膜结合性补体调节蛋白及其在肿瘤免疫治疗中的控制策略

通过抗体进行的肿瘤免疫治疗,其机制大多是通过活化补体直接引起肿瘤细胞溶解(CDC)或加强抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。而许多研究证实,肿瘤细胞表面表达的膜结合性补体调节蛋白(mCRPs)能抑制补体系统的激活,而保护肿瘤细胞免遭CDC的杀伤,因此许多抗体介导的肿瘤免疫治疗的效果往往不尽人意。相关研究表明,通过阻断mCRPs或抑制mCRPs表达能使肿瘤的杀伤效果有明显的提高,因而控制mCRPs在未来的免疫治疗中很有潜力,本文简述了相关研究进展。

膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病

补体激活在膜增生性肾炎、狼疮性肾炎、膜性肾病等肾小球疾病的发生中扮演着关键性角色。肾脏局部表达衰变加速因子、膜辅蛋白、Ⅰ型补体受体及CD59等膜结合型补体调节蛋白对补体激活进行负向调控以保护自身组织。目前学者们正试图将其运用于肾小球疾病的治疗。本文就补体激活及调控、膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病的关系及其在肾小球疾病治疗中的运用等方面,对近些年研究成果予以综述。

紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3信号通路及肺血管通透性的影响

目的探究紫草素对肺炎链球菌引起的肺炎小鼠细胞外信号调节激酶/p38丝裂素活化蛋白激酶/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(ERK/p38/NLRP3)信号通路及肺血管通透性的影响。方法采用肺炎链球菌悬液50 L滴加BALB/c小鼠破损鼻黏膜建立肺炎链球菌性肺炎模型,成模小鼠采用随机数字表法分为模型组、紫草素低、中、高浓度组及头孢呋辛酯组,另取鼻腔滴加50 L生理盐水BALB/c小鼠为对照组,每组10只,紫草素低、中、高浓度组分别给予紫草素12.5 mg/kg、25.0 mg/kg、50.0 mg/kg,头孢呋辛酯组给予头孢呋辛酯50.0 mg/kg,对照组、模型组给予等量生理盐水,每天1次,连续灌胃7 d。末次给药12 h后处死小鼠,检测各组小鼠左肺湿/干重比值(W/D),每组采用随机数字表法选取4只小鼠进行1%伊文氏蓝5 mL/kg尾静脉注射检测肺血管通透性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(WB)分别检测肺组织ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺组织W/D比值[(4.49±0.27)%比(3.02±0.15)%]、肺血管通透性[(0.091±0.009)g/mg比(0.034±0.004)g/mg]、IL-1β[(567.29±14.65)pg/mL比(102.46±6.73)pg/mL]、TNF-α[(417.16±12.89)pg/mL比(83.59±6.28)pg/mL]、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高浓度组小鼠肺组织W/D比值、肺血管通透性、IL-1β、TNF-α表达量、ERK、p38、NLRP3 mRNA及蛋白表达水平均依次降低(P<0.05),紫草素高剂量组均低于头孢呋辛酯组(P<0.05)。结论紫草素可减轻肺炎链球菌性肺炎小鼠肺组织损伤、炎症反应及肺血管通透性,可能与抑制ERK/p38/NL‐RP3信号通路有关。

人补体衰变加速因子、补体膜辅助调节蛋白及CD59真核表达载体构建及序列分析

目的:构建人补体衰变加速因子(Decayacceleratingfactor,DAF)、补体膜辅助调节蛋白(membranecofactorprotein,MCP)、CD59的真核表达载体pSecTag2/HygroB-DAF、pSecTag2/HygroB-MCP、pSecTag2/HygroB-CD59。方法:应用PCR方法,从DAF-pGEM-TEasyVector、MCP-pGEM-TEasyVector和CD59-pGEM-TEasyVector分别克隆所需的DNA片段,经限制性内切酶BglandXhol消化后,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,分别构建人DAF、MCP、CD59真核表达质粒,并进行酶切鉴定及DNA序列测定分析。结果:DAF基因大小为1049bp,MCP基因大小为1065bp,CD59基因大小为312bp,与genbank中记载的人DAF、MCP和CD59cDNA序列结果基本相同。结论:成功构建DAF、MCP和CD59真核表达质粒,为今后进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。

肾炎患者血中C3d水平及CD16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

目的 :探讨肾炎患者补体激活时活化单核巨噬细胞 (CD16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (MCP)、促衰变因子 (DAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 136例肾小球肾炎患者血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定血清C3d及荷C3d 免疫复合物的 (C3d IC)水平。结果 :MC病人血清C3d、C3d IC水平及血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HFR 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人血清C3d水平、血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平及MN、PGN病人C3d IC水平均显著高于正常组 (P <0 0 1) ,且MCP、DAF、HRF 2 0表达水平与血清C3d水平呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :肾小球肾炎补体激活时血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护CD16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,CD16 + Mo MΦ浸润肾组织并产生促炎作用 ,参于肾小球肾炎的发病及发展。

肾炎患者尿中sC5b-9水平及CD16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

目的 :探讨肾炎患者补体激活时尿中活化单核巨噬细胞 (CD16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (MCP)、促衰变因子 (DAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 134例肾小球肾炎患者尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定尿中可溶性C5b 9(sC5b 9)水平。结果 :MC病人尿中sC5b 9水平及CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人尿中sC5b 9水平、CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平均显著高于正常组 (P <0 0 1) ,且MCP、DAF、HRF 2 0表达水平与sC5b 9水平呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :肾小球肾炎补体激活时尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护浸润肾组织的CD16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,CD16 + Mo MΦ产生促炎作用 ,参与肾小球肾炎的发病及发展。

构建人补体膜辅助调节蛋白真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH 3T_3细胞

目的:构建人补体膜辅助调节蛋白(m embrane cofactor prote in,MCP)真核表达载体并利用壳聚糖(Ch itosan)转染小鼠NIH3T3细胞。方法:应用PCR方法,从MCP-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-MCP真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定;利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NIH 3T3细胞,并对转染细胞进行抗MCP免疫组织化学染色。结果:MCP基因大小为1 065 bp,与Genebank中记载的人MCP cDNA序列结果基本一致;抗MCP免疫组织化学染色显示转染细胞胞浆弥漫阳性。结论:成功构建了人MCP真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH3T3细胞,为进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。

膜辅蛋白—补体激活途径中的一个重要的膜调节蛋白

膜辅蛋白(MCP)是补体激活途径中的一个重要的膜调节蛋白,它是Ⅰ因子灭活C(?)b、iC(?)b 和C4b 的辅因子。它与CR1、CR2、DAF、C4bp 和H 因子组成补体调节蛋白,其基因均定位于人的第1号染色体q31～34上。现已克隆了MCP,并弄清了其结构特征及一些重要的生物学功能。

Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白在急性缺氧性细胞损害中的表达调节机制研究

目的探讨Aβ-结合性酒精脱氢酶蛋白(ABAD)的基因表达调控机制及其对缺氧反应的分子生物学机理。方法根据Genebank中包含ABAD基因全长序列的DNA序列设计引物,PCR扩增ABAD基因上游启动子区全长2055bp之片段,并将其亚克隆至荧光酶报告载体LuciferasepGL3中的NheI/SmaI位点,构建ABAD启动子-pGL3表达质粒(P-2055)及5′-端截短的ABAD启动子-pGL3表达载体(P-1453,P-128)。用脂质体Lipofectmine2000将1μg待转染的空pGL3表达载体DNA(阴性对照)及ABAD全长和5′截短启动子-pGL3表达质粒DNA(P-2055,P-1453,P-128)转染至对数生长的COS-1细胞中。细胞转染后48h,收集细胞,裂解,提取蛋白,以Dual-luciferasere-porter系统为底物并采用荧光测定仪测定荧光酶活性。采用相对活性方法比较全长和截短的ABAD启动子活性,以确定核心启动子序列。采用缺氧箱分别诱导细胞缺氧后,测定ABAD核心启动子序列的活性改变。结果ABAD全长启动子-pGL3表达质粒(P-2055)的荧光酶活性较pGL3空表达载体高300倍以上(P<0.001)。该全长启动子截短至-128bp(P-128)时,活性仍为全长序列的105%,而将该128bp序列去除后,其活性几乎全部消失。ABAD核心启动子序列(P-128)经缺氧处理1、4、8、16h后,其活性分别降为正常氧状态的(64.5±1.7)%、(51.4±1.6)%、(17.8±1.1)%、(8.3±0.3)%,各缺氧时间点相对活性与正常氧状态相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论ABAD上游128bp为该基因的核心启动子序列,决定了ABAD的表达活性。该启动子对缺氧高度敏感,其对缺氧的反应是ABAD缺氧性改变的主要分子机理。

CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性及蛋白表达的影响

[目的]探讨在CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性和蛋白表达的影响.[方法]利用DNA克隆技术,将SREBP-1c和其阴性表达体(ADDN)DNA序列重组到表达载体pSV-sport上.用SREBP-1c转染CV-1细胞,应用Northern Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA的表达及其稳定性的影响,应用Western Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体蛋白表达的影响.[结果]SREBP-1c可增加Ⅰ型葡萄糖载体的mRNA表达水平及稳定性,可提高Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达水平.[结论]SREBP-1c可增强Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达,可能通过调节Ⅰ型葡萄糖载体的表达水平而参与胰岛素对血糖的调节过程.

呼吸道合胞病毒持续感染导致人支气管上皮细胞囊性纤维化穿膜传导调节蛋白功能障碍

目的:呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)持续感染可能是导致气道慢性疾病的病理原因,然而,其作用机制尚不清楚。囊性纤维化穿膜传导调节蛋白(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)是一种顶端膜氯离子(Cl-)通道,对上皮液体、Cl-和碳酸氢盐运输的调节至关重要。CFTR功能障碍将导致支气管分泌物改变和黏液清除受损,与气道炎症有关。我们前期在RSV感染的小鼠模型中观察到气道上皮细胞CFTR表达下调。本研究通过构建RSV持续感染的气道上皮细胞模型,进一步研究其对CFTR表达和功能的影响。方法:以病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.01的RSV感染16HBE14o-细胞后继续传代。以real-time RT-PCR、免疫荧光及蛋白质印迹法检测CFTR的表达,以新型氯离子荧光探针MQAE测量细胞内Cl-浓度和全细胞膜片钳记录Cl-电流。结果:16HBE14o-细胞感染RSV病毒后存活至第3代(G3)。CFTR的表达在RSV感染后从G1到G3逐渐降低,同时伴随着CFTR功能的降低。16HBE14o-细胞暴露于RSV可导致TGF-β1表达进行性升高及其下游信号分子Smad2磷酸化。用SB431542阻断TGF-β1信号通路可阻止Smad2磷酸化,增加CFTR的表达。结论:RSV感染可导致气道上皮细胞CFTR功能缺陷,其作用可能是通过激活TGF-β1信号通路介导的。

中西医结合治疗牛纤维蛋白膜性肠炎

牛纤维蛋白膜性肠炎是指牛肠壁黏膜发生特殊炎症,产生纤维蛋白凝结成形索状物或不规则的块状蛋白凝结,经腹痛努责排出后,病畜逐渐恢复常态为特征的一种疾病。

特发性膜性肾病患者血清补体H因子、补体H因子相关蛋白1和补体片段C5a表达观察

目的观察特发性膜性肾病(IMN)患者血清补体H因子(FH)、补体H因子相关蛋白1(FHR1)及补体片段C5a的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择98例IMN的患者为IMN组,23例健康体检者作为健康对照组。采集两组静脉血,ELISA法检测血清FH、FHR1及C5a,分析血清FH、FHR1及C5a表达变化与IMN患者肾脏损伤生化指标间的相关性。结果与对照组比较,IMN组血清FHR1、C5a水平升高(P均<0.05)。与少量蛋白尿IMN患者比较,大量蛋白尿IMN患者血清FHR1水平升高(P<0.05)。IMN患者血清FHR1水平与24 h尿蛋白、Cr和Cys-C均呈正相关(r分别为0.492、0.215、0.371;P均<0.05),与eGFR存在负相关(r=-0.298;P<0.05)。IMN患者血清C5a水平与24 h尿蛋白、Cr和Cys-C肾功能生化指标均呈正相关(r分别为0.366、0.231、0.253;P均<0.05),与eGFR存在负相关(r=-0.376;P<0.05)。IMN患者血清FHR1水平与C5a水平呈正相关(r=0.342;P<0.05)。结论IMN患者血清FHR1、C5a水平升高,且血清FHR1、C5a水平可能与患者病情的发生、发展有关。

固醇调节元件结合蛋白-1与阻塞性睡眠呼吸暂停代谢异常的研究进展

阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)是高脂血症、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病的危险因素,其病理基础的核心是间歇性低氧(IH)。固醇调节元件结合蛋白(SREBP)是脂质生物合成的一类调控因子,主要在肝脏和脂肪细胞中表达,参与调节脂肪酸和胆固醇生物合成。近年来,SREBP-1在IH条件下表达上调对脂质合成的影响备受关注。现针对SREBP-1在IH下对OSA相关代谢性疾病的研究进展进行综述,为预防或延缓OSA相关代谢疾病的进展以及新的靶向治疗提供思路。

核因子κB和胆固醇调节原件结合蛋白2在原发性肝癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨核因子κB(NF-κB)和胆固醇调节原件结合蛋白2(SREBP2)在原发性肝癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法收集原发性肝癌组织74例和癌旁正常组织46例。采用免疫组织化学染色法检测两种组织中NF-κB和SREBP2的表达情况,分析NF-κB和SREBP2表达与患者临床特征和预后的关系,采用Cox回归模型分析原发性肝癌患者预后的影响因素。结果原发性肝癌组织中NF-κB、SREBP2的阳性表达率均高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P <0.05)。低分化、TNM分期为Ⅲ期、有脉管侵犯、有淋巴结转移、病理类型为肝细胞癌的原发性肝癌患者原发性肝癌组织中NF-κB和SREBP2的阳性表达率分别高于中/高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无脉管侵犯、无淋巴结转移、其他病理类型的患者,差异均有统计学意义(P <0.05)。NF-κB、SREBP2阴性表达患者的生存情况分别优于NF-κB、SREBP2阳性表达的患者,差异均有统计学意义(P <0.05)。Cox多因素回归分析结果显示,NF-κB阳性、SREBP2阳性、低分化、TNM分期为Ⅲ期、有脉管侵犯、有淋巴结转移、病理类型为肝细胞癌均是原发性肝癌患者预后的独立危险因素(P <0.05)。NF-κB阴性原发性肝癌患者原发性肝癌组织中SREBP2的阳性表达率为33.33%(7/21),明显低于NF-κB阳性患者的83.02%(44/53),差异有统计学意义(P <0.01)。结论 NF-κB和SREBP2在原发性肝癌组织中的阳性表达率较高,NF-vB和SREBP2阳性表达患者多合并脉管侵犯、低分化、高TNM分期及淋巴结转移等特征,NF-κB和SREBP2阳性表达的原发性肝癌患者的预后较差。

血清脂蛋白相关磷脂酶A2、补体组分1q与膜性狼疮性肾炎活动性的相关性

目的:探究血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、补体组分1q(C1q)与膜性狼疮性肾炎(LN)活动性的相关性。方法:67例Ⅴ型LN患者根据系统性红斑狼疮疾病活动度评分表(SLEDAI)评分分为轻度活动组(n=41)、中重度活动组(n=26),同期53名健康志愿者为对照组。比较三组受试者的一般临床资料、血清Lp-PLA2、补体C1q水平、LN活动性指数(AI)和慢性化指数(CI)评分,分析Lp-PLA2、补体C1q与疾病活动性评分的相关性,并通过受试者工作特征曲线(ROC)评价Lp-PLA2、补体C1q预测膜性LN疾病活动性的价值。结果:三组的中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和Lp-PLA2水平比较,对照组<轻度活动组<中重度活动组(P<0.05);三组的肾小球滤过率(c-aGFR)、补体C1q水平比较,对照组>轻度活动组>中重度活动组(P<0.05)。轻度活动组患者的LN活动性指数(AI)、SLEDAI评分小于中重度活动组,差异具有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果显示Lp-PLA2与SLEDAI评分呈正相关(r=0.726,P<0.05),补体C1q与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.637,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示Lp-PLA2、补体C1q预测膜性LN患者疾病活动性的曲线下面积(AUC)分别为0.729和0.753,二者联合检测的AUC值为0.839,高于单个指标检测且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:血清Lp-PLA2和补体C1q可作为预测膜性LN疾病活动性的重要血清学指标之一。

膜辅蛋白─补体活化调节剂家族新成员

膜辅蛋白（ＭＣＰ，ＣＤ４６）是一种广泛分布于Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合细胞表面的糖蛋白。它属于补体活化调节剂（ＲＣＡ）基因簇家族。ＭＣＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈两条完全不同的带，其表达量在不同的细胞类型有所不同。已用探针从ｃＤＮＡ文库中获得了其ｃＤＮＡ片段并测序，基因组构成也已确定。ＭＣＰ在补体调控途径中发挥很重要的作用，它可与Ｃ３结合，并具有Ⅰ因子依赖性辅因子活性。