Toll样受体2、4对病毒囊膜蛋白的识别

TLR2、4是TLRs家族中重要的成员,通过识别囊膜病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导促炎性细胞因子和趋化因子等的释放,介导先天性抗病毒免疫反应。本文就TLR2、4的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路以及对不同囊膜病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述。

跨膜蛋白受体PTCH1基因与肺癌的关系研究进展

肺癌的发病率和病死率较高,是当前我国重要的公共健康问题。近年来随着分子生物学发展及精准医学基因靶向治疗取得新突破,肺恶性肿瘤的治疗由传统放化疗逐渐转向基因靶向治疗。跨膜蛋白受体PTCH1基因是近年来研究发现与肺癌发病密切相关的基因之一,该基因的突变或表达低下与肺癌的发生、转移与增殖密切相关。因此,深入研究PTCH1基因在肺癌致病中的作用机制,对肺癌的基因精准靶向治疗具有一定的指导意义。

食管鳞状细胞癌组织中趋化因子受体-7和肾小球上皮整合膜蛋白的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中趋化因子受体-7(CCR7)、肾小球上皮整合膜蛋白(Podopla-nin)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测40例ESCC组织及癌旁正常食管组织中CCR7及Podoplanin蛋白的表达,其中Podoplanin蛋白以其标记的微淋巴管密度(MLVD)值表示;分析ESCC组织中CCR7蛋白、MLVD值与临床病理特征的关系。结果:ESCC组织中CCR7蛋白阳性表达率高于癌旁正常食管组织(校正χ2=23.310,P<0.001);ESCC组织中MLVD值高于癌旁正常食管组织(Z=5.416,P<0.001);CCR7蛋白表达阳性癌组织的MLVD值高于CCR7阴性组织(t=3.478,P<0.001);CCR7蛋白、MLVD值与ESCC患者的病理分期和淋巴结转移有关(χ2=6.114,P=0.013;χ2=4.352,P=0.035;t=3.668,P<0.001;t=4.888,P<0.001)。结论:CCR7和Po-doplanin蛋白表达的上调可能促进了ESCC的侵袭与淋巴结转移。

人星形细胞HIV-1膜蛋白gp120新受体的免疫学鉴定

自 1994年首次报导HIV 1外膜蛋白gp12 0与人胎儿星形细胞膜蛋白质位点 (推测分子量为 2 6 0kD ,命名为PAG)结合以来〔1〕,这项工作持续集中于研究该蛋白的功能与作用〔2〕。本研究藉助杂交瘤技术建立了一系列小鼠抗人星形细胞PAG)的单克隆抗体 ,这些抗体成功地抑制了 gp12 0与PAG的结合 ,抑制率可达 5 0 %以上 ;并几乎完全阻断了gp12 0介导的由摄入所致星形细胞内钙离子的升高。通过ELISA可证实抗体与星形细胞的特异反应 ;蛋白印迹和免疫沉淀试验结果表明PAG作为实体的存在。试验表明PAG对于 gp12 0与星形细胞的结合 ,对于gp12 0介导的星形细胞摄入所致钙离子的升高均有决定性作用。许多文献报导和研究表明 gp12 0可与多种细胞结合而导致HIV 1感染。由此推论PAG是HIV 1gp12 0在人星形细胞上的新受体 ,同时也可能对HIV 1脑病的治疗开辟一条崭新的途径。PAG是否为HIV 1感染人星形细胞的受体 ,仍有待进一步实验证明。

解读四类常见“膜蛋白”

膜蛋白,作为生物膜的核心组成部分,它们在细胞的物质运输、信息传递以及维持细胞内外平衡等方面扮演着至关重要的角色.根据功能特性的不同,膜蛋白可以细分为多个类型,其中最常见的包括载体蛋白、通道蛋白、离子泵以及受体蛋白.这四种膜蛋白在细胞的生命活动中各司其职,共同协作,确保细胞功能的正常运行.本文将深入探讨这四类膜蛋白的结构、功能及其在细胞中的作用,以期更全面地了解它们在生物学领域的重要地位.

配体与受体相互作用诱导的膜蛋白构象变化WGA与GPA作用对膜蛋白构象的影响

用ＦＴＩＲ、ＣＤ、微量ＤＳＣ和ＳＴＭ、ＡＦＭ等研究重组脂质体、血影和完整红细胞在配体（ＷＧＡ）与膜受体（ＧＰＡ）相互作用下膜蛋白构象改变以及纳米水平上膜表面蛋白的形貌。结果表明ＷＧＡ可诱导重组脂质体膜、血影膜和完整红细胞膜蛋白发生一定的不同的构象变化、红细胞及其膜的热力学行为变更，以及红细胞膜表面蛋白的可能交联。

绵羊肺炎支原体及其脂质相关膜蛋白通过Toll样受体2激活MAPK信号通路诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达的研究

为验证绵羊肺炎支原体(M. ovi)或脂质相关膜蛋白(LAMPs)是否通过Toll样受体2(TLR2)诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的表达,本研究利用不同浓度的M.ovi或LAMPs刺激C57BL/6J WT小鼠及Tlr2-/-基因缺失小鼠的腹腔巨噬细胞12 h后,利用荧光定量PCR(qPCR)检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平。结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞TNF-α基因的转录水平明显受到抑制。进一步以终浓度为1×10^(7)cfu/mL M.ovi或8μg/mL LAMPs分别刺激C57BL/6J WT小鼠和Tlr2-/-基因缺失小鼠的巨噬细胞,不同时间后利用qPCR检测Tlr2和TNF-α基因的转录水平;利用流式细胞术检测C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达水平;采用ELISA方法检测两种小鼠巨噬细胞上清液中TNF-α的分泌水平;利用western blot检测细胞中MAPK信号通路的激活。qPCR结果显示,以M. ovi或LAMPs经不同时间刺激的C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞中Tlr2和TNF-α基因的转录水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TNF-α基因的转录水平均明显受到抑制;流式细胞术检测结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TLR2蛋白的表达水平均不同程度上升;ELISA结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞在受到M. ovi或LAMPs刺激后,TNF-α蛋白的表达水平均不同程度上升,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞中TLR2蛋白的表达则明显受到抑制;Western blot结果显示,C57BL/6J WT小鼠巨噬细胞经M. ovi或LAMPs刺激后MAPK信号通路中各信号蛋白(Erk、p38、JNK)均发生磷酸化反应,而Tlr2-/-基因缺失小鼠巨噬细胞在受到这两种物质刺激后MAPK信号通路明显受到抑制。上述结果表明,M. ovi及其LAMPs可通过小鼠腹腔巨噬细胞的TLR2激活MAPK信号通路,继而引起细胞因子TNF-α的分泌增多。本研究首次证实M. ovi及其LAMPs是通过TLR2及MAPK信号通路引起小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的分泌水平发生变化,为进一步明确巨噬细胞参与抗M. ovi天然免疫应答的机制奠定基础。

EB病毒潜伏膜蛋白1通过结合TRAFs调控NF-κB

为了探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)的致瘤机制 ,对鼻咽癌中LMP1激活重要的核转录因子NF κB机制进行了研究 .首先 ,采用免疫共沉淀 蛋白质印迹在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中证实LMP1与TRAF1,2 ,3结合形成免疫共沉淀复合物 ,进一步以野生型LMP1及其三种突变体的鼻咽癌细胞系LMP1(野生型 ,wt)、HNE2 LMP1del187～ 35 1(CTAR1缺失型 )、HNE2 LMP1(1～ 2 31) (CTAR2缺失型 )、HNE2 LMP1(1～ 187) (羧基端胞浆区缺失型 )、HNE2 pSG5 (空白载体型 )为材料 ,结合NF κB报道基因质粒(pGL2 NF κB luc)的荧光素酶活性表达分析NF κB的活性 ,证实 :较之母细胞 ,野生型LMP1活化NF κB达13 8倍 ,LMP1(1～ 187)几乎不活化NF κB ,LMP1(1～ 2 31)活化NF κB达 4 9倍 ,LMP1(del187～ 35 1)活化NF κB达 9 1倍 ;TRAF1过表达升高LMP1(wt)及LMP1(1～ 2 31)介导的NF κB活性 ,而对LMP1(del187～ 35 1)活化NF κB无影响 ;TRAF3过表达或TRAF3负显性突变体抑制LMP1(wt)及LMP1(1～ 2 31)介导的NF κB活性 ,而不影响LMP1(del 187～ 35 1)活化NF κB ;TRAF2过表达升高LMP1(wt)、LMP1(1～2 31)及LMP1(del 187～ 35 1)介导的NF κB活性 .这些结果表明 :鼻咽癌中LMP1通过TRAF1、TRAF2或TRAF3调控NF κB 。

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌中结合磷酸化的TRAFs

对鼻咽癌中潜伏膜蛋白 1 (LMP1 )是否结合磷酸化的肿瘤坏死因子受体相关因子 (tumornecrosis factor receptor- associated factors,TRAFs)信号分子进行探讨 .首先应用 CSA/SP双染色法在 30例鼻咽癌活检组织中发现 1 6例 (52 % ) LMP1与 TRAF1、TRAF2和 TRAF3共表达于癌细胞胞膜及胞浆同一部位 .这提示 EB病毒 LMP1在鼻咽癌中可能结合 TRAF1、TRAF2或TRAF3发挥作用 .进一步以导入载体 p SG5的鼻咽癌细胞系 HNE2 - p SG5为对照 ,建立了稳定表达 LMP1的鼻咽癌细胞系 HNE2 - LMP1 ,利用这两种细胞系 ,以免疫共沉淀 - Western印迹方法 ,证实了 LMP1可与磷酸化的 TRAF1、TRAF2或 TRAF3直接或间接作用形成免疫共沉淀复合物 .

对头颈鳞状细胞癌中高表达基质金属蛋白酶基因具有激活作用的人类膜蛋白基因筛选

目的对头颈部鳞状细胞癌中高表达的基质金属蛋白酶(MMP)基因(包括MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12和MMP13)具有激活作用的人类膜蛋白基因进行筛选。方法构建上述7个备选MMP启动子报告基因质粒。用豆蔻酸佛波酰乙酯(PMA,一种蛋白激酶C激活剂)刺激7个备选MMP启动子报告基因质粒。用双荧光素酶检测系统检测各备选MMP启动子报告基因质粒PMA刺激前的活性及PMA刺激后的活性,以后者除以前者得出各备选MMP启动子报告基因质粒的相对荧光素酶活性值(RLA),RLA最大者选定为MMP启动子报告基因质粒。用人类膜蛋白基因质粒库中的722种质粒依次刺激MMP启动子报告基因质粒,刺激前后MMP启动子报告基因质粒RLA均数超过10确定为对MMP启动子报告基因质粒活性有明显激活作用的人类膜蛋白基因质粒。将筛选出的人类膜蛋白基因质粒以相同方法进行第二轮筛选,第二轮筛选出的人类膜蛋白基因质粒以相同方法进行第三轮筛选,最终确定对头颈部鳞状细胞癌中高表达的MMP有激活作用的人类膜蛋白基因。结果PMA刺激后MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13启动子报告基因质粒的RLA分别为4.53±0.72、1.47±0.28、23.28±1.96、2.37±0.46、8.81±1.35、2.15±0.51、3.47±0.99。MMP3启动子报告基因质粒的RLA明显高于其他MMP启动子报告基因质粒(P均<0.05),被选为MMP启动子报告基因质粒。全部722个质粒经3轮筛选,确定AXL受体酪氨酸激酶(AXL)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B)和G蛋白耦联受体65(GPR65)质粒对MMP启动子报告基因质粒均有明显的激活作用。结论 GPR65、AXL、TNFRSF10B基因对头颈部鳞状细胞癌中高表达的MMP基因有激活作用。

优化心肌膜蛋白提取方法及心肌缺血时间隙连接蛋白43的表达变化(英文)

目的优化膜蛋白提取方法,以便研究心肌缺血时connexin43(间隙连接蛋白43)的表达变化。方法①差速离心法结合溶剂提取法提取心肌膜蛋白,溶解膜蛋白时比较了6组方案,通过各组方案在聚丙烯酰胺凝胶电泳中条带分布差异筛选出最佳方案,分析心肌细胞膜表面受体表达。②通过左冠脉结扎造成对照组、5min、20min、60min心肌缺血组,研究缺血时心肌connexin43表达变化。结果①最终选择RIPA含4%SDS来溶解膜蛋白,并成功检测出connexin43,βactin(管家蛋白),M受体(毒蕈碱型乙酰碱受体)等膜蛋白。②免疫印迹技术检测缺血不同时相connexin43表达变化,5min、20min、60min缺血组相对对照组分别减少20%、60%、76%。结论应用此方案能成功提取心肌膜蛋白,为进一步研究心肌缺血时connexin43的表达变化奠定了基础。

中国汉族人群极低密度脂蛋白受体基因多态性与血脂水平的相关性研究

目的 :对中国汉族人群极低密度脂蛋白受体 (VLDL R )基因CGG重复序列多态性与血脂水平及心脑血管病的相关性进行研究。方法 :检测湖北地区 75例冠心病 (CHD)、65例动脉粥样硬化性脑梗死 (ABI)和 160例正常人CGG重复序列 ,并分析各组血脂水平。结果 :共检出CGG重复次数为 5、8、9、11的 4种等位基因及 5 /5、5 /8、8/8、8/9、9/9、5 /9、8/11、5 /11等 8种基因型。CHD组与对照组、ABI组与对照组比较 ,VLDL R等位基因频率以及基因型频率分布无统计学差异 (P >0 .0 5 )。在CHD组和ABI组中 ,五个亚组间TC、TG、HDL -C、LDL -C、ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)水平均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :VLDL R基因多态性与人群中的血脂水平无关联 ,与心脑血管病 (CCVD)也没有关联。

骨骼肌三联管膜蛋白与兴奋收缩偶联

背景:骨骼肌的兴奋收缩偶联机制及快速、有效的兴奋收缩偶联直接决定了运动能力。三联管是骨骼肌中特有的结构,是兴奋收缩偶联的结构基础。位于三联管上的膜蛋白在三联管结构的发育、正常形态的维持和功能的发挥中均起着关键作用。目的:介绍三联管膜蛋白的研究进展,对双氢吡啶受体蛋白,兰诺定受体蛋白,MG29蛋白,JP蛋白,Calumin与STIM1蛋白,隐钙素和TRIC通道蛋白等的结构和功能进行了归纳总结。方法:电子检索中国学术期刊数据库CNKI、读秀学术搜索等中文数据库和Elsevier SD,Springer Link等英文数据库,检索时间1980/2010,均为骨骼肌衰老与力量—速度关系的相关综述和实验研究。并分析骨骼肌力量—速度关系随年龄变化的规律,以及该变化对老龄肌肉产生的影响。结果与结论:共纳入骨骼肌兴奋收缩偶联机制和三联管膜蛋白的相关文献28篇。归纳文献结论证明,位于骨骼肌三联管的双氢吡啶受体蛋白,兰诺定受体蛋白,MG29蛋白,JP蛋白,Calumin与STIM1蛋白,隐钙素和TRIC通道蛋白在骨骼肌的兴奋收缩偶联过程中各司其职,对骨骼肌正常的功能的发挥起着不可或缺的作用。但目前对这些蛋白的认识明显不足,尚需深入研究。

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2与CD81关系的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝炎的主要病因之一,其基因组为单股正链RNA,包膜蛋白E2在HCV入侵宿主细胞中起重要作用,CD81可能是HCV的受体或共同受体,进一步研究CD81和HCV E2的相互作用,有助于HCV的治疗和预防。

培养大鼠皮层神经元NMDA受体蛋白单分子原子力显微镜定位研究

为在纳米尺度对 NMDA受体蛋白分子进行神经细胞膜表面原位定位和探讨原子力显微镜在生物单分子操纵和调控中的应用 ,本研究应用原子力显微镜分别对分布在云母表面的膜 NMDA受体蛋白分子标记物抗 NMDAR1Ig G-葡萄球菌蛋白 A-胶体金复合物分子和结合标记物分子后的神经元膜进行扫描 ,三维形貌测定 ,通过颗粒度分析结果 ,明确标记物分子的特征性三维形貌 ,对比确定经过免疫胶体金结合后的 NMDA受体蛋白单分子在神经元膜表面的定位。结果显示 ,空白云母表面标记物分子为分散均匀的平均粒径为 49nm的球形颗粒 ,在神经元膜表面结合 NMDA目的受体蛋白分子后 ,免疫复合物分子呈现出粒径为 5 3 nm的散在分布球形或短棒状颗粒 ,长径约为宽径的 2倍 ,长轴截面可见典型的双峰三维结构。上述结果表明 ,NMDA受体蛋白单分子可以结合 1个或 1个以上的胶体金标记物分子 ;原子力显微镜可以在纳米尺度对神经元膜 NMDA受体蛋白进行标记和其免疫复合物的三维形貌测定。胶体金颗粒标记 ,原子力显微镜测定是免疫细胞化学新方法。

G蛋白偶联受体和跨膜信息传递的研究现状

自从第一个ＧＰＣＲ（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）被克隆以来，目前已知有超过１０００种的ＧＰＣＰｓ存在于生物体细胞膜上，它们构成了一个庞大的蛋白质超家族．调控着极为广泛的生物活动；同时对其研究也深入到结构与功能关系．本文总结了近年来关于ＧＰＣＰｓ结构，配体－受体结合模式及其激活机制的研究现状以及最新进展。

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2与 CD81关系的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝炎的主要病因之一,其基因组为单股正链 RNA,包膜蛋白 E2在 HCV 入侵宿主细胞中起重要作用,CD81可能是HCV 的受体或共同受体,进一步研究 CD81和 HCV E2的相互作用,有助于HCV 的治疗和预防。

登革病毒包膜蛋白E第三结构域的研究进展

登革病毒是目前人类最重要的虫媒病毒之一,登革病毒包膜蛋白E的第三结构域是研究登革病毒亚单位疫苗及病毒入侵宿主细胞的重要靶点。

梅毒螺旋体膜蛋白Tp0971经TLR2/NF-κB诱导巨噬细胞分泌细胞因子

目的:探讨梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)膜蛋白Tp0971诱导巨噬细胞分泌细胞因子的分子机制。方法:以Tp Nichols株基因组为模板,PCR扩增Tp0971基因并构建重组质粒p ET28a(+)/Tp0971,随后将其转化至表达宿主菌E-.coli Rosseta中,IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白。经去除Tp0971重组蛋白中的内毒素后,将其刺激巨噬细胞,ELISA检测细胞因子IL-8、IL-1β和IL-6的分泌水平。并采用Toll样受体2(TLR2)中和抗体或TLR2 siRNA,以及核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞,观察TLR2和NF-κB在介导细胞因子分泌中的作用。结果:成功构建p ET28a(+)/Tp0791原核表达载体,并表达出一相对分子量为29 k D的重组蛋白。ELISA结果显示,0.5~10μg/ml Tp0791能以剂量依赖性方式诱导巨噬细胞分泌IL-8、IL-1β和IL-6。采用siRNA沉默TLR2表达,或用TLR2中和抗体封闭后,IL-8、IL-1β和IL-6分泌明显减少。此外,Tp0791也能增加细胞核中NF-κB p65的表达水平,采用NF-κB抑制剂PDTC处理后,细胞因子分泌水平也显著降低。结论:Tp0971经TLR2/NF-κB可诱导巨噬细胞分泌细胞因子。

膜受体蛋白的结构与计算机模建研究进展

本文主要对近几年膜受体蛋白的结构研究进展进行了综述，并重点介绍了G蛋白偶联受体和N样乙酰胆碱受体的结构及其模建方法。由于已知的膜受体蛋白结构数据太少，基于知识的膜蛋白结构预测模型的主观性比较大，在没有用实验方法阐明受体的三维结构以前，用计算机对其结构进行模建不失为一种较好的补充方法。