表达分泌型与膜结合型HH7N9 AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较

研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚中的繁殖性能较强。此外,LXs HA主要以分泌形式表达HA蛋白,而LXHAF则以膜结合形式表达HA。鸡的免疫试验显示,两株重组病毒在一次免疫后均能诱导针对NDV载体的血凝抑制抗体,但LXHAF能够诱导较高水平的H7N9 AIV特异性Ig Y抗体,而LXs HA不能诱导H7N9 AIV抗体应答。结果表明,表达膜结合型HA的重组病毒具有针对H7N9 AIV较好的免疫原性,而表达分泌型HA的重组病毒免疫原性较差。这为研发H7N9亚型禽流感载体疫苗提供新的信息与参考。

转录因子D位点结合蛋白对原代大鼠系膜细胞中免疫炎症因子的调控作用

目的通过基因表达谱分析,探讨并验证转录因子D位点结合蛋白(DBP)对原代大鼠系膜细胞(RMCs)中免疫炎症因子的调控作用。方法从8周龄SD大鼠中分离、培养并鉴定原代RMCs,利用小干扰RNA技术敲低其DBP表达,进而行RNA-seq测序分析;筛选差异表达基因(DEGs),并对DEGs行Gene Ontology(GO)注释及KEGG信号通路分析;采用qPCR验证DBP低表达的RMCs中免疫炎症因子m RNA表达水平;利用质粒转染技术获得DBP过表达RMCs并采用q PCR检测DBP过表达对免疫炎症因子m RNA表达的影响。结果成功分离、培养原代RMCs,并获得DBP低表达的原代RMCs。RNA-seq测序结果显示,与野生原代RMCs相比,DBP低表达的原代RMCs中共有267个DEGs(上调84个,下调183个)。GO注释及KEGG信号通路分析表明,DEGs主要富集在免疫炎症相关的生物学过程及信号通路。原代RMCs中,DBP敲低可明显下调免疫炎症因子C-C模体趋化因子配体2(CCL2)、C-X-C模体趋化因子(CXCL)10、CXCL1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6 mRNA表达,DBP过表达则可明显上调上述免疫炎症因子m RNA表达。结论原代RMCs中,DBP可通过调控免疫炎症因子表达参与免疫炎症反应。

D型产气荚膜梭菌ε毒素基因表达及其免疫保护作用的初步研究

利用PCR技术,从D型产气荚膜梭菌标准株(C60-2)染色体DNA中扩增出ε毒素基因。该基因产物大小为906bp,序列分析结果表明,与GenBank报道的产气荚膜梭菌参考菌株ε毒素基因序列同源性大于99%。将扩增的ε毒素基因定向克隆到原核表达载体pET32a中,得到重组质粒pET32a-ETX,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见大小为54ku的特异条带;经Western blotting和ELISA检测结果表明,表达的ε毒素能与抗天然ε毒素抗体发生特异性反应,说明ε毒素蛋白具有较好的反应原性。将表达的ε毒素蛋白用0.4%的甲醛溶液制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护力,这表明该重组菌株有望成为产气荚膜梭菌基因工程类毒素疫苗的候选菌株。

女性型脱发患者的血清维生素D水平及与雄激素的相关性研究

目的:探究女性型脱发的血清维生素D水平以及与雄激素的相关性,为女性型脱发的发病机制及治疗选择提供新的线索。方法:分析皮肤科门诊就诊的70例女性型脱发患者与体检中心招募的65例健康人的血清维生素D,分析其与严重程度、人口学特征、生活习惯以及雄激素的相关性。结果:女性型脱发患者的平均维生素D水平(13.59±5.82)ng/ml,健康人群的平均维生素D水平为(15.94±6.89)ng/ml(P<0.05)。女性型脱发患者维生素D水平与性激素结合球蛋白呈正相关,与游离睾酮呈负相关(P<0.05)。性激素结合球蛋白降低或游离睾酮升高的患者维生素D水平明显降低(P<0.05)。但暂未发现女性型脱发患者的维生素D水平与严重程度、人口学特征、生活习惯的相关性。结论:女性型脱发较健康人群维生素D水平明显降低,提示维生素D降低可能是女性型脱发的发病因素之一。性激素结合球蛋白降低、游离睾酮升高与维生素D水平降低存在的相关性,可能是维生素D缺乏导致女性型脱发的机制之一,有待进一步研究验证。

牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症胶体金免疫层析检测方法的建立

分离体外培养的牛源D型产气荚膜梭菌参考株菌体抗原,甲醛灭活后加弗氏佐剂免疫家兔,获得兔抗牛源D型产气荚膜梭菌多抗,并对其进行纯化,用25 nm胶体金标记多抗制备金标探针,分别以兔抗牛源D型产气荚膜梭菌IgG和羊抗兔IgG作为硝酸纤维素膜上的检测线和质控线,组装胶体金试纸条,并对试纸条的检测效果进行评价。结果显示:试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果,对D型产气荚膜梭菌抗原具有高度特异性;试纸条在4℃保存6个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。本研究建立的牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症的现场检测及鉴别诊断。

丹参酮ⅡA对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞ERS相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白表达的影响

目的探究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响。方法通过HCY诱导构建兔VSMC增殖模型,给予瑞舒伐他汀或不同浓度的丹参酮ⅡA进行培养,采用实时荧光定量PCR测定实验兔Bip mRNA基因表达。结果模型组Bip mRNA表达(3.27±0.30)高于空白对照组(0.13±0.35),差异具有统计学意义(P<0.05);丹参酮ⅡA组0.5 mg/L剂量的Bip mRNA表达(4.53±0.60)、1.0 mg/L剂量的Bip mRNA表达(12.71±0.27)、瑞舒伐他汀组Bip mRNA表达(8.80±0.21)均高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA对HCY诱导增殖VSMC ERS相关基因Bip表达具有明显作用。

HCG联合免疫球蛋白对溴隐亭致大鼠流产模型Th1/Th2型细胞因子的影响

目的:研究人绒毛膜促性腺激素(HCG)联合免疫球蛋白对溴隐亭致大鼠流产模型蜕膜局部Th1/Th2型细胞因子及妊娠结局的影响。方法:采用孕第6、7、8天大鼠皮下注射溴隐亭0.3mg/kg,诱导SD大鼠流产模型,随机分为4组:即流产模型(A)组、HCG(B)组、HCG联合免疫球蛋白(IVIG)(C)组及正常妊娠(D)组,每组10只,妊娠第14天麻醉处死并观察妊娠结局,取胚胎吸收邻近的蜕膜研磨并裂解,离心后取上清液,-80℃保存。ELISA方法测定标本中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)以及白细胞介素-10(IL-10)的水平。结果:胚胎吸收率:A组明显高于其余3组,B组高于C、D组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Th1型细胞因子(TNF-α、IFN-γ)水平,A组明显高于其余3组,差异有统计学意义(P<0.05);Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)水平,A组明显低于其余3组,差异均有统计学意义(P<0.05);IL-10细胞因子水平,B、D组低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HCG联合免疫球蛋白通过上调蜕膜局部细胞因子IL-10水平来改善胚胎发育,二者具有协同作用。

牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症dot-ELISA诊断方法的建立

以纯化的菌体蛋白为诊断抗原,建立了牛D型产气荚膜梭菌特异性抗体的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)检测方法,确定了各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1.95μg/mL,血清稀释度为1∶320,二抗稀释度为1∶2 000,封闭液为30 mL/L脱脂乳,抗原、血清、二抗和封闭液的作用温度及时间均为37℃30 min。用该dot-ELISA检测30份牛血清,纯化抗原比粗提抗原的阳性检出率高16.7%;dot-ELISA的灵敏度是琼脂免疫扩散试验(AGID)法的43倍;用dot-ELISA法对100份牛血清样本进行检测,阳性率为59.0%;经特异性试验、重复性试验和与AGID法比较,表明用纯化抗原建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。

肌球蛋白结合蛋白C的表达和鉴定

目的:探讨优化原核表达方法以及用亲和层析的方法制备重组人快型肌球蛋白结合蛋白C(MYBPC2)。方法:根据MYBPC2的序列设计一对引物,在上下游引物的5’端分别加上BamHI和HindⅢ酶切位点。以健康人骨骼肌cDNA为模版,扩增第284位至第579位氨基酸残基对应的碱基序列,经双酶切后插入pMalc-5e载体中,测序鉴定重组质粒的序列,将构建好的重组质粒转化大肠杆菌中,IPTG诱导重组蛋白MYBPC2-MBP的表达,亲和层析纯化重组蛋白,蛋白电泳法鉴定蛋白的分子量及纯度,测定蛋白浓度并估算蛋白纯化后得率。用商品化的抗MYBPC2抗体证实所表达蛋白序列的正确性。以纯化的蛋白免疫动物获得动物免疫血清,用Western Blot的方法鉴定此蛋白的免疫原性。结果:人MYBPC2蛋白表达载体构建成功,每升大肠杆菌菌液可生产纯化后的重组MYBPC2蛋白约30mg,Western Blot显示重组蛋白与其抗体及抗血清特异结合。结论:本方法可以高效制备生产人MYBPC2蛋白片段,具备良好的抗原特异性和免疫原性。

尿免疫球蛋白和补体C_2测定对肾脏病变程度和激素治疗效果的判定

我院自1987年8月至1988年2月,对40例肾脏病人测定尿免疫球蛋自、C3来判断肾小球病损程度及激素治疗效果的研究,现报告于下。资料与方法肾病组40例中男37人、女3人,年龄12～70岁。正常人组20名,男12、女8例,年龄19～40岁。急性肾炎4例,慢性肾炎普通型2例、高血压型2例,肾病综合征Ⅰ型18例、Ⅱ型11例,狼疮性肾炎3例。有18例作了肾活检,其中系膜增生性肾炎9例,膜增生性肾炎2例,膜性肾炎3例,硬化性肾炎3例,微小病变性肾病1例。

维生素D联合阿奇霉素对2型糖尿病患者肺炎的影响

目的:探讨维生素D联合阿奇霉素治疗2型糖尿病患者肺炎的临床疗效和安全性,及其对血清炎症指标的影响。方法:选取我院2014年5月-2015年9月收治的2型糖尿病伴肺炎患者68例,按照随机数字表法将患者分为对照组和试验组,各34例。两组患者均给予胰岛素强化降糖。对照组患者给予注射用阿奇霉素10 mg/kg+0.9%氯化钠注射液500 m L,ivgtt,qd,连续应用5 d后改用阿奇霉素干混悬剂10 mg/kg,po,qd,连用3 d后停药4 d为1个疗程,给药2个疗程;试验组患者在对照组基础上给予维生素D滴剂800单位,po,qd,连续给药4周。观察两组患者的临床疗效、治疗前后的血清炎症指标[白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)和免疫球蛋白G(Ig G)]水平,并记录不良反应发生情况。结果:试验组患者临床总有效率(91.18%)显著高于对照组(70.59%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者IL-6、CRP和Ig G等血清炎症指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者IL-6和CRP均显著降低,且试验组显著低于对照组;两组患者Ig G显著升高,且试验组显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维生素D联合阿奇霉素治疗2型糖尿病患者肺炎的临床效果显著,有助于改善其血清IL-6、CRP和Ig G等炎症因子水平,且安全性较高。

新型转录共激活因子人类p100蛋白的抗体制备

目的:制备抗p100蛋白的特异性抗体。方法:利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白的方法纯化人类p100蛋白Tudor片段作为抗原,经免疫动物获得多克隆抗血清,并利用Westernblot的方法检测抗体的特异性。结果:获得的抗p100蛋白抗体,经体内和体外试验验证的确可与其相应抗原特异性结合。结论:制备的抗p100蛋白的抗体通过与其抗原即人类p100蛋白在体内和体外试验中的特异性结合,为进一步探讨生理条件下p100蛋白在细胞内信号传导通路的作用提供了可靠工具。

抗PLA2R IgG4抗体、PLA2R IgG4/IgG比值在原发性膜性肾病预后评估中的价值

目的探讨抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)IgG4抗体和PLA2R IgG4/IgG比值在原发性膜性肾病(PMN)预后评估中的价值。方法选取2020年1月—2022年12月南阳市第一人民医院PMN患者58例。收集所有患者临床资料、病理检查资料和实验室检测结果,并检测血清抗PLA2R IgG抗体和抗PLA2R IgG4抗体水平,计算PLA2R IgG4/IgG比值。对所有患者随访3~24个月,根据疗效分为缓解组和未缓解组。采用Pearson/Spearman相关分析评估各项指标之间的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同抗PLA2R IgG4抗体水平和PLA2R IgG4/IgG比值PMN患者的缓解率。结果58例PMN患者中,PLA2R阳性51例(87.93%)、阴性7例(12.07%)。PLA2R阳性组血清抗PLA2R IgG抗体、抗PLA2R IgG4抗体和PLA2R IgG4/IgG比值均高于PLA2R阴性组。PLA2R与抗PLA2R IgG4抗体、PLA2R IgG4/IgG比值均呈正相关(r值分别为0.276、0.283,P<0.05)。抗PLA2R IgG抗体和抗PLA2R IgG4抗体与红细胞沉降率(ESR)均呈正相关(r值分别为0.283、0.382,P<0.05),抗PLA2R IgG抗体和抗PLA2R IgG4抗体与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均呈负相关(r值分别为-0.379、-0.425,P<0.05)。抗PLA2R IgG4抗体与抗PLA2R IgG抗体、PLA2R IgG4/IgG比值均呈正相关(r值分别为0.817、0.714,P<0.001)。规范治疗并随访3~24个月后,58例PMN患者中有41例(70.69%)缓解。缓解组治疗前、后24 h尿蛋白、抗PLA2R IgG抗体、抗PLA2R IgG4抗体和PLA2R IgG4/IgG比值均显著低于未缓解组(P<0.05)。治疗后缓解组血清白蛋白(Alb)水平高于未缓解组(P<0.001)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,低抗PLA2R IgG4抗体水平和低PLA2R IgG4/IgG比值PMN患者缓解率分别高于高抗PLA2R IgG4抗体水平和高PLA2R IgG4/IgG比值PMN患者。结论抗PLA2R IgG4抗体和PLA2R IgG4/IgG比值或可作为评估PMN疗效的指标。

血清抗M型磷脂酶A2受体抗体对特发性膜性肾病的诊断价值

目的研究血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体对特发性膜性肾病(IMN)的诊断价值。方法回顾性分析纳入2019年1月至2020年1月于南京医科大学第一附属医院住院且经肾组织活检病理诊断为IMN的75例患者的临床资料(IMN组)。另选取同期于本院住院治疗的35例非IMN的肾病患者(非IMN组)。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测患者血清抗PLA2R抗体。比较2组血清、尿液中生化及免疫指标水平。结果IMN组血清抗PLA2R抗体水平、抗PLA2R抗体阳性率均显著高于非IMN组[101.30(56.90,219.80)RU/ml比1.36(1.24,8.34)RU/ml、97.3%(73/75)比11.4%(4/35)](均P<0.01)。2组血清总蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)、IgA、IgM、补体C3、补体C4及尿游离κ轻链、尿游离λ轻链水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,IMN患者血清抗PLA2R抗体与尿游离κ轻链、尿游离λ轻链呈正相关(均P<0.01)。结论IMN患者血清抗PLA2R抗体水平显著升高,可作为特异性血清学检测指标。

尼罗罗非鱼3种Siglecslike融合蛋白在COS-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究

为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc-Siglecs like/Ex。检测结果显示,转染细胞中3个Siglecs/Ex-Fc融合蛋白在mRNA和蛋白水平都有高效表达,且过柱后的融合蛋白具有较高纯度;3个融合蛋白与罗非鱼源GBS的结合活性较对照组均有显著差异。研究表明,利用真核表达系统成功制备了具有较高纯度的尼罗罗非鱼3种Siglecs融合蛋白,且均有与GBS的结合活性。

PLA2R、IgG亚类和THSD7A在原发性膜性肾病中的临床应用

膜性肾病(MN)是成人肾病综合征常见的一种病理类型,当采取肾穿刺活检作为主要诊断方法受限时,寻找特异性血清靶蛋白指标尤为重要。M型磷脂酶A2受体(PLA2R)和1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)是原发性膜性肾病(PMN)的两种特异性抗原,血清抗体类型均为IgG4。临床上PLA2R、THSD7A和IgG4的血清学和组织学检测对PMN的诊疗和预后具有重要价值。本文就PLA2R、THSD7A和IgG4与PMN之间的关系及临床应用进行综述,概括有关研究进展,以期为临床医生提供参考。

血清M型磷酸酯酶A2受体联合肾组织IgG 4的检测对成人特发性膜性肾病的诊断价值及临床意义

目的探讨血清M型磷酸酯酶A2受体(PLA2R)联合肾组织免疫球蛋白4(IgG 4)的检测对成人特发性膜性肾病(IMN)的诊断价值及临床意义。方法回顾性收集2017年4月~2019年4月新余市人民医院收治的70例膜性肾病患者的临床资料,依据发病原因分为IMN组(30例)与继发性膜性肾病(SMN)组(40例)。所有患者均接受血清PLA2R、肾组织IgG 4检测,分析血清PLA2R联合肾组织IgG 4检测对IMN的诊断价值。结果IMN组血清PLA2R水平高于SMN组,差异有统计学意义(P<0.05)。将血清PLA2R水平作为检验变量,IMN疾病发生情况作为因变量(1=IMN,0=SMN),绘制ROC曲线,以血清PLA2R为25.641 RU/mL作为IMN发生的诊断阈值,即血清PLA2R>25.641 RU/mL则判定为IMN,此时诊断AUC为0.919(P<0.05)。血清PLA2R、肾组织IgG 4联合检测对IMN的诊断准确率为93.33%,高于血清PLA2R、肾组织IgG 4单独检测(均为80.00%),差异有统计学意义(P<0.05);血清PLA2R、肾组织IgG 4水平单独检查IMN与肾活检具有理想的一致性(Kappa=0.622,0.706);联合检查IMN与肾活检具有极好的一致性(Kappa=0.912)。结论血清PLA2R联合肾组织IgG 4的检测对IMN疾病具有较高的诊断价值,临床可根据血清PLA2R联合肾组织IgG 4水平检测结果,及时制定针对性的预防措施。

可溶性PD-1在肿瘤中的研究进展

程序性死亡蛋白1(programmed death 1,PD-1)是一种重要的免疫抑制分子,作为膜结合型受体,与配体PD-L1结合可下调T细胞功能而造成免疫抑制,在肿瘤生长过程中发挥重要作用。自PD-1的可溶性形式PD-1(soluble programmed death-1,sPD-1)在血浆中被检测出后,因其能够结合PD-L1(programmed death ligand-1)和PD-L2(programmed death ligand-2)并阻断PD-1通路增强T细胞免疫功能,从而成为了PD-1抑制剂癌症免疫治疗研究领域的新热点。随着对sPD-1越来越深入的研究,其在癌症的生物标志物、治疗和预后方面表现出巨大潜力。本综述重点介绍sPD-1在肿瘤方面的相关研究进展。