颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液膜联蛋白A2和S100钙结合蛋白A10表达水平及临床意义

目的探讨颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液膜联蛋白A2(Annexin A2)和S100钙结合蛋白A10(S100A10)表达水平及临床意义。方法选取收治的颅脑术后继发颅内感染患者120例为试验组,选取同期颅脑术后未感染的120例患者为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脑脊液中Annexin A2、S100A10水平;采用Pearson相关分析法分析Annexin A2、S100A10与各临床指标的相关性;采用Logistic回归分析法分析颅脑术后继发颅内感染的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Annexin A2、S100A10水平对颅脑术后继发颅内感染的预测价值。结果试验组的糖尿病占比、脑脊液渗漏占比、血乳酸脱氢酶(LDH)、脑脊液中Annexin A2及S100A10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。颅内感染患者脑脊液中Annexin A2与S100A10、血LDH水平呈正相关,S100A10水平与LDH水平呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,糖尿病、脑脊液渗漏、血LDH、脑脊液中Annexin A2和S100A10均是颅脑术后继发颅内感染的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,脑脊液中Annexin A2、S100A10水平单独预测及二者联合预测颅脑术后继发颅内感染的曲线下面积(AUC)分别为0.788、0.768、0.865,其中联合预测AUC大于二者单独预测(P<0.05)。结论颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液中Annexin A2、S100A10表达水平升高,是颅脑术后继发颅内感染的独立影响因素,二者联合预测价值较高。

膜联蛋白A2在恶性肿瘤中作用的研究进展

膜联蛋白A2(ANXA2)属于膜联蛋白家族成员之一,参与调控正常细胞膜运输、细胞骨架构成和细胞增殖等生物学功能。近年来的研究发现,ANXA2可以促进恶性肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移及黏附,并且影响肿瘤治疗抵抗和免疫逃逸,ANXA2在肿瘤组织中的表达水平与患者预后密切相关,有望成为预后评估的标志物。此外,已有研究在裸鼠皮下异种移植神经母细胞瘤模型中尝试靶向ANXA2基因治疗,并有效增强了肿瘤化疗药物的敏感性。尽管前期进行了大量的相关研究,但到目前为止对于ANXA2如何介导肿瘤发生、发展的具体机制仍然缺乏系统性研究。深入了解近年来ANXA2在调控肿瘤细胞上皮间质转化、细胞骨架动力学、增殖周期、代谢和免疫学等方面的研究进展,对肿瘤治疗靶点及预后标志物的研发具有重要意义。

负载膜联蛋白A2(annexin A2)的间充质干细胞来源外泌体减少M2巨噬细胞极化抑制裸鼠前列腺癌细胞生长

目的探究负载膜联蛋白A2(ANXA2)的骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体(Exo-ANXA2)对前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移以及前列腺癌移植瘤生长的影响,并研究巨噬细胞是否参与该过程。方法分离与培养BALB/c裸鼠BMSC,采用负载ANXA2的慢病毒质粒感染BMSC,并分离外泌体;加入外泌体处理THP-1巨噬细胞,ELISA检测细胞上清培养液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的水平;将外泌体处理的巨噬细胞与前列腺癌细胞共培养后,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell^(TM)小室检测细胞侵袭与迁移。通过注射PC-3人前列腺癌细胞构建前列腺癌裸鼠移植瘤模型,将建模后的裸鼠随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组裸鼠尾静脉注射1 mL Exo-ANXA2,对照组注射等量PBS,于注射后第0、3、6、9、12、15、18、21天,使用游标卡尺测量计算肿瘤体积,21 d处死裸鼠并测量肿瘤组织质量,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中抗原KI-67(ki67)和CD163表达。结果骨髓分离的细胞表面CD90和CD44呈高表达,CD34和CD45呈低表达,且成骨成脂分化能力较强,成功获得BMSC;负载ANXA2的慢病毒质粒感染后,BMSC中有较强的绿色荧光蛋白表达,并成功分离到Exo-ANXA2;经Exo-ANXA2处理后,THP-1细胞中TNF-α和IL-6的水平显著升高而IL-10和IL-13的水平显著下降;Exo-ANXA2处理巨噬细胞后,显著抑制Exo-ANXA2促进PC-3细胞增殖活性、侵袭与迁移的作用;经过给予前列腺癌移植瘤裸鼠注射Exo-ANXA2后,裸鼠在第6、9、12、15、18、21天的肿瘤组织体积显著减小,21 d时裸鼠肿瘤体质量也显著减少,此外,肿瘤组织内ki67和CD163的阳性表达率均显著降低。结论Exo-ANXA2能够抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移,并抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,M2型巨噬细胞减少。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

膜联蛋白A2质粒的构建及其在膀胱癌pumc-91细胞增殖和迁移中的作用

目的膜联蛋白A2(annexin A2,Anxa2)在多种肿瘤细胞中具有调节生物活性的作用。本研究旨在探讨Anxa2蛋白的表达与膀胱癌pumc-91细胞增殖和迁移的相关性。方法扩增ANXA2序列,插入pcDNA3.1(+)载体,制备pcDNA3.1(+)-ANXA2质粒。用脂质体lipo2000将pcDNA3.1(+)-ANXA2瞬时转染至pumc-91膀胱癌细胞中。Western blotting检测空白组、转染pcDNA3.1(+)空载的对照组和转染pcDNA3.1(+)-ANXA2质粒的实验组中Anxa2蛋白的表达。利用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测pumc-91细胞的增殖能力,transwell实验检测pumc-91细胞的迁移水平。采用单因素方差分析或重复测量的方差分析比较各组间检测数据的差异。结果PcDNA3.1(+)-ANXA2质粒构建成功,测序完全正确。Western blotting检测显示,与空白组和对照组相比,实验组Anxa2蛋白表达水平增高。CCK8实验显示实验组增殖的pumc-91细胞数量相比于空白组(P<0.001)和对照组(P=0.001)明显增多;transwell实验中实验组穿膜的pumc-91细胞数量较空白组(P=0.011)和对照组(P=0.027)也明显增多。结论Anxa2蛋白的表达上调可能在膀胱癌pumc-91细胞增殖和迁移中起重要作用。

血清ANXA2、CK18、let-7a水平联合检测在喉癌诊断中的效能

目的:分析血清膜联蛋白A2(ANXA2)、细胞角蛋白18(CK18)、let-7a水平联合检测在喉癌诊断中的效能。方法:回顾性分析2021年10月至2023年3月于该院就诊的160例喉部病变患者的临床资料,根据病理学检查结果分为恶性组(n=80)和良性组(n=80)。另选取同期本院80名健康体检者的临床资料,作为对照组。比较三组血清ANXA2、CK18、let-7a水平,比较不同临床分期与分化程度喉癌患者血清ANXA2、CK18、let-7a水平,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清ANXA2、CK18、let-7a水平单项及联合检测在喉癌诊断中的效能。结果:恶性组血清ANXA2、CK18水平均高于良性组和对照组,且良性组高于对照组;恶性组血清let-7a水平均低于良性组和对照组,且良性组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期为Ⅲ期喉癌患者血清ANXA2、CK18水平均高于Ⅰ、Ⅱ期患者,且Ⅱ期患者高于Ⅰ期患者;临床分期为Ⅲ期喉癌患者血清let-7a水平低于Ⅰ、Ⅱ期患者,且Ⅱ期患者低于Ⅰ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05);分化程度为低分化喉癌患者血清ANXA2、CK18水平均高于高分化、中分化患者,且中分化患者高于高分化患者;分化程度为低分化喉癌患者血清let-7a水平低于高分化、中分化患者,且中分化患者低于高分化患者,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清ANXA2、CK18、let-7a水平单项及联合检测诊断喉癌的曲线下面积分别为0.854、0.837、0.762、0.935,其中联合检测诊断喉癌的效能高于三者单项检测。结论:血清ANXA2、CK18、let-7a水平联合检测诊断喉癌的效能高于三者单项检测。

家兔ANXA1蛋白与猪瘟病毒E2蛋白相互作用并影响其复制的研究

本研究团队前期研究发现,猪瘟病毒(CSFV) HCLV株E2蛋白结构域Ⅰ (E2^(Domain Ⅰ))是HCLV株适应家兔的关键结构域,Domain Ⅰ中108位脯氨酸(P)和109位苏氨酸(T)是HCLV株适应家兔必需氨基酸。为进一步探究HCLV适应家兔的分子机制,本研究提取家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白分别与CSFV Shimen (SM)株E2蛋白(SM E2)、HCLV株E2蛋白突变体(HCLV E2^(P108L-T109I))及HCLV株E2蛋白(HCLV E2)共孵育,经SDS-PAGE后通过蛋白质质谱鉴定,结果却意外发现,CSFV SM E2与家兔脾脏淋巴细胞膜蛋白作用后在37 ku左右处多出一条带;质谱分析结果显示其可能为细胞膜蛋白膜联蛋白1 (ANXA1),且与CSFV SM E2蛋白之间可能存在相互作用。为了分析ANXA1在HCLV适应家兔中的作用,将CSFV SM株和HCLV株分别接种家兔,48 h和72 h后分离各组兔外周血单个核淋巴细胞(PBMC),采用RT-q PCR方法检测ANXA1基因m RNA的转录水平。结果显示,与对照组相比,家兔在接种SM株和HCLV株后,ANXA1基因m RNA转录水平均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下调,且与接种HCLV株的家兔相比,接种SM株家兔中ANXA1基因m RNA的转录水平极显著(P<0.001,72 h)或者显著(P<0.05,48 h)下调,表明接种SM株后的家兔可能通过调控ANXA1的转录水平抑制SM株的复制。将pCAGGS-Flag-ANXA1和pCAGGS-Flag分别转染HKE293T细胞,48 h后收集细胞样品,通过GST pulldown验证ANXA1与CSFV SM E2蛋白的相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为强毒实验组,将pCAGGS-Myc-HCLV E2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为弱毒实验组,48 h后采用Co-IP试验验证ANXA1与不同CSFV E2的相互作用。上述结果进一步表明,ANXA1与CSFV SM E2存在相互作用,但其与HCLV E2无相互作用;将pCAGGS-Strep-SME2+pCAGGS-Flag-ANXA1共转染HEK293T细胞作为实验组,采用激光共聚焦显微镜观察发现SM E2蛋白和ANXA1蛋白共定位于细胞浆中。将表达ANXA1的重组质粒转染ST细胞,48 h后分别接种CSFV SM株和HCLV株,采用RT-q PCR检测CSFV基因的拷贝数。结果显示,与转染pCAGGS-Flag的ST细胞相比,接种CSFV SM株的细胞中病毒基因拷贝数极显著上升(P<0.01),而接种HCLV株细胞中病毒基因拷贝数无明显变化。表明过表达ANXA1后可以促进CSFV强毒株的复制,但不影响弱毒株的复制。本研究首次证实,家兔脾脏淋巴细胞ANXA1通过与CSFV SM E2蛋白的相互作用促进CSFV的复制,为进一步研究CSFV E2蛋白的功能奠定了基础。

膜联蛋白A_2介导β_2糖蛋白Ⅰ/抗β_2糖蛋白Ⅰ复合物刺激单核细胞上调表达组织因子

目的探讨膜联蛋白A2是否介导β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)/抗β2糖蛋白Ⅰ结合于单核细胞表面,从而诱导单核细胞表达组织因子。方法利用纯化的抗磷脂综合征(APS)患者血清IgG、单克隆抗β2糖蛋白Ⅰ抗体、抗膜联蛋白A2抗体等刺激血液单核细胞及THP-1单核细胞株,通过凝血因子Ⅹa的生成量,判断细胞组织因子活性的表达;把带有膜联蛋白A2cDNA的载体转染入HEK293T细胞,然后用β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ复合物刺激,观察转染前后HEK293T细胞的组织因子表达情况;采用RNA干扰技术封闭单核细胞株THP-1膜表面的膜联蛋白A2,观察组织因子的表达情况。结果 APS患者血清IgG和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体显著增强单核细胞组织因子的表达;HEK293T细胞转染膜联蛋白A2cDNA后组织因子的mRNA和蛋白的表达量较转染前增高;采用RNA干扰降低膜联蛋白A2表达后单核细胞株THP-1的组织因子表达显著降低。结论细胞表面膜联蛋白A2介导β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ诱导单核细胞表达组织因子活性,是APS血栓形成的机制之一。

血清膜联蛋白A1、集落刺激因子2受体α水平与急性心肌梗死患者预后的关系

目的探讨急性心肌梗死患者血清膜联蛋白A1(AnxA1)、集落刺激因子2受体α(CSF2RA)的表达水平与预后的关系。方法选取2018年1月至2021年12月在荆门市中医医院接受治疗的急性心肌梗死患者141例,根据患者预后是否发生不良心血管事件,将141例急性心肌梗死患者分为预后良好组57例和预后不良组84例。采用酶联免疫吸附法检测各组血清AnxA1和CSF2RA的表达水平;采用Pearson相关性分析血清AnxA1和CSF2RA表达水平的相关性,应用Logistic回归分析急性心肌梗死患者预后的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估血清AnxA1与CSF2RA水平预测急性心肌梗死患者预后不良的价值。结果预后不良组左心室射血分数低于预后良好组,差异有统计学意义(t=4.516,P<0.01);预后不良组肌钙蛋白I高于预后良好组,差异有统计学意义(t=11.546,P<0.01)。与预后良好组相比,预后不良组血清AnxA1、CSF2RA表达水平升高,差异有统计学意义(t=9.225、8.672,P<0.01)。采用Pearson相关性分析结果显示,急性心肌梗死患者AnxA1与CSF2RA表达呈正相关(r=0.497,P<0.01)。ROC曲线结果发现,血清AnxA1与CSF2RA预测急性心肌梗死患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.897、0.887,敏感度为78.60%、76.20%,特异度为94.70%、93.00%,两者联合预测急性心肌梗死患者预后不良的AUC为0.956,高于两者单一预测(Z=2.106、1.899,P<0.01)。Logistic回归分析结果显示,AnxA1、CSF2RA高表达均是影响急性心肌梗死预后的危险因素(OR=1.546、1.723,P<0.05)。结论急性心肌梗死患者血清中AnxA1、CSF2RA的表达水平升高,与患者预后不良密切相关,且两者联合对于预测AMI患者的预后不良具有较高的临床价值。

大鼠膜联蛋白A_2真核表达载体的构建及表达

目的:克隆大鼠背根神经节膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建真核表达载体并检测其表达。方法:以RT-PCR法扩增大鼠背根神经节(DRG)细胞中膜联蛋白A2(annexin Ⅱ)的基因,构建pGMT-Anxa2克隆载体,以此为模板插入flag标签扩增Anxa2-flag序列,将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获得表达载体pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag。以PCR、双酶切及序列测定法鉴定该质粒。以脂质体法将表达载体转染到HEK293细胞中,Western印迹和细胞免疫荧光检测annexin Ⅱ蛋白表达及细胞内定位。结果:PCR扩增Anxa2-flag片段大小与预期相同。通过PCR、HindⅢ和NotⅠ双酶切及测序鉴定,证明构建出了含大鼠annexin Ⅱ基因的真核表达载体。Western印迹和细胞免疫荧光的检测表明大鼠annexin Ⅱ基因稳定表达,并可在胞膜和胞质中广泛表达。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-Anxa2-flag真核表达载体,并稳定表达蛋白,为研究annexin Ⅱ调控DRG伤害性感受传导的分子机制奠定基础。

膜联蛋白A2与胶质母细胞瘤患者预后的相关性研究

目的探讨胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)表达与患者预后的关系。方法纳入癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中临床资料完整的103例GBM进行病例-对照研究。自变量为ANXA2转录水平等临床因素,因变量为患者总生存期(overall survival,OS)。依据OS长短将入组患者分为病例组(OS<8个月)及对照组(OS≥8个月)。通过限制性立方样条分析(restricted cubic spline,RCS)、单因素和多因素logistic回归分析GBM肿瘤组织中ANXA2转录水平与患者临床预后的关系。结果单因素分析显示ANXA2 mRNA表达量(OR=4.992,P=0.000)、年龄(OR=9.320,P=0.000)、TCGA分子分型(OR=4.168,P=0.001)及O 6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O 6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)启动子状态(OR=3.875,P=0.001)与GBM患者预后相关。进一步RCS分析显示GBM患者不良预后发生风险随ANXA2转录水平升高而增加。多因素logistic回归分析显示在年龄、MGMT启动子甲基化类型、TCGA分子分型综合作用下,ANXA2转录水平与患者不良预后之间存在独立的“剂量-反应”关系(OR=38.684,P=0.000)。结论GBM肿瘤组织中ANXA2转录水平与患者不良预后风险存在独立的“剂量-反应”关系,是GBM患者的独立预后因素。

敲低膜联蛋白A2对食管鳞癌细胞恶性表型的抑制作用

目的:利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲低膜联蛋白A2(ANXA2)基因的食管鳞癌细胞,研究该基因对食管鳞癌细胞表型的影响。方法:在公共数据库中查找ANXA2基因及对照的向导RNA(gRNA),选取6个ANXA2 gRNA及1个对照gRNA,使用CRISPR/Cas9载体构建表达ANXA2 gRNA的重组质粒,转入HEK293FT细胞制备gRNA/Cas9慢病毒,将慢病毒感染食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞后,使用嘌呤霉素筛选阳性细胞并扩大培养。采用Western blot检测ANXA2蛋白及其下游MYC蛋白的表达情况,逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ANXA2 mRNA表达情况,Transwell和集落形成实验分别检测细胞迁移侵袭和集落形成能力的变化。结果:成功构建了CRISPR/Cas9质粒;Sanger测序结果表明,ANXA2基因敲低质粒及对照质粒均构建成功。与对照组比较,病毒感染细胞后,Western blot结果显示,其中两个gRNA靶点病毒感染的KYSE30细胞中ANXA2蛋白及其下游MYC蛋白水平均显著降低(P<0.05);同时RT-qPCR结果证实,上述两个靶点显著下调ANXA2的mRNA表达水平(P<0.05)。Transwell和集落形成实验结果显示,敲低ANXA2后,细胞迁移侵袭能力和集落形成能力均显著减弱(P<0.05)。结论:ANXA2基因敲低显著抑制了食管鳞癌细胞的恶性表型,为进一步研究ANXA2促进食管鳞癌细胞恶性表型的作用机制提供了细胞模型和实验基础。

miR-1-3p调控ANXA2表达对高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞新生血管生成的影响

目的 探讨微小RNA-1-3p(miR-1-3p)/膜联蛋白A2(ANXA2)分子轴在高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)新生血管生成过程中的作用机制。方法 体外培养HRMECs并采用高糖(HG)处理细胞建立细胞损伤模型。HRMECs分组处理:Con组(含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养)、HG组(25 mmol·L^(-1)D-葡萄糖培养)、HG+miR-NC组(转染miR-NC)、HG+miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、HG+sh-NC组(转染sh-NC)、HG+sh-ANXA2组(转染sh-ANXA2)、HG+miR-1-3p+pcDNA组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA)、HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组(转染miR-1-3p mimics+pcDNA-ANXA2)。转染48 h后收集细胞,采用25 mmol·L^(-1)的D-葡萄糖培养基培养HRMECs 24 h。采用MTT、Transwell小室实验分别检测细胞活力、迁移细胞数。管腔形成实验检测管腔形成数。双荧光素酶报告实验检测miR-1-3p与ANXA2的靶向关系。Western blot检测VEGF、MMP-2蛋白水平。结果 与Con组比较,HG组miR-1-3p表达水平降低,ANXA2 mRNA及蛋白水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与Con组比较,HG组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-1-3p组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+sh-NC组比较,HG+sh-ANXA2组细胞活力降低,迁移细胞数、管腔形成数减少,VEGF、MMP-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与HG+miR-1-3p+pcDNA组比较,HG+miR-1-3p+pcDNA-ANXA2组细胞活力升高,迁移细胞数、管腔形成数增多,VEGF、MMP-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 miR-1-3p过表达可通过靶向调控ANXA2表达抑制HRMECs的增殖、迁移及新生血管生成。

膜联蛋白A2在病毒感染中的作用研究进展

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是一类由Ca 2+调控的具有磷脂结合特性的膜联蛋白,与多种细胞生理过程和临床疾病相关;越来越多的研究证实ANXA2在多种病毒复制周期的不同阶段发挥着重要作用。对ANXA2在病毒感染过程中的作用进行综述,为阐明ANXA2与病毒感染之间的相互作用提供参考。

膜联蛋白A2在肿瘤生长调节与细胞骨架活动中的作用

膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)是一种钙/磷脂结合的多功能蛋白,参与包括信号转导、DNA合成、细胞增殖和凋亡、黏附、迁移等多种生物学行为。近来大量研究表明,ANXA2在多种肿瘤中表达失调,且其表达水平与肿瘤的发生、侵润、转移、临床分期和预后密切相关。本文主要就ANXA2的生物学活性调节及其与肿瘤生长和细胞骨架活动的关系进行综述。

胃癌患者癌组织膜联蛋白A2的表达与血清膜联蛋白A2及癌胚抗原水平测定

目的:检测胃癌患者癌组织中膜联蛋白A2(ANXA2)的表达和血清ANXA2及癌胚抗原(CEA)水平,并分析其临床意义。方法:选取胃癌患者65例(淋巴结阴性16例、淋巴结阳性不伴远处转移40例、淋巴结阳性伴远处转移9例)为观察组,同时选取50名健康体检者为对照组。采用免疫组化SP法检测观察组患者癌及癌旁组织中ANXA2的表达。取观察组患者术前1 d、术后1个月及对照组血清,采用ELISA法检测ANXA2水平,采用电化学发光法检测血清CEA水平。结果:观察组患者癌组织中ANXA2的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.001);淋巴结阳性不伴远处转移者、淋巴结阳性伴远处转移者癌组织中ANXA2的阳性表达率高于淋巴结阴性者(P<0.017)。观察组术前血清ANXA2、CEA水平高于对照组,观察组中淋巴结阳性伴远处转移者血清CEA水平最高(P<0.05);术后1个月观察组血清ANXA2、CEA水平较术前降低,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。观察组癌组织中ANXA2的阳性表达率与术前血清ANXA2水平呈正相关,术前血清ANXA2与CEA水平也呈正相关(rS=0.407和0.537,P均<0.001)。结论:联合检测血清ANXA2与CEA对胃癌的病情评估有重要意义。

片仔癀调控膜联蛋白A1/VEGF通路对人肝癌细胞系HepG2作用的影响

目的 研究片仔癀对人肝癌细胞系 HepG2 作用的影响,并探讨其作用机制。方法 培养人肝癌细胞HepG2,将细胞分为空白对照组(Normal)、片仔癀不同浓度剂量组(浓度分别为1、10、100 mg·L -1 ),药物作用24 h后,收集细胞进行以下相关检测:MTT比色法检测不同浓度片仔癀对HepG2细胞活性的影响;集落形成实验观察细胞存活能力;Western blot法检测凋亡相关指标Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达,膜联蛋白A1/VEGF通路相关指标(ANXA1、VEGF、VEGFR、NF-κB p50);结果 与空白对照组比较,不同浓度片仔癀能够抑制体外人肝癌细胞株HepG2细胞活性,抑制细胞集落形成,促进HepG2细胞凋亡蛋白表达,促进细胞ANXA1蛋白表达,抑制VEGF、VEGFR表达,及抑制核蛋白NF-κBp50表达;结论 片仔癀能够抑制体外人肝癌细胞株HepG2活性,其主要作用机制与促进HepG2细胞凋亡蛋白,促进细胞ANXA1蛋白,抑制VEGF/VEGF受体,及NF-κB信号通路相关。

补肾活血方对抗心磷脂抗体(+)复发性流产患者蜕膜及外周血膜联蛋白A2和Toll样受体4的影响研究

背景复发性流产(RSA)是妊娠常见疾病之一,抗心磷脂抗体(ACA)与该病的发生密切相关。前期研究发现ACA(+)RSA者蜕膜中Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路呈活化状态,提示该通路及通路中因子的变化可能是ACA(+)RSA发生的重要机制,故对该通路及其相关因子的干预可能会对ACA(+)RSA的妊娠结局产生一定影响。由于ACA(+)RSA者具有血栓形成倾向,这与中医肾虚血瘀证型相一致,故治以补肾活血法,根据该治法拟定的补肾活血方也在长期、大量临床应用中取得了良好的效果。目的观察补肾活血方对ACA(+)RSA患者蜕膜及外周血中膜联蛋白A2(ANXA2)、TLR4表达情况,进而阐述补肾活血方在ACA(+)RSA患者保胎治疗中的疗效及作用机制。方法选取2015年3月—2016年3月在黑龙江中医药大学附属第一医院门诊及住院部治疗的符合纳入标准的ACA(+)RSA现妊娠失败需行清宫术患者16例,在黑龙江中医药大学附属第一医院门诊行正常人工流产者15例,共收集蜕膜样本31例:ACA(+)RSA者蜕膜为试验组1(n=16)、正常人工流产者蜕膜为对照组1(n=15),其中试验组1中1例因流产组织发现染色体异常故予以排除。选取2015年3月—2016年3月在黑龙江中医药大学附属第一医院门诊及住院部治疗的符合研究标准的要求行保胎治疗的ACA(+)RSA患者11例(试验组2),在黑龙江中医药大学附属第一医院门诊行正常孕检者13例(对照组2),收集其血清样本,其中试验组2中1例自然流产,对照组2中3例自动退出,未计入统计数据。采用RT-qPCR法检测对照组1和试验组1蜕膜中ANXA2mRNA、TLR4 mRNA水平。试验组2给予补肾活血方,对照组2不给予干预,于治疗前和治疗后分别采静脉血,采用ELISA法检测对照组2和试验组2血清孕酮、β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、ANXA2、TLR4水平。结果对照组1蜕膜组织中ANXA2 mRNA水平高于试验组1,TLR4 mRNA水平低于试验组1(P<0.05)。治疗前对照组2和试验组2血清孕酮、β-HCG、ANXA2、TLR4水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后对照组2和试验组2血清孕酮、β-HCG、ANXA2、TLR4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组2治疗后血清孕酮、β-HCG、ANXA2水平高于治疗前,血清TLR4水平低于治疗前(P<0.05)。结论 ACA(+)RSA的发生可能与ANXA2低表达、TLR4高表达相关,补肾活血方可以通过上调ANXA2水平、下调TLR4水平改善炎性环境,进而改善妊娠结局。

膜联蛋白A2在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:检测膜联蛋白(annexin A2,ANXA2)在子宫内膜癌中的表达情况,探讨ANXA2表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测76例子宫内膜癌、27例非典型增生子宫内膜及16例正常子宫内膜中ANXA2的表达情况,并分析其与子宫内膜癌临床病理参数及预后的关系。结果:ANXA2在子宫内膜癌组(96.1%)和非典型增生组(96.3%)的阳性率明显高于正常子宫内膜组(62.5%)(P均<0.05)。ANXA2表达随着FIGO分期增加、分化程度减低而逐渐增加(P<0.05),ER、PR阴性组ANXA2阳性率(均为100.0%)明显高于阳性组(分别为87.5%,88.0%)(P均<0.05),而淋巴结转移阳性组ANXA2高表达率(93.8%)明显高于淋巴结转移阴性组(60.0%)(P<0.05)。ANXA2低表达组子宫内膜癌患者预后更佳(P<0.05)。结论:ANXA2在子宫内膜癌组织中的表达明显增高,ANXA2可监测子宫内膜癌患者预后。

敲低膜联蛋白A7对人肝癌HepG2细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨敲低膜联蛋白A7表达对人肝癌细胞系Hep G2细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法将Hep G2细胞接种于6孔板,分为3组:siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,其中干扰组只转染靶向膜联蛋白A7的siRNA,阴性对照组只转染阴性对照siRNA,空白对照组只加转染试剂。通过Western blotting鉴定膜联蛋白A7在转染后48h可被最大程度的抑制,于是在转染后48h采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,通过免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测Bcl-2和Bax蛋白及mRNA的表达。结果与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),Bcl-2蛋白和mRNA的表达均显著降低(P<0.05),而Bax蛋白和mRNA均未发生显著变化(P>0.05)。结论敲低膜联蛋白A7可促进Hep G2细胞的凋亡,降低Bcl-2和Bax的比值。