基于环磷酸鸟苷-腺苷合成酶/膜蛋白干扰素基因刺激因子通路探讨奥拉西坦对脑出血大鼠神经功能的影响

目的从环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)/膜蛋白干扰素基因刺激因子(STING)通路方面,探讨奥拉西坦(ORC)对脑出血大鼠认知功能的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ORC组(50 mg/kg)、RU.521组(cGAS抑制剂,50 mg/kg)、DMXAA组(STING激活剂,25 mg/kg)、ORC+DMXAA组,每组15只。用Longa法测大鼠神经功能变化;干湿比重法测脑含水量;电镜测血肿周围病理变化;铁染色法测血肿周围组织铁沉积,以评估血肿程度;TUNEL法测血肿周围组织神经元凋亡状况;免疫组化法测血肿周围组织cGAS阳性表达。Western blotting法测STING、TNF-α、IL-12、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、转铁蛋白(Tf)、转铁蛋白受体(Tf R)、水通道蛋白4(APQ4)蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠死亡、偏瘫及侧旋转等神经功能缺损行为评分明显升高,血肿周围组织神经元水肿及凋亡明显增加,脑水肿、铁沉积严重,cGAS/STING通路蛋白及其介导的炎症反应和促凋亡途径激活(均P<0.05)。ORC组及RU.521组大鼠神经功能缺损评分明显降低、血肿周围组织神经元损伤、凋亡、脑水肿及铁沉积均明显缓解,cGAS/STING通路蛋白及其介导的炎症反应和促凋亡相关蛋白表达明显降低(均P<0.05)。DMXAA可逆转ORC的上述作用(P<0.05)。结论ORC可能通过抑制cGAS/STING通路活化,缓解脑出血大鼠血肿周围神经元炎症损伤及凋亡,减轻神经功能缺损。

微RNA-509-3p/干扰素刺激基因15轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的探究微RNA(miR)-509-3p/干扰素刺激基因15(ISG15)轴对喉癌细胞血管生成及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法2022年1―9月,将喉癌M4E细胞分为Con组、miR-NC组、miR-509-3p组、pcDNA-ISG15组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中miR-509-3p表达;细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Matrigel体外成管实验检测血管生成能力;蛋白质印迹法检测细胞中ISG15、VEGF蛋白表达;萤光素酶活性报告检测miR-509-3p和ISG15的靶向关系。结果与喉上皮细胞NP69中miR-509-3p表达(1.01±0.13)μg/L相比,喉癌细胞SCC-40、SCC-2、M4E中miR-509-3p表达[(0.61±0.08)、(0.45±0.07)、(0.18±0.07)μg/L]均降低,且M4E细胞中miR-509-3p表达低于SCC-40、SCC-2细胞(P<0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞中miR-509-3p表达增加[(1.17±0.05)μg/L比(118±0.03)μg/L];Con组细胞中miR-509-3p表达与miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与Con组相比,miR-509-3p组细胞增殖(1.71±0.02比3.09±0.07)、侵袭(55.33±2.52比150.67±2.52)、迁移(30.58±2.08比98.33±1.53)、形成小管数量(61.28±2.15比135.62±2.54)及细胞中ISG15(0.24±0.03比1.11±0.13)、VEGF(0.35±0.02比0.99±0.04)蛋白表达均降低,细胞凋亡率[(18.76±0.18)%比(5.61±0.08)%]增加(P<0.05);Con组细胞增殖、侵袭、迁移、形成小管数量、凋亡率及细胞中ISG15、VEGF蛋白表达和miR-NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR-509-3p组相比,pcDNA-ISG15组细胞增殖(3.25±0.06)、侵袭(144.00±2.65)、迁移(89.34±5.13)、形成小管数量(131.56±2.08)及细胞中ISG15(0.83±0.05)、VEGF蛋白(0.89±0.03)表达增加,细胞凋亡率降低(6.85±0.06)%(P<0.05)。结论过表达miR-509-3p可抑制喉癌细胞血管生成及VEGF蛋白表达。

基于干扰素基因刺激因子的特异性靶向Dickkopf相关蛋白1的肿瘤疫苗对多发性骨髓瘤的抗肿瘤免疫应答

目的探讨干扰素基因刺激因子(STING)激动剂ADU-S100是否可增强壳聚糖(CS)纳米颗粒介导的包含肿瘤特异性抗原Dickkopf相关蛋白1(DKK1)的DNA疫苗对多发性骨髓瘤(MM)的抗肿瘤免疫应答。方法应用复合物共沉淀法制备CS-DNA纳米颗粒。采用Zetasizer Nano-ZS激光粒度分析仪检测CS-DNA纳米颗粒的粒度和Zeta电位,分别通过凝胶阻滞分析和Western blot评估CS-DNA纳米颗粒的DNA保护效果和体内DNA表达效率。利用表达人DKK1(hDKK1)基因的慢病毒建立稳定表达hDKK1的MPC-11细胞(MPC-11-hDKK1),并将MPC-11-hDKK1细胞皮下接种于小鼠建立肿瘤模型。将荷瘤小鼠随机分为对照组(肌内注射CS-pcDNA3.1)、ADU-S100免疫组(皮下注射ADU-S100)、CS-pDKK1免疫组(肌内注射CS-pDKK1)和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组(肌内注射CS-pDKK1+皮下注射ADU-S100),每组5只。各组荷瘤小鼠按照相应的免疫方案以10 d为间隔免疫3次。每周测量肿瘤大小。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第42天,测量各免疫组小鼠的肿瘤重量;流式细胞术检测各免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)树突状细胞(DC)、CD8^(+)CD11c^(+)DC和主要组织相容性复合物Ⅱ类(MHCⅡ)+CD11c^(+)DC亚群的占比。采用重组hDKK1蛋白体外刺激各组小鼠的脾细胞,应用流式细胞术检测各免疫组CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比,并应用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒测定各组细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效应。结果CS-DNA纳米颗粒的粒径和Zeta电位分别约为(204.3±2.31)nm和(15.47±1.01)mV。凝胶阻滞分析表明,CS纳米颗粒包裹的DNA可被完全阻滞。Western blot分析表明,CS-DNA纳米颗粒可在体内有效表达。MPC-11-hDKK1细胞中DKK1蛋白的相对表达量显著高于MPC-11-Ctrl细胞(P<0.05)。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第7、14天,ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组与对照组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);接种后第21、28、35、42天,ADU-S100免疫组,CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤体积均显著低于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠肿瘤体积显著低于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。肿瘤细胞MPC-11-hDKK1接种后第42天,ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤质量均显著低于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠的肿瘤质量显著低于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组和ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)DC、CD8^(+)CD11c^(+)DC、MHCII+CD11c^(+)DC亚群占比显著高于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组小鼠脾脏中CD11c^(+)DC、CD8^(+)CD11c^(+)DC、MHCII+CD11c^(+)DC亚群占比显著高于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。ADU-S100免疫组、CS-pDKK1免疫组、ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组的CTL杀伤效应及CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比均显著高于对照组(P<0.05);ADU-S100/CS-pDKK1联合免疫组的CTL杀伤效应及CD8^(+)T淋巴细胞中EdU+细胞占比均显著高于ADU-S100免疫组和CS-pDKK1免疫组(P<0.05)。结论STING激动剂ADU-S100可显著提高CS-pDKK1纳米颗粒疫苗对MM的抗肿瘤免疫应答,该疫苗策略为MM提供了一种潜在的治疗方法。

环磷酸鸟苷-腺苷合成酶和干扰素基因刺激因子信号通路与缺血性脑卒中相关性的研究进展

缺血性脑卒中(IS)是一种常见的神经系统损伤疾病,其特征是局部脑血流暂时或永久减少,其高发病率、高致残率和不良预后给社会带来了沉重负担[1]。迄今为止,治疗急性IS的方法主要是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂,然而由于重组组织型纤溶酶原激活剂的治疗窗口狭窄,只有少数患者接受溶栓治疗.

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

干扰素基因刺激蛋白(STING)通路对乙型肝炎肝硬化患者外周血单核细胞炎症因子分泌及吞噬功能的影响

目的研究干扰素基因刺激蛋白(STING)通路对乙型肝炎肝硬化患者外周血单核细胞生成炎症细胞因子及吞噬功能的影响。方法收集2020年5月—10月于徐州医科大学附属医院感染性疾病科住院的35例乙型肝炎肝硬化患者和10例体检中心健康体检者的外周静脉全血,分离并提取外周血单核细胞;另将乙型肝炎肝硬化患者分为环鸟苷酸-腺苷酸(c GAMP)(n=12)、c GAMP+CCCP(n=12)和Control(n=11)三组。体外以STING激活剂c GAMP和/或STING抑制剂CCCP加入单核细胞培养液中,ELISA法检测上清液IFN-α、IFN-β、IL-6和TNF-α水平。此外,将含c GAMP和/或CCCP的单核细胞培养体系与荧光标记的E.coli共同孵育后,采用流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能的改变。计量资料两组间比较采用成组t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与加入抑制剂CCCP组相比,乙型肝炎肝硬化患者外周血单核细胞经c GAMP刺激后分泌IFN-α、IFN-β、IL-6和TNF-α水平显著升高(P值均<0.05)。乙型肝炎肝硬化患者外周血单核细胞在有或无c GAMP/c GAMP+CCCP处理下,吞噬E.coli能力均较健康组明显降低(t值分别为4.647、2.790、2.504,P值均<0.05),且有或无c GAMP与c GAMP+CCCP刺激,对乙型肝炎肝硬化患者单核细胞吞噬E.coli的能力没有显著影响(P>0.05)。结论外周血单核细胞STING通路活化参与了乙型肝炎肝硬化状态下全身性炎症反应的发生,STING通路的激活与否不影响乙型肝炎肝硬化外周血单核细胞的吞噬细菌能力。

干扰素基因刺激因子和自噬的相互关系

干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)是病毒DNA或自身DNA激活免疫系统的关键蛋白质和重要感受器。自噬(autophagy)是降解细胞质成分、蛋白质聚集体和/或细胞器的一种生理过程。STING和自噬在细胞、组织和机体稳态中发挥着至关重要的作用。已证实,STING或自噬功能紊乱与人类多种疾病密切相关。近年来诸多研究提示,STING与自噬存在相互影响、相互作用,共同参与疾病的发生与发展过程。本文总结了最新关于STING与自噬相互调节的机制及其与人类重大疾病的关系,并深入讨论其对疾病治疗的潜在影响和科学意义。

干扰素基因刺激因子通路在糖尿病肾病中的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见微血管并发症之一,也是导致终末期肾病的主要病因。DN是代谢因素导致的炎症反应和免疫性损伤疾病,与代谢紊乱、血流动力学异常、炎症等因素有关。环鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)通路是固有免疫的重要组成部分,干扰素基因刺激因子(STING)作为一种内质网激活蛋白,经历dsDNA的感知[环状GMP-AMP合酶(cGAS)]、胞内信号转导[STING、TANK结合激酶1(TBK1)]和免疫应答激活[干扰素调节因子3(IRF3)、核因子κB(NF-κB)],参与天然免疫应答和炎性反应。cGAS-STING通路在感染、炎症及肿瘤发展中起着重要作用,但其在DN中的作用尚不明确。本文系统总结了近年来cGAS-STING信号通路在DN发病机制中的研究进展。

干扰素基因刺激蛋白与脓毒症的研究进展

干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferons genes,STING)作为一种重要的衔接蛋白,可诱导Ⅰ型干扰素和促炎细胞因子的分泌,并在固有免疫和炎症调节过程中发挥关键作用。最近的研究表明,STING的过度激活与各种炎症性疾病有关,包括脓毒症和脓毒性休克。本文主要对STING在脓毒症细胞死亡和凝血功能异常中作用的研究进展进行综述。

鸡干扰素基因刺激因子cDNA克隆及生物信息学分析

试验旨在利用RT-PCR方法扩增鸡干扰素基因刺激因子CDs区,回收产物转化DH5α感受态细胞后提取质粒送测序,并根据测序结果对其进行生物信息学预测分析。结果显示鸡干扰素基因刺激因子基因CDs区为1140bp,编码379个氨基酸。同源性比对和系统进化分析显示,鸡干扰素基因刺激因子基因与环颈雉、火鸡、盔珠鸡等禽类同源性较高。生物信息学分析结果表明干扰素基因刺激因子蛋白理论分子量为42.6kD,平均亲水指数为-0.041,无信号肽,存在1个跨膜区;干扰素基因刺激因子蛋白主要定位于内质网。α-螺旋(54.62%)是主要的二级结构。该研究成功克隆了鸡干扰素基因刺激因子基因CDs区,并利用生物信息学软件对其进行了生物信息学分析预测,试验结果为进一步探讨鸡干扰素基因刺激因子在先天免疫中的生物学功能及抗病毒作用的分子机制提供了理论依据。

泛素化修饰对干扰素基因刺激因子介导的固有免疫信号通路的调控

自20世纪70年代发现泛素可以调节蛋白降解过程后,科研人员针对泛素化修饰相关问题开展了一系列研究。目前已阐明泛素是一种多功能的分子标志物,它可以通过蛋白酶体依赖与非蛋白酶体依赖2种途径来调控各种细胞过程。多聚泛素链与靶蛋白之间不同的连接方式决定了靶蛋白特定的生理和病理功能。近年来研究发现,泛素化修饰在宿主抗胞内RNA或DNA病毒感染的过程中起到了至关重要的作用,而干扰素基因刺激因子(STING)是抗病毒感染中的关键分子。因此,本文主要总结了泛素化修饰对STING调控的研究进展,并讨论了在今后的研究中有待解决的一些关键问题。

干扰素α抑制乙型肝炎病毒复制过程中干扰素刺激基因因子3作用的体外观察

目的研究干扰素刺激基因因子3(ISGF3)在干扰素α(IFN-α)抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制机制中的作用。方法应用定量PCR技术检测IFN-α处理前后人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞上清HBVDNA含量,DNA印迹法检测IFN-α处理前后HepG2.2.15细胞内HBV复制中间体的变化,蛋白质印迹法检测IFN-α处理前后HepG2和HepG2.2.15细胞中ISGF3的3个组分即信号转导和转录活化因子(STAT)1、磷酸化STAT2和ISGF3γ以及双链RNA依赖蛋白激酶(PKR)蛋白质表达水平的改变。用酪氨酸酶抑制剂染料木黄酮抑制IFN-α作用后,再次进行上述检测。结果IFN-α处理后,HepG2.2.15细胞上清HBVDNA和细胞内HBV复制中间体减少,HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达水平均升高。加染料木黄酮抑制IFN-α后,HepG2.2.15细胞上清HBVDNA和复制中间体无减少,而HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达均减少。结论ISGF3是IFN-α抑制HBV复制的关键因子。

干扰素基因刺激因子激动剂的研究进展

干扰素基因刺激因子(STING)是机体自身免疫应答过程中的重要分子。鉴于STING被激活后可活化CD8+T细胞的作用机制,STING激动剂与免疫检查点抑制剂的联合疗法具有良好的临床应用前景。本文对STING激动剂的结构类型、作用模式和结构修饰研究进展进行了总结,在此基础上对该类激动剂的研发趋势进行了展望,为后续研究提供了参考。

鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究

为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于pET-32a原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE和western blot检测融合蛋白表达产物。在ST细胞/VSV病毒测定系统以细胞病变抑制法滴定该融合蛋白的抗病毒活性;同时用MTT法检测其对鸡淋巴细胞增殖活性的促进作用。结果显示,PCR扩增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因约为1000bp,构建重组表达载体后,诱导表达的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量约55ku,主要存在于破碎菌体的上清中,表达量较高。Westernblot检测结果显示,该融合蛋白分别能够与ChGM-CSF多抗和PoIFNα单克隆抗体特异性结合,其抗病毒比活性约为1.1×10^6IU/mg,并且具有促进鸡淋巴细胞增殖的活性。本研究为rChGM-CSF-PoIFNα1重组融合蛋白的研制及其相关活性的测定提供实验依据。

干扰素基因刺激因子基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响

研究干扰素基因刺激因子(STING)基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响。用CRISPR/Cas9技术敲除猪肺巨噬细胞系(3D4/21)的STING基因,用T7核酸酶检测靶基因敲除效率,用细胞计数试剂盒检测基因敲除细胞的活力,用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组病毒PRV-GFP感染基因敲除细胞,用流式细胞术检测感染细胞的荧光强度,用定量RT-PCR检测PRV的gB、TK基因表达及其感染细胞的IL-1β、IFN-β、ISG15基因转录,用Western blot检测PRV gE蛋白表达水平,用病毒滴定法测定子代病毒滴度。结果显示:设计的3个STING基因外显子2特异sgRNA均能切割3D4/21细胞的靶序列,其中sgRNA3的基因编辑效率最高;对sgRNA1介导STING基因敲除系进行克隆化,获得基因敲除细胞系3株,基因敲除对细胞活力无影响;亲本细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占80.77%,STING基因敲除细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占95.55%;STING基因敲除对PRV基因表达具有促进作用,亲本3D4/21细胞的病毒滴度为106.2 TCID50·0.1 mL^-1,STING基因敲除细胞的病毒滴度为108.3TCID50·0.1 mL^-1,病毒感染细胞的IL-1β、IFN-β和ISG15转录下调明显。STING基因敲除能促进PRV在3D4/21细胞中复制,可能与感染细胞的IL-β、IFN-β和ISG15表达抑制有关。

干扰素诱导蛋白16-干扰素基因刺激因子通路在柯萨奇病毒A6型感染手足口病患儿的表达及其临床意义

目的探索干扰素诱导蛋白16(IFI16)和干扰素基因刺激因子(STING)在柯萨奇病毒A6型(CV-A6)感染手足口病(HFMD)患儿的表达及其临床意义。方法收集2023年5月至8月西安交通大学第二附属医院、西安市儿童医院和西安市中心医院收治的CV-A6感染HFMD患儿外周血标本55例,同时匹配收集同期健康体检儿童血清20例作为对照。入组HMFD患儿根据疾病轻重程度分为轻症、重症患儿。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同严重程度、急性期与恢复期患儿IFI16、环化GMP-AMP合酶(cGAS)、STING、干扰素调节因子3(IRF-3)和α干扰素(IFN-α)的表达水平。结果与对照组相比,轻症CV-A6 HFMD患儿IFI16和STING的表达均升高,而在重症CV-A6 HFMD患儿中则表达下降[15.92(13.34,19.13)ng/ml vs.13.66(11.91,14.83)ng/ml:Z=-2.200、P=0.028;1345.45(991.55,1843.63)pg/ml vs.1072.26(947.25,1180.97)pg/ml:Z=-2.000、P=0.046],仅STING在重症CV-A6型HFMD患儿急性期与恢复期间表达差异具有统计学意义[1072.26(947.25,1180.97)vs.1665.29(1341.62,1961.83):Z=-3.237、P=0.001];与对照组相比,IFN-α在轻症CV-A6 HFMD患儿表达降低[864.47(721.41,952.89)pg/ml vs.715.08(575.41,896.69)pg/ml,Z=-2.054、P=0.040];但cGAS、IRF3在对照组、轻症和重症HFMD患儿间表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。Sperman相关性分析显示,IFI16和STING表达具有正相关性(r=0.286、P=0.013)。临床特征方面,神经受累(病理反射阳性)患儿IFI16(Z=-3.307、P=0.001)和STING(Z=-2.702、P=0.007)水平均低于病理反射阴性患儿,有肢体抽动(Z=-2.489、P=0.013)、精神差(Z=2.542、P=0.011)和高血糖水平(Z=-2.828、P=0.005)患儿的IFI16水平也低于无以上特征的患儿,IFI16与血糖水平也具有负相关性(Sperman相关性分析:r=-0.427、P=0.001)。结论CV-A6感染可激活IFI16-STING通路。IFI16和STING的表达与CV-A6型HFMD的重症化相关联,其较高的表达水平可能是机体抵御重症化的保护因素。

用于肿瘤免疫治疗的干扰素基因刺激因子激动剂的研究进展

肿瘤免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域新的研究热点。除了免疫检查点抑制剂以及细胞免疫疗法取得了巨大的成功外,小分子免疫疗法也正受到越来越多的关注。干扰素基因刺激因子(STING)作为参与固有免疫应答的关键信号转导分子,在防御病毒及胞内细菌感染、介导Ⅰ型干扰素产生和调节体内自发性抗肿瘤免疫反应产生过程中发挥重要功能。本文简要介绍了STING信号通路的生物学机制,按结构分类综述了STING激动剂的研究进展,以期为STING激动剂类药物的设计和发现提供参考。

辐射诱导的小鼠肺泡上皮细胞死亡通过干扰素基因刺激因子通路促进RAW细胞M1型极化研究

目的:探讨细胞中重要的DNA感受器干扰素基因刺激因子(STING)在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)细胞活化中的作用。方法:收集^(60)Co γ射线照射后小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12)的培养上清,对RAW264.7细胞进行刺激,使用蛋白免疫印迹(Western Blot)检测刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测处理后RAW264.7细胞经典激活的巨噬细胞(M1)型和非经典激活的巨噬细胞(M2)型相关细胞因子的表达水平。结果:Western Blot检测结果显示,刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达水平显著上调;ELISA检测结果表明,刺激后RAW264.7细胞上清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)显著增加;脱氧核糖核酸酶I(DNase I)处理能够抑制RAW264.7细胞中STING通路的激活。ELISA检测结果表明,DNase I能够抑制RAW264.7细胞向M1型极化。结论:辐射诱导的MLE-12细胞死亡能够释放DNA,从而激活RAW264.7细胞中的环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-STING信号通路,进而促进其向M1型极化。

环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子信号通路与非感染性炎性疾病的相关性研究进展

作为胞质中的DNA感受器,环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)能够识别细胞质内的异常DNA,激活干扰素基因刺激因子(STING),影响机体的免疫反应。近年研究发现在非感染性炎性疾病中该通路可通过促进Ⅰ型干扰素和干扰素刺激基因的表达发挥作用。本文就cGAS-STING通路在多个系统的非感染性炎性疾病中的激活与调控及其对疾病的发生发展的影响进行综述,为其在非感染性炎性疾病相关的应用研究提供借鉴。

慢性乙型肝炎患者肝组织干扰素刺激基因(STING/TMEM173)蛋白表达及其与肝脏炎症等级的相关性

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织干扰素刺激基因/跨膜蛋白173(STING/TMEM173)的表达及分布与肝脏炎症等级相关性,并在体外细胞初步探讨可能存在的机制。方法采用免疫组织化学染色法检测62例未经过抗病毒治疗的CHB患者肝组织STING/TMEM173蛋白表达,显微镜下观察STING/TMEM173蛋白在肝组织表达情况,同时采用秩和检验和Spearman相关系数分析STING/TMEM173表达与肝脏炎症等级及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的相关性。Western blot法分析细胞内瞬时和稳定转染HBV全基因组质粒前后HepG2细胞中STING/TMEM173蛋白的变化;以含有完整的HBV病毒颗粒的HepG2.2.15细胞上清液刺激健康人群外周血单个核细胞,实时荧光定量PCR技术检测STING/TMEM173基因表达。结果STING/TMEM173蛋白在CHB患者肝组织高表达,且主要表达于肝组织炎症细胞,而肝细胞却未见表达。患者肝组织STING/TMEM173蛋白表达与肝脏炎症等级呈显著正相关,且在ALT升高的患者的肝组织STING/TMEM173表达升高。瞬时和稳定转染HBV全基因组质粒后,HepG2细胞中STING/TMEM173蛋白显著下降。此外,含有完整的HBV病毒颗粒的HepG2.2.15细胞上清液呈剂量依赖性促进外周血单个核细胞表达STING/TMEM173。结论HBV可上调肝组织炎症细胞STING/TMEM173蛋白的表达,而表达STING/TMEM173蛋白的肝脏炎症细胞数量可反应肝脏炎症的严重程度。