膜联蛋白A4在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的观察膜联蛋白A4(Annexin A4)在不同肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达情况,探讨其临床病理意义。方法先应用RT-PCR验证ANX A4在不同类型肝组织中mRNA的表达,再应用免疫组织化学方法检测在15例正常肝组织、15例乙肝后肝硬化组织和63例不同表型肝癌组织标本中的表达,探讨其差异表达与临床病理资料之间的联系及其意义。结果(1)ANX A4 mRNA表达水平在肝硬化及肝癌组织中均比正常肝组织上调(P<0.05),但肝硬化组与肝癌组差异无统计学意义(P>0.05);(2)ANX A4蛋白阳性表达率正常肝组织为20%,乙肝后肝硬化组织为26.67%;在63例HCC中阳性率为49.21%,癌旁组织为61.90%,其中小肝癌阳性率为50.00%,大肝癌为64.29%,多发癌为28.57%,相应癌旁组织阳性率分别为50.00%、64.29%、66.67%。随着肝细胞的恶性转化并进展,ANX A4蛋白呈逐渐上调趋势,但当肿瘤出现侵袭转移时反而下调。与临床病理指标的相关性研究表明Annexin A4与HCC进展及侵袭相关。结论(1)从正常肝→肝硬化→肝癌组织,Annexin A4的mRNA表达水平逐渐上调;(2)ANXA4蛋白在HCC组织中的表达明显失调,其变化可能与HCC进展及侵袭相关。

膜联蛋白A4对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力及黏附相关基因表达的影响

目的探讨人膜联蛋白A4(AnnexinA4,ANXA4)对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力的影响及其相关机制。方法化学合成针对ANXA4序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌细胞株MHCC97H;RT-PCR和western blot检测RNA干扰后ANXA4 mRNA和蛋白质的表达水平;黏附实验检测ANXA4表达下降对细胞黏附能力的影响;荧光定量RT-PCR检测RNA干扰后黏附相关基因表达的变化。结果荧光定量RT-PCR及western blot结果表明,经siRNA干扰后,ANXA4 mRNA和蛋白质表达水平明显降低;细胞黏附实验结果显示,与空白对照组的0.293±0.019和Mock组的0.305±0.018相比,实验组为0.234±0.013,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,实验组ITGA5、ITGB1、E-cadherin mRNA表达水平下调,ICAM1、CD44、OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 ANXA4可能通过调节黏附相关基因的表达水平影响细胞的黏附能力,参与肝癌的发生和发展进程。

膜联蛋白A4与妇科肿瘤关系的研究进展

膜联蛋白A4(Anxa4)是膜联蛋白超家族中的重要成员之一,介导细胞凋亡、分化,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移、血管发生和化疗耐药等。近年多项研究表明Anxa4在不同类型的卵巢癌及子宫内膜癌等肿瘤中差异表达:相对于化疗敏感的卵巢浆液性癌,化疗抗拒(chemoresistant)的卵巢透明细胞癌高表达Anxa4,恶性程度较高的子宫内膜浆液性癌相对于子宫内膜样腺癌则高表达Anxa4,但相对于母系卵巢浆液性腺癌细胞系,铂类抗拒的子细胞系低表达Anxa4,Anxa4高表达与宫颈癌细胞系He La细胞抗拒化疗药物所诱导的凋亡有关。而Anxa4与上述肿瘤化疗敏感性相关的分子机制涉及钙离子信号等通路调节、化疗药物转运等相关的"非基因转录效应",还有与核因子κB(NF-κB)信号通路相关的"基因转录效应"。就Anxa4与妇科肿瘤间的关系进行综述,探寻分子靶向Anxa4治疗肿瘤的研究依据。

糖心康对糖尿病大鼠心肌组织基因膜联蛋白A4 mRNA表达的影响

目的:比较糖尿病性心肌病大鼠和中药复方糖心康治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异,并用Evegreen实时荧光RT-PCR技术定量检测膜联蛋白A4(annexin A4)在各组大鼠心肌组织的表达水平。方法:(1)差异表达基因的筛选;(2)荧光定量RT-PCR的检测。结果:本文仅对筛选出差异表达基因谱中的annexin A4 mRNA进行报告。糖尿病性心肌病模型组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达下调,中药复方糖心康治疗组心肌组织基因annexin A4 mRNA表达上调。结论:annexin A4 mRNA在糖尿病状态下心肌组织也有表达且表达下调,而中药复方糖心康可使其上调,这也是中药复方糖心康对糖尿病性心肌组织损伤具有保护作用的机制之一。

干预膜联蛋白A4表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨干预膜联蛋白(ANX) A4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、黏附、剥脱和侵袭的影响及机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测结直肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达情况。将HCT116细胞分为Control组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和ANXA4组(转染si RNA-ANXA4),脂质体lipofectamineTM2000转染HCT116细胞,RT-PCR检测各组细胞中ANXA4 m RNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCT116细胞增殖能力,黏附实验、剥脱实验和侵袭实验分别检测HCT116细胞的黏附能力、剥脱能力和侵袭能力,Western印迹检测ANXA4、埃兹蛋白(Ezrin)、骨桥蛋白(OPN)和细胞表面黏附分子(CD44v6)蛋白的表达。结果 HCT116细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达水平均显著低于NCM460细胞;与Control组相比,干扰ANXA4表达后,HCT116细胞的增殖能力受到抑制,同时黏附能力、剥脱能力和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P<0. 05); ANXA4组细胞中ANXA4 m RNA表达水平及ANXA4、Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达水平较Control组均显著减弱,差异有统计学意义(P<0. 05);而NC组与Control组各指标差异无统计学意义(P>0. 05)。结论干预ANXA4表达能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、黏附、剥脱和侵袭能力,其分子机制可能与下调Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达有关。

膜联蛋白A4表达与卵巢浆液性囊腺癌化疗耐药性相关

目的:了解膜联蛋白A4(Annexin A4)在不同卵巢组织中的表达及其与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理因素之间的关系,明确Annexin A4表达与卵巢浆液性囊腺癌患者化疗敏感性是否有关。方法:通过免疫组化SP法检测58例卵巢浆液性囊腺癌组织和30例良性卵巢肿瘤中Annexin A4表达水平,对卵巢浆液性囊腺癌病人进行随访,了解其化疗敏感性,进行统计分析。结果:Annexin A4在卵巢浆液性囊腺癌组织中(74.1%)表达明显高于良性卵巢肿瘤(26.7%)(P<0.05),且其表达在有无淋巴结转移及有无绝经的卵巢浆液性囊腺癌患者中无显著性差异(P>0.05),而与患者组织分化程度、手术病理分期有关(P<0.05)。Annexin A4蛋白在化疗耐药组(92.0%)的表达明显高于化疗敏感组(60.6%)(P<0.05)。结论:Annexin A4在卵巢浆液性乳头状囊腺癌的发生发展中可能起重要作用,且与患者化疗耐药性有关,有望成为预测化疗敏感性的生物学指标。

膜联蛋白A4在甲状腺乳头状癌组织的表达及意义

目的探讨膜联蛋白A4（Annexin A4）蛋白及mRNA在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学与反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测78例PTC组织、35例结节性甲状腺肿及20例癌旁组织中Annexin A4蛋白和mRNA表达水平，并与临床病理特征进行相关分析。结果Annexin A4蛋白在PTC中的表达明显高于结节性甲状腺肿及癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。Annexin A4 mRNA在PTC中的相对表达量（0．641±0．154）明显高于结节性甲状腺肿（0．266±0．082）及癌旁组织（0．188±0．034），差异有统计学意义（P〈0．05）。Annexin A4蛋白及mRNA表达明显相关，且均与PTC的肿瘤直径、病理学T、N分期明显相关（P〈0．05）。结论Annexin A4的异常表达可能参与了PTC的发生、发展及淋巴结转移过程。

ANXA2和ANXA4在胃腺癌中的表达及临床意义

目的:研究膜联蛋白A2(AnnexinA2,ANXA2)、膜联蛋白A4(AnnexinA4,ANXA4)在人体胃腺癌(gastric adenocarcinoma cells,GAC)的表达,探讨其表达与GAC生物学行为的关系及两种蛋白的相关性.方法:免疫组织化学SP法检测组织芯片中75对配对的GAC和其相应癌旁组织ANXA2和ANXA4的表达.结果:在GAC和癌旁组织中ANXA2、ANXA4的表达分别为:33.1%(25)vs1.3%(1)、68.0%(51)vs25.5%(13),二者在GAC的表达显著高于癌旁组织(x2=24.448,P=0.000;x2=39.353,P=0.000);ANXA2和ANXA4在GAC表达呈正相关(r=0.335,P=0.003);两种蛋白的表达与GAC的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和分化程度有关(P<0.05),与年龄、性别和远处转移无关(P>0.05);肿瘤大小与ANXA2表达有关(P<0.01),与ANXA4表达无关(P>0.05).结论:ANXA2和ANXA4的表达上调可能共同参与了GAC的发生、发展、浸润和转移,可作为临床预测GAC预后的标志物和治疗靶点.

金黄地鼠胰腺癌模型差异蛋白质组学研究

目的对金黄地鼠胰腺癌模型进行差异蛋白质组学研究,探讨胰腺癌的发病机制并寻找胰腺癌相关生物学标志物。方法提取10例金黄地鼠胰腺癌模型癌组织和癌旁组织总蛋白,使用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)进行蛋白分离、PDQuest7.0软件分析获得差异蛋白质,进行质谱(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定。结果获得12种差异蛋白质:其中5种蛋白质,包括肌动蛋白、α-烯醇(化)酶、膜联蛋白A4(Annexin A4)、角蛋白8、胸腺嘧啶核苷激酶在胰腺癌组织中表达明显上调(>4倍);另外7种蛋白质,包括蛋白酶体α1亚单位、羧肽酶B1、核糖体蛋白P1、磷脂酶A2、铁蛋白、连接蛋白3、脑磷脂结合蛋白在胰腺癌旁组织中表达明显上调(>4倍)。结论 Annexin A4、连接蛋白3、α-烯醇(化)酶、羧肽酶B1、核糖体蛋白P1等可能与肿瘤细胞的浸润和转移有关;核糖体蛋白P1、蛋白酶体α1亚单位与肿瘤细胞的蛋白质生物合成及降解异常有关;脑磷脂结合蛋白可能与肿瘤细胞膜的构建和重塑有关;Annexin A4与蛋白酶体α1亚单位可能是胰腺癌诊断与治疗相关的生物学标记物。

草鱼Annexin A4基因克隆、表达特性及进化

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)Annexin A4基因克隆于肝肾cDNA文库,该cDNA全长为1307bp,其中,5′非编码区为104bp,3′非编码区为237bp,开放阅读框为966bp,编码321个氨基酸。草鱼Annexin A4编码的蛋白质N端由15个氨基酸残基组成,C端具有4个重复序列,每个重复序列都有一个Ⅱ型钙结合位点,在第4个钙结合位点中包含一个"KGD"序列。Annexin A4在草鱼肝、肾、脾、心、鳃、肠中的表达量均较高,而肌肉和脑中不表达;PolyⅠ:C诱导后,其表达均有所下调。系统发育树显示,草鱼Annexin A4与斑马鱼(Danio rerio)的进化距离最近。适应性进化分析没有检测到正选择位点,表明Annexin A4非常保守,受到强烈的功能约束。

应用LCM和蛋白质组学技术筛选肺腺癌的差异表达蛋白质

为筛选肺腺癌(lung adenocarcinoma,AdC)发病相关蛋白质,首先采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从AdC组织和正常支气管上皮(normal bronchial epithelium,NBE)组织中切割并收集AdC细胞和NBE细胞,再应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离经LCM收集的细胞蛋白质,通过PDQuest软件分析差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达蛋白质,组织芯片免疫组化方法检测差异蛋白质膜联蛋白A4(annexin A4)在30例AdC组织、配对的癌旁组织和淋巴结转移癌组织中的表达水平。研究结果显示,通过蛋白质组学方法建立了LCM收集的AdC和NBE细胞的2-DE图谱,质谱鉴定得到了33个差异表达蛋白质,其中21个蛋白质在AdC细胞中表达上调,12个蛋白质在AdC细胞中表达下调。组织芯片免疫组化结果显示,与癌旁肺组织相比,annexin A4在AdC组织中的表达水平显著上调,且在AdC淋巴结转移癌组织中的表达明显高于其原发癌组织。上述结果提示annexin A4与AdC的发病及淋巴结转移相关,有望成为诊断AdC及预测AdC转移的分子标志物。

ANXA4和ANXA6在肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的探讨膜联蛋白A4(ANXA4)和膜联蛋白A6(ANXA6)在肝门部胆管癌(HC)组织中的表达及两者与HC临床病理特征和预后的关系。方法采用组织芯片与免疫组织化学技术检测2005年至2007年49例HC组织及10例癌旁组织中ANXA4和ANXA6的表达情况,分析两者表达与HC临床病理特征及预后的关系。结果 ANXA4和ANXA6在HC组织中的阳性表达率分别为63.3%(31/49)和69.4%(34/49),明显高于癌旁组织的20.0%(2/10)和30.0%(3/10),差异均有统计学意义(P<0.05)。ANXA4蛋白表达与淋巴结转移有关(P<0.05),ANXA6表达则与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。ANXA4阳性表达者的中位总生存时间(OS)和无进展生存时间(PFS)分别为14个月和12个月,明显短于阴性表达者的46个月和39个月(P<0.05);ANXA6阳性表达者的中位OS和PFS分别为14个月和12个月,明显短于阴性表达者的42个月和39个月(P<0.05)。Cox多因素分析显示,ANXA6、浸润深度是影响OS的独立因素,浸润深度是影响PFS的独立因素。结论 ANXA4和ANXA6与HC的发生、发展有关,且ANXA6是潜在的评估预后的肿瘤标志物。

Annexin A4与OPN在卵巢上皮性癌中表达及其相关性分析

目的:探讨膜联蛋白A4(AnxA4)与骨桥蛋白(OPN)在卵巢上皮性癌中的表达及其相关性分析。方法:选取卵巢上皮性癌组织123例、卵巢上皮性交界肿瘤组织40例、卵巢上皮良性肿瘤组织40例及正常卵巢组织40例,应用免疫组化SP法分别对卵巢病变及正常组织中Anx A4和OPN的表达情况进行检测和分析,并观察二者的表达与临床病理特征、患者生存率之间的相关性。结果:卵巢上皮性癌组织中Anx A4和OPN的阳性表达率明显高于卵巢交界性肿瘤及良性肿瘤(P<0.05),随着临床分期增高而增高,随着组织分化程度的增高而降低,晚期、低分化明显高于早期、高分化(P<0.05);OPN的阳性表达率与淋巴结转移有关,淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线显示,卵巢癌组织中Anx A4、OPN的表达与患者的生存率均存在相关性(P<0.05);AnxA4和OPN在卵巢癌中的表达呈正相关性(r=0.338,P<0.05)。结论:Anxa4和OPN在卵巢上皮性癌中高表达,与卵巢癌发生发展关系密切;二者的协同作用可能参与了卵巢癌的发生发展,检测二者的表达对卵巢癌患者诊断、判断卵巢肿瘤恶性程度及预后具有重要的指导意义。

人类膜联蛋白Ⅳ在肝细胞性肝癌中的表达及其意义

目的研究人类膜联蛋白Ⅳ（ANXA4）在不同表型肝癌组织中的表达情况，探讨其临床病理意义。方法先应用半定量RT-PCR技术验证ANXA4在不同类型肝组织中的基因表达，再应用免疫组化方法检测其在正常肝组织、乙型病毒性肝炎（乙肝）后肝硬化组织和不同表型肝癌组织标本中的表达，探讨其表达与临床病理资料之间的联系及其意义。结果半定量RT-PCR扩增出长为300bp的ANXA4片段，相对于520bp的内参照β-actin片段计算，灰度的平均比值在正常肝组织、乙肝后肝硬化组织、肝癌组织中分别为0．3410±0．0161、0．8700±0．0341和0．9323±0．0142，两两比较差异均有统计学意义。免疫组化研究表明：ANXA4在正常肝组织中总阳性率为24．0％，在乙肝后肝硬化组织中总阳性率为28．0％；在肝癌组织中总阳性率为49.4％，相应癌旁组织中总阳性率为62．4％，其中小肝癌组织中总阳性率为53．8％，大肝癌组织中总阳性率为64．5％，多发癌组织中总阳性率为28．6％，相应癌旁组织中总阳性率分别为53．8％、64．5％、67．9％。统计学分析表明：随着肝细胞的恶性转化并进展，ANXA4呈逐渐上调趋势，但当肿瘤出现侵袭性转移时反而下调。与临床病理指标的相关性研究表明ANXA4与肝癌进展及侵袭相关。结论从正常肝→肝硬化→肝癌组织，ANXA4的mRNA表达水平逐渐上调，与组织学蛋白表达水平变化相一致，提示与肝癌发生有关；ANXA4在肝癌组织中的表达明显失调，其变化可能与肝癌进展及侵袭相关。

Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探

膜联蛋白(annexin)是一类进化保守的多基因家族蛋白,可与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,由于PS与许多重要疾病密切相关,具有作为药物发现新靶点的潜力,使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景。Annexin A4(以下称A4)是膜联蛋白家族成员之一,参与多项细胞功能,如胞吐作用和凝血反应,所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关。目前对A4的功能尚不完全了解,获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础。为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高,且较为复杂等问题,本文通过原核系统重组表达A4,以获取大量可溶性蛋白,探究其与PS的结合能力,为后续研究奠定基础。利用分子生物学的手段构建融合表达质粒p ET28a-annexin A4-EGFP,大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP(以下称A4-EGFP)融合蛋白的纯化方法,同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力。通过亲和层析纯化获得纯度为80%的A4-EGFP;而选用膜吸附纯化方式,最终获得了纯度达90%的蛋白。流式细胞仪检测结果显示:A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞,其与PS亲和力为79.58±11.68nmol·L^(-1),与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级。本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达,建立了简易、高效的分离纯化方法,获得了产率高达75.2 mg·L^(-1)的A4-EGFP,为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础。

内异症不孕患者种植窗期子宫内膜组织中差异蛋白的表达及其与子宫内膜容受性的关系

目的探讨内异症不孕患者种植窗期子宫内膜组织中差异蛋白的表达及其与子宫内膜容受性的关系。方法采用荧光差异凝胶电泳（2D—DIGE）和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF—MS）技术，对因输卯管因素不孕接受腹腔镜治疗的非内异症患者（10例，对照组）和内异症（术后病理检查证实）不孕患者（10例，内异症组）种植窗期（排卵日后第6天）在位子宫内膜的差异表达蛋白进行筛选并鉴定；应用蛋白印迹法检测两组患者子宫内膜组织中表达差异最明显的膜联蛋白A4蛋白的表达变化，探讨膜联蛋白A4与子宫内膜容受性的关系。结果两组患者种植窗期子宫内膜有意义（上调或下调150％）的差异表达蛋白共7个，其中等电点为5．84，相对分子质量为36100的蛋白在内异症组患者种植窗期的表达量较对照组减少348％，为差异表达最明显的蛋白；经鉴定，此蛋白斑点肽指纹图谱为膜联蛋白A4，其蛋白相对表达量内异症组为7．2±0．9，对照组为17．8±2．6，两组比较，差异有统计学意义（t=7．654，P=0．002）。结论内异症不孕患者种植窗期子宫内膜存在多种差异表达蛋白，其中膜联蛋白A4蛋白表达量下调最显著，可能与子宫内膜对胚胎的容受性下降有关。