,同时能避免非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug,NSAID)及COX-2特异性抑制剂引起的心血管方面的不良反应,是一个比COX-2更理想、更安全的防治肿瘤的药物开发新靶点。本文就mPGES-1的分子生物学特征、与肿瘤发生和发展的相关性及其抑制剂的研究进展作一综述。

绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性

以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度。试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在pH为7.0时活性最高,同时重组ALTre-2蛋白酶活性最适温度是50℃。研究结果为深入探讨绿盲蝽膜结合型海藻糖酶分子调控机制奠定基础。

膜结合型TNF-α基因转导人胃癌细胞株的建立及其生物学特性研究

本研究利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体，将重组载体及空载体导入包装细胞CRIP．筛选G418抗性克隆。测定病毒滴度均为1×10^4CFU／ml，并转入胃癌细胞MGC-803．经筛选分别获得抗性克隆MGC-803^T及MGC-803^T,经Southern杂交证实目的基因已整合在MGC-803^T细胞基因组中。MGC-803^T对L929细胞有杀伤作用．而对照细胞无杀伤作用。MGC-803^T细胞的形态，体外增殖率无明显改变。裸鼠体内接种结果表明，与对照组相比，MGC-803^T细胞在裸鼠体内的生长受到明显抑制，表现为肿瘤发生延缓．肿瘤重量明显减轻。上述结果表明．逆转录病毒介导的突变型膜结合型TNF-α基因可在人胃癌细胞中获得有效表达．并能改变其生物学特性。

前列腺癌PC-3M细胞株膜结合型唾液酸酶的活性测定与基因表达

目的 :研究前列腺癌 PC- 3M细胞株膜结合型唾液酸酶 ( hm SD)的活性和基因表达。方法 :收集指数生长期的 PC- 3M细胞 ,匀浆后离心取上清 ,与底物共同孵育 ,以 TBA显色反应检测所生成的唾液酸 ,计算唾液酸酶活性 ;应用 RT- PCR方法检测 hm SD的 m RNA表达。结果 :在 PC- 3M细胞株可检测到 hm SD活性及其 RNA的表达。结论 :PC- 3M细胞在基因和蛋白水平有 hm SD的表达。

金叶子中抑制膜结合型PGE_2合酶-1表达活性物质的分离与鉴定(英文)

在从天然产物筛选抗炎物质的过程中,应用有机溶媒萃取、浓缩及层析分离纯化后,从金叶子中得到三个化合物:槲皮素(1)、番石榴苷(2)、栎素(3)。化合物2为首次从此植物中分离鉴定,化合物1显示了强烈的抑制mPGES-1基因表达的活性,其IC50值为35.40μg/mL。

结肠癌患者血浆外泌体表面膜结合型转化生长因子β_1表达及其生物学作用

目的观察结肠癌患者血浆外泌体(exosomes)表面膜结合型转化生长因子β_1(m TGF-β_1)表达,探讨其生物学作用。方法选取结肠癌患者20例(观察组),同期体检健康者10例(对照组),提取两组血浆exosomes,采用流式细胞仪分析exosomes表面m TGF-β_1表达。从结肠癌患者肝素抗凝全血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),分选获得纯化的CD4^+T细胞,采用CD3、CD28诱导细胞增殖,将细胞随机分为三组,A组加入TGF-β_1阻断性单抗处理的结肠癌患者血浆exosomes(1μg/m L),B组加入Ig G1同型对照抗体处理的结肠癌患者血浆exosomes(1μg/m L),C组加入健康人血浆exosomes(1μg/m L),培养3天时进行台盼蓝染色计数活细胞数;采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平。结果观察组血浆exosomes表面m TGF-β_1表达阳性率为36.52%±4.26%,高于对照组的9.23%±3.77%(P<0.01)。与C组比较,B组CD4^+T细胞数量及其分泌的TNF-α、IFN-γ水平均降低(P均<0.05);与B组比较,A组CD4^+T细胞数量及其分泌的TNF-α、IFN-γ水平均增加(P均<0.05)。结论结肠癌患者血浆exosomes表面高表达m TGF-β_1,m TGF-β_1表达增加可能是构成结肠癌免疫抑制环境的重要因素,可促进结肠癌的发生、发展。

钙连蛋白──膜结合型监护蛋白

钙连蛋白──膜结合型监护蛋白许强，王克夷（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词钙连蛋白，监护蛋白１．发现内质网（ＥＲ）是许多分泌蛋白、质膜蛋白和细胞器膜蛋白加工处理的场所，这些蛋白在ＥＲ经过折叠、装配和修饰（例如Ｎ－糖基化）以后，才...

膜结合型肿瘤坏死因子在人乳腺癌细胞中的转染

目的 :研究膜结合型肿瘤坏死因子α(TNFα)在基因转染中的特点及其在肿瘤基因治疗中的作用等特性。方法 :用反转录病毒为载体 ,将含有突变的膜结合型TNFα的质粒 ,用lipofectin法转入包装细胞株crip细胞。又用收集到的病毒上清感染人乳腺癌细胞MDA2 31,采用G418筛选 ,DNA印迹法和聚合酶链反应方法鉴定该基因转染的结果。结果 :经上述方法鉴定表明该外源基因已成功转染人乳腺癌细胞中 ,为进一步研究膜结合型TNFα的功能奠定了基础。结论 :经初步研究表明 ,含有膜结合型肿瘤坏死因子的质粒可以通过lipofectin法成功导入crip细胞 。

大鼠烫伤后枯否细胞膜结合型肿瘤坏死因子与肝损伤的关系

目的：了解肝枯否细胞膜结合型肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在严重烫伤后肝损伤中的作用。方法：建立大鼠３０％体表面积的全层皮肤烫伤模型，应用流式细胞术对烫伤后枯否细胞膜结合型ＴＮＦ的表达与肝功能损害的关系进行研究。结果：烫伤可明显增加受内毒素刺激的枯否细胞分泌型ＴＮＦ的量。烫伤后枯否细胞膜结合型ＴＮＦ的表达明显升高，但其对内毒素的反应性已不明显。烫伤后枯否细胞膜结合型ＴＮＦ的表达与血浆谷丙转氨酶改变呈正相关（ｒ＝０．９０２，Ｐ＜０．００１）。结论：烫伤后肝枯否细胞膜结合型ＴＮＦ与分泌型ＴＮＦ的意义不尽相同。

表达分泌型与膜结合型HH7N9 AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较

研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚中的繁殖性能较强。此外,LXs HA主要以分泌形式表达HA蛋白,而LXHAF则以膜结合形式表达HA。鸡的免疫试验显示,两株重组病毒在一次免疫后均能诱导针对NDV载体的血凝抑制抗体,但LXHAF能够诱导较高水平的H7N9 AIV特异性Ig Y抗体,而LXs HA不能诱导H7N9 AIV抗体应答。结果表明,表达膜结合型HA的重组病毒具有针对H7N9 AIV较好的免疫原性,而表达分泌型HA的重组病毒免疫原性较差。这为研发H7N9亚型禽流感载体疫苗提供新的信息与参考。

膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病

补体激活在膜增生性肾炎、狼疮性肾炎、膜性肾病等肾小球疾病的发生中扮演着关键性角色。肾脏局部表达衰变加速因子、膜辅蛋白、Ⅰ型补体受体及CD59等膜结合型补体调节蛋白对补体激活进行负向调控以保护自身组织。目前学者们正试图将其运用于肾小球疾病的治疗。本文就补体激活及调控、膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病的关系及其在肾小球疾病治疗中的运用等方面,对近些年研究成果予以综述。

利用RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因

【目的】明确沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)对其生长发育的影响,为稻纵卷叶螟的防治奠定理论基础。【方法】基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,针对稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)设计靶位点,体外合成双链RNA(dsCmTre2),将其注射入稻纵卷叶螟3龄幼虫体内,观察试虫表型变化,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CmTre2的表达水平,测定酶活力。【结果】注射dsCmTre2的幼虫取食量明显下降,生长发育阻滞,体型变小,出现畸形和死亡现象。注射dsCmTre2后5 d,幼虫死亡率明显高于对照组,存活幼虫体重明显轻于对照组;CmTre2和几丁质合成酶B基因(CmCHSB)的表达量较对照分别下降53.70%和34.41%;膜结合型海藻糖酶活力较对照组下降35.61%。【结论】CmTre2基因对稻纵卷叶螟的生长发育具有重要作用,该基因的沉默影响几丁质合成,引起发育障碍。该研究结果为进一步利用RNAi技术在田间防治稻纵卷叶螟奠定了基础。

膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-SCF和m-SCF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均P<0.01)。K562-M集落形成率显著高于K562-V和K562-S(均P<0.01),且集落形态大于其他两种细胞。结论:m-SCF与C-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。

膜结合型透明质酸酶PH-20 mRNA在消化道肿瘤表达的意义

目的研究膜结合型透明质酸酶(PH-20)mRNA表达与消化道肿瘤侵袭能力及淋巴结转移的关系,探讨其预测肿瘤侵袭危险度的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测59例消化道肿瘤患者的原发癌、癌旁组织、淋巴结转移癌(其中13例)及4例消化道良性病变和各种细胞系(SGC-7901、BGC823、LS-174-T、HCT8、95-D、A549、HFL、HEPG2、L-02)中PH-20mRNA的表达水平。结果PH-20mRNA在上述组织中均有表达,消化道原发癌和淋巴结转移癌均明显高于癌旁组织(P<0.05)。消化道肿瘤PH-20mRNA表达与肿瘤浸润程度有关,浸润性肿瘤的PH-20mRNA表达量高于浅表性肿瘤(P<0.01)。结论PH-20mRNA表达改变可能与消化道肿瘤的发展有关,高表达PH-20mRNA的肿瘤细胞具有高侵袭潜能。

2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E_2合酶1的表达及意义

目的探讨2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E_2合酶1(m PGES-1)的表达及意义。方法将36只雌性SD大鼠随机分成糖尿病组与对照组,每组18只。使用链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠动物模型。造模成功后12周,观察并比较两组大鼠一般生理体征;在光镜下观察膀胱逼尿肌组织HE染色结果,在透射电镜下观察组织超微结构变化,采用免疫组化法检测组织中m PGES-1表达水平,并使用前列腺素E_2(PGE_2)酶联免疫试剂盒检测24h尿液中PGE_2含量,所得结果进行组间比较。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠终末体重明显降低(P<0.05),终末血糖、膀胱湿重和24h尿量均明显增加(均P<0.05)。与对照组比较,糖尿病组大鼠在光镜下可见逼尿肌肌束结构排列紊乱,肌束间隙变宽;在透射电镜下可见逼尿肌细胞间距变宽,胞质内线粒体肿胀破裂呈空泡状。糖尿病组大鼠24h尿液PGE_2含量、膀胱逼尿肌组织中m PGES-1表达水平较对照组均明显下降(P<0.05)。结论2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌组织中m PGES-1表达水平及尿液PGE_2含量均明显降低,可能与糖尿病性膀胱病的进展有关。

膜结合型巨噬细胞集落刺激因子的受体作用

根据细胞因子的定义 ,信息应由因子流向受体 ,可溶性受体与膜结合因子结合可有信息反向传导 .人白血病细胞系J6_1细胞表面同时存在膜结合型M_CSF及其受体 ,构成自家并置性刺激 .将由J6_1细胞膜分离的M_CSF可溶性受体加入J6_1细胞培养观察到细胞增殖受抑制 ,分裂指数降低 ,细胞直径增大 ,多核细胞比例减少和多种细胞表面抗原表达的下调 .J6_1细胞在可溶性受体作用数分钟至 2 0min可观察到细胞内pH的明显变化 ,表明有信号通过m_M_CSF传入细胞 。

膜结合型白细胞介素6受体β亚基突变体的构建及其对白细胞介素6信号的影响

目的 探讨只含白细胞介素 6 (IL 6 )受体 β亚基 (gp130 )胞外第二、三个FNⅢ (CBD)区的膜结合型gp130突变体 (mgp130 )能否传导IL 6信号。方法 首先用重叠延伸PCR方法扩增出mgp130cDNA ,将其克隆到真核表达载体pRc RSV中 ;用脂质体转染法将此表达载体导入骨髓瘤细胞系SKO 0 0 7和Jurkat细胞中 ,通过点杂交证明其得到有效表达 ;用阻滞电泳法比较野生型gp130和mgp130分子传导IL 6信号的情况。结果 在SKO 0 0 7细胞中IL 6能激活APRF ,而将野生型和突变的gp130cDNA的表达载体分别导入细胞后 ,APRF活性均得到增强 ,但野生型gp130增强的程度较突变体为高 ;在Jur kat细胞中IL 6不能激活核因子 ,导入野生型和突变的gp130cDNA的表达载体后 ,IL 6能激活APRF ,但不能激活NF IL6。与SKO 0 0 7细胞的结果类似 ,野生型gp130激活的信号强于突变体。结论 只含胞外CBD区的mgp130 ,尽管仍能传导IL 6信号 ,但其效率远低于野生型gp130 ,因此gp130的免疫球蛋白样区在IL 6转导中也起着十分重要的作用。

膜结合型前列腺素E2合酶1抑制剂MK886对白血病HL-60／A细胞周期的影响

目的探讨膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES-1）抑制剂MK886对人类急性髓系白血病耐药细胞HL．60／A细胞周期的作用。方法采用流式细胞术、Western blot、酶联免疫吸附（ELISA）等方法，检测HL-60／A及健康人单个核细胞（MNC）、敏感细胞株HL．60的细胞周期、mPGES-1蛋白、细胞周期素D1（cvctinD1）的差异，检测不同浓度的MK886对HL-60／A细胞周期的作用及对cyclinD1、mPGES-1、PGE2、P-Akt、c—myc蛋白的影响。结果与健康人MNC及敏感细胞株HL-60比较，HL-60／A细胞cyclinD1、mPGES-1表达最高，G0～G1期细胞比例为（30．53±2．15）％，较正常MNC[（62．63±6．58）％]及HL-60细胞[（38．86±2．25）％]减少（均P〈0．05）；S期比例为（57．56±1．54）％，较正常MNC]（12．18±4．43）％]及HL-60细胞[（47．70±1．88）％]明显增多（均P〈0．05）。MK886作用后，被阻滞于Go～G。期的细胞增多，同时mPGES-1表达下调，合成PGE2减少，cyclinD1、P—Akt、c-myc蛋白表达下降。结论MK886对白血病HL-60／A细胞有细胞周期阻滞作用，其机制与抑制mPGES-1表达，减少PGE2的合成，抑制cyclinD1、P—Akt、c—myc表达有关。

MHBs^t167基因转染对肾小管上皮细胞膜结合型补体调节蛋白表达的影响

补体激活导致肾组织免疫损伤是肾脏疾病的重要发病机制，而肾脏固有细胞可表达一系列补体调节蛋白对其激活进行限制。肾脏是乙型肝炎病毒（HBV）感染的主要靶脏器之一，其中肾小管上皮细胞尤易被感染。病毒感染与宿主细胞应答间的关系极为复杂，HBV-DNA与宿主DNA整合的过程中可发生基因重排，编码HBx、LHBs和MHBs^1等反式激活因子，进而活化多种转录因子和原癌基因启动子，参与感染后的炎性反应。以往研究表明乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）患者肾小管上皮细胞中可检测到HBV—DNA，并且大多为整合型。

膜结合型淋巴毒素及其LT-β亚基

淋巴毒素(LT)存在分泌型及膜结合型两种表达形式。膜型LT是由分泌型亚单位LT-α通过跨膜亚单位LT-β连接在细胞膜上,构成一个异源三聚体结构。LT-β亚基为TNF配体超家族成员之一,其相应的特异性受体为TNF受体相关蛋白(TNFRrp),也称作LT-β受体。膜型LT可能具有独特的生物学功能,特别是对正常淋巴结的发育形成可能起着重要作用。