成束蛋白和膜联蛋白I在食管鳞状细胞癌癌前病变中的表达

背景与目的:研究食管鳞状细胞癌癌变早期异常改变的蛋白质以发现与食管癌早期病变相关的特征性标志分子。探讨了成束蛋白和膜联蛋白I在食管癌癌前病变中的表达情况。方法:应用免疫组化方法分析食管癌高发现场癌前病变样本中成束蛋白和膜联蛋白I的表达水平,用χ2检验对比成束蛋白和膜联蛋白I在不同程度癌前病变和食管癌中的表达差异。其中包括,食管鳞状细胞癌癌前病变54例、正常食管上皮8例和中晚期食管癌9例成束蛋白的表达水平;以及食管鳞状细胞癌前病变52例、正常食管上皮11例和中晚期食管癌7例的膜联蛋白I表达水平。结果:与正常食管鳞状上皮相比,成束蛋白在食管癌及其癌前病变中表达增强,其表达阳性率为低度癌前病变(轻度和中度不典型增生)85.7%(24/28)、高度癌前病变(重度不典型增生和原位癌)84.6%(22/26)和中晚期食管癌88.9%(8/9)。然而,膜联蛋白I在食管癌及其癌前病变中表达降低或丢失,其表达阳性率分别为低度癌前病变14.3%(4/28)、高度癌前病变8.3%(2/24)和中晚期食管癌0%(0/7)。与正常食管上皮相比,成束蛋白和膜联蛋白I在食管低度癌前病变中表达程度的异常均具有显著意义,P值分别为0.003和0.000。结论:成束蛋白异常增强和膜联蛋白I的丢失与食管癌癌前病变相关。

颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液膜联蛋白A2和S100钙结合蛋白A10表达水平及临床意义

目的探讨颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液膜联蛋白A2(Annexin A2)和S100钙结合蛋白A10(S100A10)表达水平及临床意义。方法选取收治的颅脑术后继发颅内感染患者120例为试验组,选取同期颅脑术后未感染的120例患者为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测脑脊液中Annexin A2、S100A10水平;采用Pearson相关分析法分析Annexin A2、S100A10与各临床指标的相关性;采用Logistic回归分析法分析颅脑术后继发颅内感染的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Annexin A2、S100A10水平对颅脑术后继发颅内感染的预测价值。结果试验组的糖尿病占比、脑脊液渗漏占比、血乳酸脱氢酶(LDH)、脑脊液中Annexin A2及S100A10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。颅内感染患者脑脊液中Annexin A2与S100A10、血LDH水平呈正相关,S100A10水平与LDH水平呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,糖尿病、脑脊液渗漏、血LDH、脑脊液中Annexin A2和S100A10均是颅脑术后继发颅内感染的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,脑脊液中Annexin A2、S100A10水平单独预测及二者联合预测颅脑术后继发颅内感染的曲线下面积(AUC)分别为0.788、0.768、0.865,其中联合预测AUC大于二者单独预测(P<0.05)。结论颅脑术后继发颅内感染患者脑脊液中Annexin A2、S100A10表达水平升高,是颅脑术后继发颅内感染的独立影响因素,二者联合预测价值较高。

细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的原核表达和分泌特性分析

旨在探讨细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的反应原性及其在中间宿主组织中的分泌特性,为进一步研究细粒棘球绦虫膜联蛋白与中间宿主的相互作用奠定基础。作者提取细粒棘球蚴原头蚴的总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增获得EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25基因全长编码序列,使用同源重组法构建pET32a-EgANXB5、pET32a-EgANXB15和pET32a-EgANXB25质粒并进行重组蛋白的原核表达,应用蛋白免疫印迹对上述重组蛋白进行鉴定,并采用免疫荧光染色试验分析EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25在中间宿主组织中的分泌特性。结果显示:本研究成功克隆并表达出重组EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25,并更正了EgANXB25的CDS序列(GenBank:OR245515.1)。蛋白免疫印迹结果显示,这3种蛋白均能够被感染细粒棘球绦虫的犬阳性血清和感染细粒棘球蚴的小鼠阳性血清所识别。同时,免疫荧光染色结果显示,在细粒棘球蚴包囊附近的肝实质组织中可以检测到EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25的阳性信号。EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25具有良好的反应原性,同时它们具有分泌进入包囊周围肝实质组织中的潜能,可能进一步参与细粒棘球蚴与宿主的相互作用。

外源性重组膜联蛋白A6对小鼠离心运动后骨骼肌早期质膜损伤修复的影响

目的:探究外源性重组人源膜联蛋白A6(recombinant human Annexin A6,rhANX A6)干预对离心运动损伤模型小鼠骨骼肌早期质膜损伤的影响及其代谢特点。方法:将56只8周龄C57雄性小鼠随机分为安静对照组(C)、运动注射磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)组(EP)和运动注射rhANX A6组(ER),其中运动组根据运动后不同取材时间点分为EP2、EP6、EP12和ER2、ER6、ER12,每组各8只。运动前2h根据小鼠体重对EP组和ER组分别腹腔注射1倍浓度PBS缓冲液和rhANX A6(0.8mg/kg)。运用ELISA检测各组小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、膜联蛋白A6(Annexin A6,ANX A6)及骨骼肌中ANX A6的含量,运用伊文思蓝染色(Evans blue dye,EBD)观察各组小鼠骨骼肌质膜的损伤情况。结果:(1)EP组各时相、ER12h血清CK活力值显著高于C组(P<0.01);同一时间点对比,EP组各时相均显著高于ER组(P<0.05)。(2)EP组及ER组各时相EBD阳性区域平均荧光强度均显著高于C组(P<0.01);EP组各时相均显著高于ER组(P<0.01)。(3)ER组各时相及EP6h、EP12h血清ANX A6含量显著高于C组(P<0.01);12h时相ER组显著高于EP组(P<0.05)。(4)ER组及EP组各时相骨骼肌ANX A6显著高于C组(P<0.05);ER组各时相均显著高于EP组(P<0.05)。结论:小鼠离心运动前2h注射外源性rhANX A6可显著改善运动后骨骼肌早期质膜损伤,推测rhANX A6直接参与了离心运动诱导的骨骼肌早期质膜损伤修复。

miRNA-29b及膜联蛋白A2在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 探讨miRNA-29b(miR-29b)及膜联蛋白A2(ANXA2)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达及其与预后的关系。方法 收集72例EC(EC组)、40例子宫内膜上皮瘤样病变(EIN组)和30例子宫良性疾病(对照组)患者的子宫内膜组织,检测各组miR-29b和ANXA2的表达水平,采用Pearson相关分析探索二者的相关性。根据miR-29b及ANXA2表达的中位值,将EC患者分为miR-29b低表达组、miR-29b高表达组和ANXA2低表达组、ANXA2高表达组,采用χ^(2)检验分析不同分组间临床病理特征的差别,采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析其与术后总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的关系;双荧光素酶报告基因实验验证miR-29b与ANXA2的靶向关系。结果 与对照组和EIN组比较,EC组子宫内膜组织中miR-29b的表达水平明显降低,ANXA2的表达水平明显升高(P<0.05);miR-29b与ANXA2表达呈负相关(r=-0.321,P<0.05)。高miR-29b组患者的OS和PFS高于低miR-29b组(P<0.05),而高ANXA2组患者的OS和PFS低于低ANXA2组(P<0.05);miR-29b高表达是EC患者OS的保护因素(HR:0.177,95%CI:0.064~0.492,P<0.05),而ANXA2高表达是EC患者PFS的危险因素(HR:2.281,95%CI:1.139~4.567,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实ANXA2是miR-29b的靶基因。结论 miR-29b可能通过靶向负调控ANXA2的表达参与EC的进展,二者均可作为EC患者潜在的预后指标。

妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤的相关性研究

目的 分析妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤的相关性。方法 选取60例分娩的妊娠期糖尿病母亲新生儿为研究组,另选取60例分娩的妊娠期正常血糖母亲新生儿为对照组。两组新生儿均抽取脐血,运用酶联免疫吸附法检测脐血膜联蛋白A7水平, 3 d后运用新生儿20项行为神经评分法(NBNA)对新生儿进行神经行为评估;对比两组新生儿脐血膜联蛋白A7水平、NBNA评分以及脑损伤发生率,并运用Pearson相关性分析法分析脐血膜联蛋白A7水平与NBNA评分的相关性。结果 研究组新生儿脐血膜联蛋白A7(27.24±3.18)μg/L高于对照组的(22.95±2.69)μg/L, NBNA评分(36.34±1.27)分低于对照组的(38.25±1.56)分,脑损伤发生率13.33%高于对照组的1.67%(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,脐血膜联蛋白A7水平与NBNA评分呈负相关性(r=-0.613,P<0.05)。结论 妊娠期糖尿病母亲新生儿脐血膜联蛋白A7水平与脑损伤之间存在一定的关联性,新生儿脐血膜联蛋白A7水平可作为预测新生儿脑损伤的参考指标。

膜联蛋白A5在缺血性卒中诊疗中的研究进展

缺血性卒中是导致我国中老年人群残疾和死亡的重要病因之一,从诊断到治疗需要面临许多复杂的问题。目前,血管再通治疗已成为缺血性卒中最重要的治疗方法。但是,单纯行血管再通治疗后,部分患者的预后仍不理想。此外,目前针对单一靶点的神经保护药物治疗缺血性卒中的效果仍不显著。膜联蛋白A5具有多种生物学功能,其抗凝血、抗炎症、促进神经元存活等功能可用于减轻脑血管再通后再灌注损伤等神经保护治疗。膜联蛋白A5因其与磷脂酰丝氨酸具有紧密结合特性,可用于卒中诊断、靶向治疗载体构建等。作者总结膜联蛋白A5的多种功能,分析其在缺血性卒中中可能产生的影响,以期为后续研究提供参考。

膜联蛋白A2在恶性肿瘤中作用的研究进展

膜联蛋白A2(ANXA2)属于膜联蛋白家族成员之一,参与调控正常细胞膜运输、细胞骨架构成和细胞增殖等生物学功能。近年来的研究发现,ANXA2可以促进恶性肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移及黏附,并且影响肿瘤治疗抵抗和免疫逃逸,ANXA2在肿瘤组织中的表达水平与患者预后密切相关,有望成为预后评估的标志物。此外,已有研究在裸鼠皮下异种移植神经母细胞瘤模型中尝试靶向ANXA2基因治疗,并有效增强了肿瘤化疗药物的敏感性。尽管前期进行了大量的相关研究,但到目前为止对于ANXA2如何介导肿瘤发生、发展的具体机制仍然缺乏系统性研究。深入了解近年来ANXA2在调控肿瘤细胞上皮间质转化、细胞骨架动力学、增殖周期、代谢和免疫学等方面的研究进展,对肿瘤治疗靶点及预后标志物的研发具有重要意义。

膜联蛋白A家族在子痫前期发生发展中的作用研究进展

子痫前期是一种妊娠期特有的疾病,是导致孕产妇及围产儿死亡的重要原因。研究发现该病始于胎盘异常,继而引起胎盘释放各种应激因子及纤溶系统失衡,最终导致母体血管内皮损伤、全身炎症反应。膜联蛋白A家族是钙离子依赖的磷脂结合蛋白,与炎症、抗凝与细胞信号转导等过程密切相关,在子痫前期发生发展中发挥重要作用。

浸润性乳腺癌患者血清外泌体膜联蛋白A6表达水平与治疗反应的关系

目的探讨血清外泌体膜联蛋白A6(ANXA6)在浸润性乳腺癌(IBC)患者中的诊断及预后预测价值,以及与新辅助化疗/他莫昔芬辅助内分泌治疗反应之间的关系。方法选取2014年1月至2017年3月在该院进行手术且有腋窝淋巴结的100例IBC患者作为IBC组,其中50例术前接受新辅助化疗,50例术后接受他莫昔芬辅助内分泌治疗。另选取同期50例成年女性作为非癌对照组。入组后收集所有研究对象血液标本。对于辅助内分泌治疗的IBC患者,进一步收集术中肿瘤组织标本和辅助内分泌治疗前24 h的血清标本。分离血清外泌体,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清外泌体和肿瘤组织标本中ANXA6的表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体ANXA6和糖类抗原15-3(CA15-3)对IBC的诊断价值。采用Spearman相关对血清ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平的相关性进行分析。结果IBC组入组时血清外泌体ANXA6相对表达水平高于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,入组时血清外泌体ANXA6诊断IBC的AUC为0.844(95%CI:0.792~0.896),明显大于CA15-3的0.715(95%CI:0.653~0.786)。血清外泌体ANXA6高表达亚组肿瘤最大径大于低表达亚组,国际妇产科联盟分期高于低表达亚组,差异均有统计学意义(P<0.05),且预示无复发生存结局不良。对于新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗患者,血清外泌体ANXA6低表达亚组患者获得完全反应加部分反应的比例高于高表达亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。入组时血清外泌体ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平呈正相关性(r=0.490,P<0.05)。术后进行辅助内分泌治疗前血清外泌体ANXA6表达水平明显低于入组时,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IBC患者血清外泌体ANXA6具备成为诊断和预测预后生物标志物的潜力,且高表达与新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗反应不良有关。

膜联蛋白A家族成员在乳腺癌中作用机制的研究进展

膜联蛋白(ANX)家族广泛存在于细胞膜、细胞质或细胞外基质中。作为肿瘤的关键调控分子,膜联蛋白A(ANX A)家族可以通过影响细胞膜和细胞骨架的形成及参与信号通路,促进或抑制乳腺癌细胞的侵袭与转移。在细胞凋亡方面,ANX A家族通过参与促凋亡蛋白质和细胞周期独立激酶(CDKs)及相关通路的调节,在乳腺癌细胞凋亡中发挥作用。此外,ANX A家族还可以促进大量药物的治疗耐药。例如,ANX A1通过诱导上皮细胞-间质转化增强三阴性乳腺癌耐药,ANX A4通过形成ANX A4-Fhit复合物产生耐药性,含有ANX A6的外泌体的分泌以YAP1依赖的方式促进乳腺癌细胞的紫杉醇耐药。ANX A家族可能成为乳腺癌治疗的新靶点。

急性脑梗死患者血清膜联蛋白A2和miR-9-5p的表达及其与病情严重程度的相关性

目的观察急性脑梗死患者血清膜联蛋白A2、微RNA(miR)-9-5p的表达及其与病情严重程度的相关性。方法回顾性选取2022年1月至2023年7月佳木斯市中心医院收治的急性脑梗死患者80例,将其列为观察组;并选择同一时期体检中心接待的健康者80名作为对照组。检测并比较两组研究对象的血清膜联蛋白A2、miR-9-5p表达水平,按照疾病严重程度对观察组患者进行亚组划分,比较各亚组患者的血清膜联蛋白A2、miR-9-5p表达水平,采用Pearson相关性分析分析血清膜联蛋白A2、miR-9-5p的表达与急性脑梗死患者病情严重程度的关系。结果观察组患者的血清膜联蛋白A2表达水平为(42.65±6.12)μg/L,明显高于对照组[(14.29±2.18)μg/L],miR-9-5p表达水平为0.54±0.11,明显低于对照组(1.01±0.02),差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者血清膜联蛋白A2表达水平为(48.95±2.37)μg/L,显著高于轻度组、中度组[(35.56±1.16)、(41.23±2.39)μg/L],miR-9-5p表达水平为0.46±0.13,显著低于轻度组、中度组(0.72±0.13、0.58±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清膜联蛋白A2、miR-9-5p表达水平均与急性脑梗死病情严重程度相关,其中,血清膜联蛋白A2表达水平与美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分之间呈正相关(r=0.681,P<0.05),血清miR-9-5p表达水平与NIHSS评分之间呈负相关(r=-0.516,P<0.05)。结论与体检健康者比较,急性脑梗死患者的血清膜联蛋白A2表达水平明显升高,miR-9-5p表达水平明显降低,且血清膜联蛋白A2、miR-9-5p表达水平与急性脑梗死病情严重程度有相关性。临床血清膜联蛋白A2、miR-9-5p表达水平检测有助于急性脑梗死患者病情判定,制定针对性的治疗方案。

抗膜联蛋白A5抗体在抗磷脂综合征中的临床意义

目的探讨抗膜联蛋白A5(annexin A5,ANX A5)抗体与抗磷脂综合征(APS)患者临床特征的相关性及其检测的临床价值。方法2014年10月至2020年4月北京协和医院序贯纳入符合2006年悉尼修订APS分类标准的APS患者,收集患者人口统计学信息、临床特征及实验室检查结果,比较抗体阴性及阳性两组患者的组间差异。结果研究共纳入140例APS患者,其中抗ANX A5抗体阳性组57例(40.7%),阴性组83例(59.3%)。两组患者性别、年龄、病程、继发性APS比例无显著差异。临床特征中,抗ANX A5抗体阳性组(IgG/M阳性)较抗体阴性组合并脑梗死比例显著增多(33.3%vs.12.0%,P=0.003),其OR值为3.650,95%CI=1.544~8.628;抗ANX A5抗体双阳组(IgG及IgM均阳)脑梗死比例高达38.5%,OR值4.563,95%CI=1.246~16.711;其余部位血栓事件及病理妊娠无显著差异。实验室检查方面,两组间的抗心磷脂抗体(ACL)、抗β_(2)糖蛋白Ⅰ(β_(2)GPI)抗体、狼疮抗凝物(LA)等抗磷脂抗体阳性率比较,差异无统计学意义。结论APS患者中抗ANXA5抗体与脑梗死相关;合并该抗体阳性患者应警惕神经系统损害。

膜联蛋白A11在肿瘤中的研究进展

膜联蛋白(ANX)是以钙离子(Ca^(2+))浓度依赖性方式结合膜磷脂的细胞内蛋白质家族,在各种细胞类型中广泛表达。ANXA11是Ca^(2+)调节的磷脂依赖性和膜结合ANX多基因家族成员之一。既往研究表明,ANXA11在细胞分裂、Ca^(2+)信号传导、囊泡运输、细胞凋亡中均具有重要作用。近年来,有研究表明,ANXA11的失调和突变与系统性自身免疫性疾病和癌症的发展、化疗耐药性和复发等有关。ANXA11在多种肿瘤中高表达,可作为促癌基因参与肿瘤的发生、发展,有望成为一个癌症诊断、治疗及预后的潜在分子标志物。该文就近年来ANXA11的生物学功能及在肿瘤中的研究进展进行了回顾和综述。

黄芪抗癌汤对早期喉癌患者膜联蛋白A2、环氧合酶-2及色素框同源物7水平的影响

目的 探究黄芪抗癌汤对早期喉癌患者膜联蛋白A2(ANXA2)、环氧合酶-2(COX-2)及色素框同源物7(CBX7)水平的影响。方法 选取2019年10月—2021年10月于山东省青州市人民医院和扬州大学附属医院就诊的早期喉癌患者110例,采用随机数字表法分为手术组50例和观察组60例;另选同期于山东省青州市人民医院接受体格检查的健康个体50例作为健康组。健康组不予治疗;手术组进行喉癌CO_(2)激光治疗,术后予银黄含片和参芪颗粒口服治疗5 d;观察组在手术组治疗基础上联合黄芪抗癌汤口服治疗,连续治疗1个月。ELISA检测健康组门诊就诊时、手术组和观察组治疗前后血清ANXA2、COX-2、CBX7水平。结果 与健康组比较,手术组和观察组治疗前血清ANXA2、COX-2水平均明显升高(P<0.05),CBX7水平明显降低(P<0.05);与治疗前比较,手术组和观察组治疗后血清ANXA2、COX-2水平均明显降低(P<0.05),CBX7水平明显升高(P<0.05);与手术治疗后比较,观察组治疗后血清ANXA2、COX-2水平均明显降低(P<0.05),CBX7水平明显升高(P<0.05)。结论 黄芪抗癌汤可改善早期喉癌患者血清ANXA2、COX-2及CBX7的异常水平。

膜联蛋白A1在脑缺血-再灌注损伤中作用的研究进展

脑缺血-再灌注损伤是急性缺血性卒中血管再通治疗过程中继发且不可避免的病理生理变化,可导致神经元受损,影响认知功能和行为功能,甚至发生死亡。炎症反应是导致脑缺血-再灌注损伤的重要机制之一。膜联蛋白A1是一种强大的生理性抗炎症蛋白质,作者对近年来膜联蛋白A1与脑缺血-再灌注损伤的关系进行综述,以期为后续研究提供参考。

膜联蛋白A1在肿瘤中的研究进展

膜联蛋白(ANX)是以钙离子浓度依赖性方式结合膜磷脂的细胞内蛋白质家族,在各种细胞类型中广泛表达。ANXA1属于ANX家族成员之一,在细胞生物学中发挥重要作用。既往研究表明ANXA1可调节细胞炎症反应、细胞凋亡和细胞信号转导。近年来,研究表明ANXA1的失调和突变与肿瘤的发生及发展有关。本文综述ANXA1对不同肿瘤恶性行为的调节作用,包括恶性增殖、迁移、侵袭、凋亡抑制及对肿瘤微环境影响等,为后续研究ANXA1在肿瘤中的作用、诊断治疗和预后评估提供基础。

膜联蛋白A1激活FPR2/ALX依赖性AMPK/mTOR通路改善创伤性脊髓损伤的机制研究

目的探讨膜联蛋白A1(ANXA1)是否通过激活甲酰受体2/脂蛋白A4受体(FPR2/ALX)依赖的单磷酸腺苷活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路改善创伤性脊髓损伤(SCI)。方法将24只10周龄雄性SD大鼠按随机数表法分为A组(假手术组)、B组(SCI组)、C组[SCI+ANXA1模拟肽(Ac2-26)处理组]、D组(SCI+Ac2-26+WRW4处理组),各6只。建模前3 d,C组大鼠的脊髓T 10段蛛网膜下腔注射1 mg/kg Ac2-26,D组的脊髓T 10段蛛网膜下腔注射1 mg/kg Ac2-26和2.2 mg/kg WRW4,A组和B组注入等量的生理盐水,使用脊髓打击器(参数:高度6 cm,重量10 g)制备成年大鼠SCI模型,通过Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分检测大鼠的运动功能,活性氧(ROS)试剂盒检测脊髓组织中ROS的含量,ELISA检测脊髓组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平,蛋白免疫印迹法检测脊髓组织中单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化单磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、微管相关轻链蛋白3(LC3)及选择性自噬接头蛋白1(p62)的表达水平。结果与A组比较,B组大鼠BBB评分显著降低(P<0.05);与B组比较,C组大鼠BBB评分[(7.8±1.9)分vs.(16.4±2.5)分]显著升高(P<0.05);与C组相比,D组大鼠BBB评分[(16.4±2.5)分vs.(10.1±1.5)分]升高(P<0.05);与A组比较,B组ROS含量、TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著上升(P<0.05);与B组比较,C组ROS含量[(152.33±26.56)%vs.(106.00±22.76)%]、TNF-α[(490.77±13.50)ng/g vs.(268.19±10.94)ng/g]、IL-6[(356.48±13.20)ng/g vs.(194.23±11.60)ng/g]、IL-1β水平[(334.65±9.73)ng/g vs.(153.15±11.61)ng/g]降低(P<0.05)与C组比较,D组ROS含量[(106.00±22.76)%vs.(133.01±28.70)%]、TNF-α[(268.19±10.94)ng/g vs.(394.20±15.24)ng/g、IL-6(194.23±11.60)ng/g vs.(305.77±12.92)ng/g]、IL-1β水平[(153.15±11.61)ng/g vs.(258.74±10.02)ng/g]上升(P<0.05)。与A组比较,B组p-AMPK/AMPK、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平下调(P<0.05),p-mTOR/mTOR、p62表达水平上调(P<0.05);与B组比较,C组p-AMPK/AMPK(0.32±0.06 vs.0.53±0.09)、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平(0.21±0.04 vs.0.66±0.08)上调(P<0.05),p-mTOR/mTOR(1.38±0.14 vs.0.76±0.06)、p62表达水平(1.27±0.09 vs.0.79±0.06)下调(P<0.05);与C组比较,D组p-AMPK/AMPK(0.53±0.09 vs.0.43±0.08)、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平(0.66±0.08 vs.0.57±0.06)下调(P<0.05),p-mTOR/mTOR(0.76±0.06 vs.1.22±0.12)、p62表达水平(0.79±0.06 vs.1.10±0.11)上调(P<0.05)。结论ANXA1具有改善SCI的作用,其机制可能是通过激活FPR2/ALX依赖的AMPK/mTOR通路上调自噬水平、抑制ROS和炎症介质释放介导。

膜联蛋白A1拟肽AC2-26调控ERK/NF-κB信号通路改善体外循环血清诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤

目的探究AC2-26对体外循环(CPB)血清诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法收集16例风湿性心脏病手术患者CPB停机后的无菌血液并分离血清,建立体外循环血清诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤模型。提取健康SD大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞,培养72 h后,随机分为5组即对照组(C组),肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)损伤组(M组),AC2-26+AECⅡ损伤组(A组),AECⅡ损伤+Boc2组(B组),AC2-26+AECⅡ损伤+Boc2组(A+B组)。CCK-8、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;免疫荧光检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞甲酰肽受体2(FPR2)和肺泡表明活性物质(SPC)表达情况;透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体的影响;Western blot检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞ERK、NF-κB表达情况。结果应用AC2-26后,CPB血清诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖率明显升高,凋亡率明显降低(P<0.05),AC2-26明显抑制ERK及NF-κB蛋白的磷酸化(P<0.05),促进SPC的表达,改善细胞内板层小体结构及形态,这一现象可被甲酰肽受体抑制剂Boc2阻断。结论AC2-26可以减轻CPB血清诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤,其作用机制可能与FPR2调节ERK、NF-κB信号通路有关。

负载膜联蛋白A2(annexin A2)的间充质干细胞来源外泌体减少M2巨噬细胞极化抑制裸鼠前列腺癌细胞生长

目的探究负载膜联蛋白A2(ANXA2)的骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体(Exo-ANXA2)对前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移以及前列腺癌移植瘤生长的影响,并研究巨噬细胞是否参与该过程。方法分离与培养BALB/c裸鼠BMSC,采用负载ANXA2的慢病毒质粒感染BMSC,并分离外泌体;加入外泌体处理THP-1巨噬细胞,ELISA检测细胞上清培养液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的水平;将外泌体处理的巨噬细胞与前列腺癌细胞共培养后,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell^(TM)小室检测细胞侵袭与迁移。通过注射PC-3人前列腺癌细胞构建前列腺癌裸鼠移植瘤模型,将建模后的裸鼠随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组裸鼠尾静脉注射1 mL Exo-ANXA2,对照组注射等量PBS,于注射后第0、3、6、9、12、15、18、21天,使用游标卡尺测量计算肿瘤体积,21 d处死裸鼠并测量肿瘤组织质量,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中抗原KI-67(ki67)和CD163表达。结果骨髓分离的细胞表面CD90和CD44呈高表达,CD34和CD45呈低表达,且成骨成脂分化能力较强,成功获得BMSC;负载ANXA2的慢病毒质粒感染后,BMSC中有较强的绿色荧光蛋白表达,并成功分离到Exo-ANXA2;经Exo-ANXA2处理后,THP-1细胞中TNF-α和IL-6的水平显著升高而IL-10和IL-13的水平显著下降;Exo-ANXA2处理巨噬细胞后,显著抑制Exo-ANXA2促进PC-3细胞增殖活性、侵袭与迁移的作用;经过给予前列腺癌移植瘤裸鼠注射Exo-ANXA2后,裸鼠在第6、9、12、15、18、21天的肿瘤组织体积显著减小,21 d时裸鼠肿瘤体质量也显著减少,此外,肿瘤组织内ki67和CD163的阳性表达率均显著降低。结论Exo-ANXA2能够抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭与迁移,并抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,M2型巨噬细胞减少。