人膜联蛋白Ⅴ的表达及核素标记

目的构建人膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)表达载体并诱导其表达,应用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)偶联后应用核素99mTc标记。方法PCR扩增含AnnexinⅤ编码基因序列,将扩增产物克隆至His融合表达载体pET-28a(+),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导His融合AnnexinⅤ的表达,应用Ni-NTA Super-flow纯化并经测序、SDS-PAGE及Western blot确证。表达的蛋白通过HYNIC偶联后进行99mTc标记,考察标记物的特性。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明,插入片段的序列与发表的AnnexinⅤ基因编码序列一致。在IPTG诱导下,经Western blot及SDS-PAGE证实,重组大肠埃希菌DH5α高效表达分子量约36 kD的目的产物9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ标记率及放化纯均达到90%以上,稳定性在6 h以上,可以满足核素显像的要求。结论人AnnexinⅤ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a(+)上,并在大肠埃希菌DH5α中高效、大量表达。经HYNIC偶联后99mTc标记,可以得到较高的标记率和放化纯9。9mTc-HYNIC-AnnexinⅤ有望成为一种有良好临床应用前景的凋亡显像剂。

川崎病患儿血浆抗β2糖蛋白1抗体对人脐静脉血管内皮细胞和膜联蛋白Ⅴ结合的影响及意义

目的通过研究川崎病(KD)患儿血浆抗β2糖蛋白1(β2GP1)抗体水平及其对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)与膜联蛋白Ⅴ结合率的影响,探讨抗β2GP1抗体在KD血管损害中的作用及意义。方法选择37例KD患儿作为观察组,均在用激素、阿司匹林和(或)静脉注射丙种球蛋白(IVIG)前采血;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患儿血浆抗β2GP1抗体水平,流式细胞术分析KD患儿血浆对annexinⅤ与HUVEC结合水平的影响;20例同期住院年龄相仿的感染性疾病患儿为对照组,均除外心、肝、肾、血液及风湿性疾病。组间比较采用SPSS11.5软件进行分析。结果37例KD患儿中并冠状动脉病变者17例。观察组和对照组血浆抗β2GP1抗体水平分别为(8059.5±1917.7)U/L和(5210.0±1125.9)U/L,二者比较有显著性差异(t=15.41P<0.05);冠状动脉损伤患儿与冠状动脉正常患儿血浆抗β2GP1抗体水平分别为(9311.8±2148.2)U/L和(6995.0±697.0)U/L,二者比较有显著性差异(t=10.49P<0.05)。未加血浆时annexinⅤ与HUVEC结合率为(26.1±5.76)%,加对照组患儿血浆后annexinⅤ与HUVEC结合率为(21.22±5.54)%,二者比较无显著性差异(t=0.708P>0.05);加KD患儿血浆后annexinⅤ与HUVEC结合率为(10.55±3.18)%,与不加血浆时比较显著降低(t=8.06P<0.001);也显著低于加对照组血浆后结合率(t=4.72P<0.001)。结论抗β2GP1抗体阻止annexinⅤ与血管内皮细胞结合,是KD冠状血管炎的机制之一,抗β2GP1抗体是KD冠状动脉损伤的一种重要危险因子。

老年急性冠状动脉综合征患者血浆膜联蛋白Ⅴ的检测及相关性研究

目的通过检测老年急性冠状动脉综合征(ACS)患者膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)的表达率,来探讨其与心血管疾病危险因素、纤维蛋白原、D-二聚体及血小板聚集率(PAR)的相关性。方法选取2014年12月至2016年5月在我院行冠状动脉造影者156例,其中ACS 88例,稳定型心绞痛(SAP)36例和冠状动脉造影正常(对照组)32例。采用流式细胞仪检测AnnexinⅤ表达率和血小板聚集率,同时采用免疫荧光法测定纤维蛋白原、D-二聚体,并详细记录患者的年龄、吸烟史、高血压、糖尿病病史等。比较不同组间AnnexinⅤ表达率,分析其与心血管疾病危险因素、纤维蛋白原、D-二聚体及PAR的相关性。结果 ACS组AnnexinⅤ表达率与SAP组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而SAP组与对照组比较差异无统计学意义(P=0.487);当ROC曲线下面积(AUC)为0.876时,cut-off值为29.36%,诊断ACS的敏感性及特异性分别为80.1%、79.9%。ACS患者AnnexinⅤ表达率与血浆纤维蛋白原(r=0.468,P=0.047)、D-二聚体(r=0.451,P=0.040)、PAR(r=0.531,P=0.010)、吸烟(r=0.510,P=0.009)、高血压(r=0.506,P=0.012)、糖尿病(r=0.493,P=0.026)呈正相关。结论老年ACS患者血浆AnnexinⅤ表达率与糖尿病、高血压、吸烟、纤维蛋白原、D-二聚体、PAR呈正相关,对预测ACS的发生及临床风险有一定的参考价值。

人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的作用研究

目的 检测人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的表达,探讨其在乙肝宫内感染中的意义.方法 用SP法检测30例HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘和20例乙型肝炎病毒血清标志物阴性的正常足月胎盘人膜联蛋白Ⅴ的表达、分布,并进行定量分析.结果 实验组和对照组标本的绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞、毛细血管内皮细胞均可见棕黄色人膜联蛋白Ⅴ表达的阳性信号;乙型肝炎病毒感染胎盘中人膜联蛋白Ⅴ的表达由母面绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞逐层递减;乙型肝炎病毒感染组和正常组人膜联蛋白Ⅴ比较,前者的平均灰度比后者明显增高,具有显著性差异（t=-2.558,P〈0.05）.结论 乙型肝炎病毒感染的胎盘组织人膜联蛋白Ⅴ的表达上调,人膜联蛋白Ⅴ可能作为受体介导了乙型肝炎病毒与胎盘组织细胞的内吞和摄入等过程,从而导致了乙型肝炎病毒对胎盘的感染.

不对称二甲基精氨酸、膜联蛋白Ⅴ、生存蛋白在子痫前期患者血清及胎盘组织中的水平及意义

目的 探讨不对称二甲基精氨酸(ADMA)、膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)、生存蛋白(Survivin)在子痫前期患者血清及胎盘组织中的水平及意义。方法 选取产科住院的子痫前期患者60例为子痫前期组,另外选取同期产科住院的健康产妇60例为健康产妇组。分析ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达水平及相关性。结果 子痫前期组产妇血清及胎盘组织中的ADMA表达水平高于健康产妇组,AnnexinⅤ、Survivin表达水平低于健康产妇组,差异有统计学意义(P<0.05)。早发型子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA表达水平高于晚发型子痫前期患者,AnnexinⅤ、Survivin表达水平低于晚发型子痫前期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度子痫前期患者血清及胎盘组织ADMA表达水平低于重度子痫前期患者,AnnexinⅤ、Survivin表达水平高于重度子痫前期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ADMA与AnnexinⅤ、Survivin呈负相关(r=-0.481、-0.683,P=0.001、0.001), AnnexinⅤ与Survivin呈正相关(r=0.495,P=0.001)。结论 ADMA、AnnexinⅤ、Survivin在子痫前期患者血清及胎盘组织中呈特异性表达,且与病情轻重关系密切,为临床子痫前期诊治提供了新的理论参考。

人膜联蛋白Ⅴ基因的克隆及原核表达

目的 :构建人膜联蛋白 c DNA的原核表达载体并诱导其表达。 方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总 RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。 结果 :凝胶电泳显示人胎盘组织 PCR扩增产物的分子质量大小与目的片段大小相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白 基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL 2 1重组菌高效表达出一个相对分子质量约为 6 0 0 0 0的产物。 结论 :人膜联蛋白 编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。

膜联蛋白Ⅴ去除奶牛死精子技术及其在性控冷冻精液生产中的应用

本研究旨在通过膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)与奶牛死精子的特异结合,并尝试与免疫磁珠技术共用去除奶牛精液中死精子,从而提高性控精液生产效率。试验结果显示,通过膜联蛋白Ⅴ与免疫磁珠筛选后的精子活力、膜完整性、线粒体活性均有不同幅度改善,特别是上机分离时X/Y死精率明显下降(P<0.05),说明该技术流程设计可以有效去除部分死精子,提高性控精液生产效率。同时,试验证明膜联蛋白Ⅴ与免疫磁珠筛选操作对于分离后的X或Y精子制备的性控冷冻精液各项产品技术指标均没有明显影响(P>0.05),说明该技术流程并不会对精子造成额外的损伤。综上所述,本研究开发的Annexin Ⅴ蛋白的特异性结合免疫磁珠方法与技术工艺,可以有效去除奶牛精液中的死精子,显著提升奶牛性控冷冻精液生产效率、降低生产成本,为家畜性别控制冷冻精液推广应用提供新的技术支撑。

膜联蛋白Ⅴ微泡体外高特异性靶向识别凋亡细胞

目的制备可识别细胞凋亡的膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ)超声靶向微泡(MB),观察其体外寻靶能力。方法利用生物素-亲和素系统制备靶向MB,并评价其理化性质及靶向配体结合状况。将人甲状腺未分化癌细胞株传代培养至对数期,随机分为3份,以微波消融其中2份,以1份作为对照,获得凋亡细胞并进行验证。于荧光显微镜下观察3组annexinⅤ靶向MB与普通MB:A组,凋亡细胞+普通MB;B组,正常细胞+annexinⅤ靶向MB;C组,凋亡细胞+annexinⅤ靶向MB。结果仅凋亡细胞可与annexinⅤ靶向MB稳定结合。结论 annexinⅤ靶向MB可在体外靶向结合凋亡细胞。

应用免疫荧光双标记染色技术检测乙型肝炎病毒感染胎盘膜联蛋白V的表达(英文)

背景:膜联蛋白V是近年来被作为肝细胞膜上存在的与乙型肝炎病毒感染相关受体研究的热点之一,并在胎盘组织中也有表达。目的:探讨膜联蛋白V在HBV宫内感染中的作用;揭示HBV进入胎盘组织细胞的方式,为HBV的宫内感染的机理提供理论依据。设计:随机对照实验。单位:泰山医学院。对象:选择2003-01/2004-12济南市妇幼保健院、泰安市中心医院、泰安市妇幼保健院收集的30例HBsAg阳性孕妇足月分娩的胎盘组织,同时收集母血分离血清。实验经过孕妇知情同意及医院伦理委员会批准。兔抗人膜联蛋白V亲和纯化抗体(第一抗体)、鼠抗人HBs mAb(第一抗体)、生物素化羊抗小鼠IgG(第二抗体)均购自武汉博士德生物工程有限公司。方法:用即用型SABC免疫组织化学染色试剂,检测30例HBsAg阳性的足月胎盘组织中,有18例检测到HBsAg,随机选取10例进行荧光双标染色,其染色主要过程为将待测石蜡切片标本常规脱蜡至水;抗原微波热修复;加入第一种一抗(兔抗人AnV亲和纯化抗体1:60,为单克隆抗体)置湿盒中,4℃冰箱过夜;第二种一抗(鼠抗人HBs mAb1:50),置湿盒中,4℃冰箱过夜;加入与第二种一抗相应的二抗(如生物素化的羊抗鼠IgG1:100):加入以PBS作适当稀释的第一种荧光抗体(如FITC-羊抗兔IgG1:50);加入第二种荧光抗体(Avidin-Cy3);缓冲甘油封固;激光共聚焦显微镜下观察并进行图像分析。用IPP4.5图像分析法,先进入IPP4.5系统的Image Analysis程序,然后调入分析文件进行分析。主要观察指标:乙型肝炎病毒感染的胎盘组织中HBsAg/膜联蛋白V的存在与分布情况。结果:选取10例进行荧光双标染色结合激光共聚焦显微镜检测胎盘组织上滋养层细胞乙型肝炎病毒/膜联蛋白V的存在与分布模式。胎盘组织中存在着丰富的膜联蛋白V,位于绒毛合体滋养层细胞,在基质细胞和血管内皮细胞都有膜联蛋白V的表达。并发现在同一细胞中存在着乙型肝炎病毒和膜联蛋白V的共存现象。结论:乙型肝炎病毒感染胎盘细胞可能是通过与细胞上的受体膜联蛋白V结合,促使病毒进入胎盘细胞,导致宫内感染。

膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记和应用研究

目的制备一种新型的膜联蛋白V,用异硫氰酸荧光素进行标记,观察它对外露磷脂酰丝氨酸(PS)红细胞的荧光染色情况。方法带有金属螯合位点的膜联蛋白V通过毕赤酵母的培养和甲醇诱导表达获得,膜联蛋白V粗品通过离子交换和硫酸铵沉淀得到纯化产物。在硼酸盐缓冲液完成膜联蛋白V的异硫氰酸荧光素标记,标记产物经过离子交换进行纯化。红细胞经过戊二醛处理后PS外露于细胞表面。在荧光显微镜下观察异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V对外露PS红细胞的结合。结果毕赤酵母重组表达的新型膜联蛋白V经过离子交换和硫酸铵沉淀后得以纯化和浓缩。经过异硫氰酸荧光素进行标记后观察到它对外露PS红细胞的结合。结论毕赤酵母系统重组表达的膜联蛋白V具有结合外露PS红细胞的能力,可以应用于细胞凋亡的体外检测。

人膜联蛋白的表达及性质初步研究

基于人膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)cDNA分子构建了相应的大肠杆菌融合表达体系.通过摸索和优化表达条件,表达并纯化出可溶的GST-重组人Annexin Ⅴ融合蛋白.通过活化部分凝血活酶时间(tAPT)实验测定表明,GST-重组人Annexin Ⅴ融合蛋白能有效延长tAPT,具有较强的抗凝活性,且延长时间与剂量成线性关系.

AnnexinⅤ在低氧滋养细胞中的表达下调

目的探讨膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)在体内低氧滋养细胞中的表达及其意义。方法采用免疫组化、流式细胞术等实验技术测定低氧滋养细胞内膜联蛋白Ⅴ的表达。结果 1)体内低氧状态下滋养细胞AnnexinⅤ的表达显著低于正常滋养细胞。2)体外实验显示随着AnnexinⅤ浓度的增加,其抗凝功能呈梯度性变化。结论低氧滋养细胞中AnnexinⅤ表达呈明显下调,可能影响胎盘滋养细胞的生理功能,导致多种不良妊娠结局。

胎盘Hofbauer细胞及其hAⅤ表达

胎盘是妊娠期间存在的特有器官，不仅能够实现母体和胎儿间物质交换，还可以通过胎盘屏障抵抗各种侵入胚胎的病原微生物。 Hofbauer细胞是胎盘巨噬细胞，位于绒毛间质内，能够捕获和提呈抗原信息，参与母胎免疫反应；其表面表达人膜联蛋白Ⅴ（ Human AnnexinⅤ， hAⅤ）等多种受体。 hAⅤ是钙离子依赖的磷脂结合蛋白家族成员，参与细胞内、外多种代谢过程，如细胞信号转导、分化、细胞膜运输、胞吞、胞吐作用等。本文围绕胎盘Hofbauer 细胞及其hAⅤ研究进展进行综述，现将结果报道如下。

Human AnnexinⅤ在不同胎盘中的表达的定量分析

目的观察人膜联蛋白Ⅴ(Human AnnexinⅤ,HAⅤ)在乙肝病毒感染胎盘、正常中、晚孕胎盘及早孕绒毛中的表达并探讨其意义。方法用SP法检测HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘、HBV血清标志物阴性的正常早孕、中孕和足月胎盘各20例HAⅤ的表达、分布并进行定量分析。结果中孕、足月胎盘和HBV感染的胎盘组织中HAⅤ呈不均一的棕黄色颗粒状染色,泛存在于胎盘组织各类细胞胞浆、胞膜和核膜上。滋养细胞呈强阳性染色,绒毛间质细胞和毛细血管内皮细胞呈弱阳性染色。早孕绒毛HAⅤ棕黄色颗粒主要分布于外层滋养细胞的胞浆、胞膜和核膜上,最内层滋养细胞和间质偶见表达;比较HBV感染组和正常足月组胎盘HAⅤ表达的量,前者的平均灰度比后者明显增高,差异具有显著性(P<0.01),中孕组与足月组HAⅤ表达的量没有差别(P>0.05),早孕和中孕组、足月组HAⅤ表达的量的比较,前者显著低于后两者(P<0.05)。结论HAⅤ可能作为受体介导了HBV对胎盘的感染。

ACS患者血浆网膜素-1、MCP-1及AnnexinⅤ的变化及其诊断学价值

目的探讨老年急性冠脉综合征(ACS)患者血浆网膜素-1、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)的变化及对ACS的诊断价值。方法选取在河南大学第一附属医院确诊的92例老年ACS患者(ACS组)、90例稳定型心绞痛(SAP)患者作为SAP组,检测对比两组患者的网膜素-1、MCP-1及AnnexinⅤ水平及一般资料情况,分析网膜素-1、MCP-1及AnnexinⅤ鉴别诊断SAP与ACS患者的价值。结果两组患者的年龄、性别、 BMI、吸烟、饮酒、 TG、 TC、HDL-C、LDL-C、合并高血压、糖尿病的情况差异均无统计学意义(P>0.05);ACS组患者的MCP-1及AnnexinⅤ高于SAP组患者(P<0.05),ACS组患者的网膜素-1水平低于SAP组患者(P<0.05);网膜素-1鉴别诊断ACS和SAP患者的灵敏度为82.18%、特异度为69.41%、AUC值为0.770;MCP-1鉴别诊断ACS和SAP患者的灵敏度为75.50%、特异度为85.47%、AUC值为0.824;AnnexinⅤ鉴别诊断ACS和SAP患者的灵敏度为94.10%、特异度为79.53%、AUC值为0.878。结论 ACS患者MCP-1及AnnexinⅤ水平较SAP患者升高,血浆网膜素-1较SAP患者降低,检测上述三项指标对于辅助诊断老年ACS及SAP患者有一定的价值。

^(99m)Tc-HYNIC-annexinⅤ活体检测单次放疗后肿瘤细胞凋亡

目的:本研究旨在采用99mTc-HYNIC-annexinⅤ活体检测放疗后肿瘤的凋亡情况,并初步探讨凋亡与照射剂量及肿瘤敏感性的关系。方法:将EL4淋巴瘤和S180肉瘤细胞株分别接种于实验小鼠右腋下10 d,随机分成显像组和观察组。显像组不同剂量照射后尾静脉注射99mTc-HYNIC-annexinⅤ,2 h后SPECT显像,取组织称重后分别测量放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/B、T/M放射性比值,应用TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞数。观察组照射后观察2周。结果:EL4淋巴瘤随照射剂量增加显影逐渐清晰,凋亡细胞数增多,且与%ID/g呈正相关(r=0.892,P<0.001);S180肉瘤不明显。相同剂量(0 Gy或8 Gy)照射,EL4淋巴瘤放射性分布及凋亡细胞数明显高于S180肉瘤。8 Gy照射后,S180肉瘤仅缩小0.1 cm,EL4淋巴瘤完全消退。结论:99mTc-HYNIC-annexinⅤ可早期活体检测放疗诱导的肿瘤凋亡。放射诱导的凋亡与疗效呈正相关,检测凋亡有助于判断其对放疗的敏感性,可以作为预后的指标。

幼龄兔缺氧缺血性脑损伤的细胞凋亡显像研究

目的探讨^(99)Tc^m-联肼尼克酰胺-膜联蛋白 V(HYNIC-Annexin V)在幼龄兔缺氧缺血性脑损伤(HIBD)细胞凋亡显像中的价值。方法制作幼龄兔假手术组、HIBD 4 h 组、HIBD 40 h 组模型,对各组动物行注药后60 min 平面脑显像和脑组织石蜡切片观察,对 HIBD 40 h 组还进行注药后5,30,120 min 显像;用 ROI 技术计算各组动物脑患侧与健侧放射性计数比值(T/NT);假手术组和HIBD 4 h 组还进行 MRI、弥散加权成像(DWI)。结果假手术组、HIBD 4 h 组和 HIBD 40 h 组注药后60 min T/NT 分别为0.94±0.14,1.32±0.11,1.81±0.07(F=82.385,P<0.01);HIBD 40 h 组不同时间(5,30,60,120 min)显像获得的 T/NT 分别为1.72±0.04,1.77±0.06,1.81±0.07,1.71±0.03(F=3.994,P>0.01)。切片观察假手术组脑组织未见凋亡细胞,HIBD 4 h 组与 HIBD 40 h 组患侧脑见凋亡细胞,后者较明显;HIBD 4 h 组 MRI、DWI 和表观弥散系数(ADC)图均未见异常。结论^(99)Tc^m-HYNIC-Annexin V 显像可以早期发现神经细胞凋亡,在新生儿 HIBD 细胞凋亡的无创性诊断、抑制凋亡疗效评价和预后估计方面有重要的应用前景。

^99Tc^m—His10—Annexin Ⅴ探测非小细胞肺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨^99Tc^m标记带有10个连续组氨酸的膜联蛋白Ⅴ（His10-Annexin Ⅴ）探测荷非小细胞肺癌（NSCLC）裸小鼠模型化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性。方法用^99Tc^m直接标记His10-Annexin Ⅴ。荷H460 NSCLC肿瘤裸小鼠模型20只，按体表面积以100mg／m^2剂量紫杉醇化疗诱导，分成未治疗（对照）、化疗诱导后24，48，72h共4组.^99Tc^m-His10-AnnexinⅤ显像探测化疗前后肿瘤组织细胞凋亡，计算肿瘤／对侧正常肌肉组织放射性比值（T／NT），测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。以^99Tc^m-IgG显像为对照，确定肿瘤的非特异性摄取。用流式细胞术（FCM）测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-3），光学显微镜HE及原位末端标记法（TUNEL）染色测定凋亡指数。采用SPSS12．0软件进行统计学处理，运用单因素方差分析和直线相关分析（Pearson）。结果”^99Tc^m -His10-Annexin Ⅴ放化纯为（98．01±1．67）％。注射^99Tc^m- His10-Annexin Ⅴ后2h即可得到清晰图像，化疗诱导组肿瘤部位可见明显的放射性浓聚，化疗后24，48，72h组的T／NT值分别为2．63±0．76，3．41±0．90，3．85±0．62；对照组T／NT值为1．42±0．19，F值分别为12．064，23．322，70．177，P均〈0．01。未治疗组肿瘤仅有少量放射性摄取，为（1．09±0．18）％ID／g，化疗后肿瘤摄取明显增加，24，48，72h肿瘤摄取分别为（2．55±0．73）、（3．60±1．09）、（3．73±0．97）％ID／g，明显高于未治疗组（F值分别为18．733，20．624，35．626，P均〈0．01）。^99Tc^m-IgG显像化疗组及对照组肿瘤均未见明显放射性浓聚。未治疗组活化Caspase-3为（3．70±0．74）％，化疗后24，48，72h分别为（23．46±2．23）％、（62．85±6．13）％、（70．44±6．09）％，3个化疗诱导组和未治疗组相比差异均有统计学意义（F值分别为354．610，459．438，591．052，P均〈0．01）。光学显微镜HE及TUNEL染色法发现，未治疗组细胞凋亡指数为（3．31±0．61）％，化疗后24，48，72h细胞凋亡指数分别为（32．90±6．64）％、（70．42±7．54）％、（83．23±9．71）％，化疗诱导组与对照组细胞凋亡指数差异均有统计学意义（F值分别为98．627，393．215，337．386，P均〈0．01）。T／NT值、肿瘤组织放射性摄取与活化Caspase-3及细胞凋亡指数均有很好的相关性（r=0．847，0．833，0．774，0．850，P均〈0．01）。结论^99Tc^m-His10-Annexin Ⅴ显像可早期探测NSCLC化疗后细胞凋亡，进而早期预测和评价肿瘤治疗疗效。

凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ对肿瘤模型化疗疗效早期评价的可行性

目的评价凋亡显像剂^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ在肿瘤动物模型中对化疗疗效早期评估的可行性。方法人膜联蛋向Ⅴ（annexinⅤ）通过双功能螯合剂联肼尼克酰胺（HYNIC）进行^99mTc标记。在正常昆明小鼠右上肢接种Ehrlich腹水癌细胞，至肿瘤生长至1cm后，随机分为生理盐水处理组和环磷酰胺处理组（150mg／kg），并分别于处理后1h和24h时注射^99mTc—HYNIC—annexin Ⅴ，注射后30、60、180、360min进行双探头单光子发射计算机断层仪（SPECT）显像。图像分析采用感兴趣区（R01）技术，计算右上肢肿瘤部位与右下肢计数比值（肿瘤／下肢）。采用原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织凋亡细胞。结果在不同处理时间，生理盐水处理组的肿瘤部位仅有少量娃像剂分布。环磷酰胺处理组存处理1h后，肿瘤部位显像剂分布少量增加；24h后，肿瘤部位显像剂分布明显增加，显影清晰。环磷酰胺处胛24h组的肿瘤／下肢比值（6．27±0．24）明显高于牛理盐水24h处理组（2．36±0．18）和环磷酰胺1h处胛组（4．00±0．38）。环磷酰胺处理24h后，TUNEL染色可见大请癌细胞凋亡。结论^99mTc—HYNIC—aflnexin Ⅴ是一种可以早期监测化疗药物治疗效果的核素捌亡显像剂，在化疗药物应用24h后就可以进行有效探测，并在注射显像剂后60min即可获得清晰的图像。

母体血浆中Annexin Ⅴ、ET-1、vWF在子痫前期患者中的表达及意义

目的:研究子痫前期患者外周母体血浆中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达水平及其相关性,并探讨子痫前期发病机理。方法:采用ELISA方法检测子痫前期患者84例(轻度29例、早发重度型27例、晚发重度型28例)及同期无内外科合并症、因产科和社会因素行剖宫产健康产妇(对照组)29例母体外周血浆中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达水平,并检测其相关性。结果:1外周血中AnnexinⅤ水平在轻度组、早发重度组、晚发重度组及对照组的表达分别为(0.81±0.12)、(0.49±0.11)、(0.72±0.13)、(1.31±0.19)ng/ml,子痫前期各组与对照组差异均有统计学意义(P<0.01),早发重度组与轻度组及晚发重度组比较差异均有统计学意义(P<0.01),但轻度组与晚发重度组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2外周血中ET-1在轻度组、早发重度组、晚发重度组及对照组的表达分别为(26.74±5.33)、(17.73±6.13)、(36.16±7.66)、(42.25±8.84)ng/ml,子痫前期各组与对照组差异均有统计学意义(P<0.01),子痫前期患者各组间随病情加重ET-1水平升高差异有统计学意义(P<0.05)。3外周血中vWF在轻度组、早发重度组、晚发重度组及对照组的表达分别为(92.22±10.66)、(126.14±14.59)、(118.29±10.62)、(103.29±9.99)ng/ml,子痫前期各组vWF浓度与对照组差异均有统计学意义(P<0.01),子痫前期轻度组、早发重度组及晚发重度组两两分别比较差异有统计学意义(P<0.05)。4子痫前期各组孕妇外周血中AnnexinⅤ与ET-l的表达均呈明显负相关(P<0.01),AnnexinⅤ与vWF的表达均呈明显负相关(P<0.05),vWF与ET-l的表达均呈明显正相关(P<0.01)。结论:母体外周血浆中AnnexinⅤ、ET-1、vWF的表达可能与子痫前期发病机制有关,且3种因子相互影响,通过影响胎盘中凝血-纤溶系统及血管内皮系统参与子痫前期发生、发展的病理生理过程。