膜醭毕赤酵母KD-KD-316316-3复合保鲜液的抑菌机制与初步应用

该研究制备一种含108 CFU/mL膜醭毕赤酵母KD-316-3(Pichia membranaefaciens KD-316-3)的海藻糖基复合保鲜液,以果实黑斑病菌链格孢霉菌(Alternaria species)为对象进行离体抑菌研究,并进行复合保鲜液的冬枣应用保鲜试验,用以探究复合保鲜液的抑菌机制和应用效果。试验结果表明,在离体条件下,复合保鲜液处理能抑制病原链格孢霉菌的生长,拮抗效率26.48%,使病原菌菌丝生长畸形,电解质外渗,菌丝体核酸泄漏,胞内可溶性蛋白含量降低;在冬枣贮藏过程中,复合保鲜液能抑制冬枣果实失重率的上升,有效减缓冬枣果实的病斑腐烂,对果实丙二醛含量及多酚氧化酶活性也产生明显影响,提高过氧化物酶活性。综合分析,使用膜醭毕赤酵母KD-316-3复合保鲜液处理冬枣果实可抑制病原菌引起的腐烂,维持果实良好品质。

膜醭毕赤酵母挥发性物质对灰葡萄孢菌的抑菌活性及组分分析

为探究膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)对采后灰葡萄孢菌的抑菌机制,该研究对其挥发性物质进行了抑菌活性与抑菌机制分析。结果表明,灰葡萄孢菌被挥发性物质熏蒸48 h时,菌丝长势明显受阻,抑制率高达72.41%,其产孢量始终低于空白组(P<0.05)。经熏蒸后72 h,菌丝体细胞膜内核酸、蛋白质的大量外泄(P<0.05)改变了细胞膜的通透性,同时,通过扫描电镜观察到处理过的菌丝表面出现干瘪、皱缩甚至部分菌丝胞内的内容物渗漏。有伤接种实验证明熏蒸处理的番茄果实病斑直径仅为(1.47±0.16)cm,显著低于空白对照组。利用顶空固相微萃取-气质联用法(headspace solid-phase microextraction gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分离鉴定到20种挥发性物质,主要组分为醇类(39.26%)、酮类(24.72%)和有机酸类物质(8.51%)。上述结果为研究酵母菌防控采后果蔬腐烂提供了理论依据,为生防菌的安全防腐策略提供新思路。

茉莉酸甲酯提高膜醭毕赤酵母对杨梅果实采后绿霉病生防效力的研究

研究了茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)复合膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)处理对"乌种"杨梅果实由桔青霉(Penicillium citrinum)引起的绿霉病的抑制效果,同时分析了MeJA对酵母菌和病原菌生长以及果实抗病性的影响。结果显示:MeJA可有效提升P.membranefacien生防效力,10μmol/L MeJA与1×109CFU/mL P.membranefacien菌悬液的复合处理比单一处理能更有效抑制杨梅果实绿霉病的发生;该复合处理也更为显著的诱导了杨梅果实抗病相关酶活性的上升;此外,MeJA还可直接提高P.membranaefaciens在NYDB培养基和杨梅果实伤口处的数量,但MeJA对病原菌P.citrinum生长无抑制效果。这些结果表明,MeJA主要是通过直接促进拮抗酵母生长以及间接诱导果实抗病性来提升P.membranaefaciens生防效力,从而起到有效抑制杨梅果实采后腐烂的作用。

膜醭毕赤酵母对草莓采后灰霉病抗病性的诱导

研究拮抗菌膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)对草莓采后灰霉病的控病效果,同时从诱导抗病性的角度探讨膜醭毕赤酵母对草莓灰霉病的生物防治机理。结果表明:酵母的浓度与控病效果有关,浓度越高,控病效果越好,1×107CFU/mL酵母悬浮液对草莓采后灰霉病有显著的控制效果,且不会对果实表皮造成损伤。拮抗酵母菌通过诱导草莓果实β-1,3-葡聚糖酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶等抗性相关酶活性的增强,提高了果实对灰霉病的抵抗能力。结果说明了膜醭毕赤酵母能够用于控制草莓果实采后灰霉病,诱导果实抗病性是其作用机制之一。

膜醭毕赤酵母真空干燥制剂对热环境耐受力的提高

采用热处理、过氧化氢处理以及在酵母培养基中添加氯化钠、氯化钙等预处理方式提高膜醭毕赤酵母(Pichia membranifaciens)对逆境的耐受力,以此提高真空干燥后膜醭毕赤酵母的活性。对膜醭毕赤酵母进行40℃、40 min热处理后,膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖含量升高,真空干燥后,经热处理后的膜醭毕赤酵母较对照组活性更高。5 mmol/L过氧化氢对膜醭毕赤酵母处理40 min后,膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖含量升高,真空干燥后,经过氧化氢处理后的膜醭毕赤酵母较对照组活性更高。在培养基中添加0.1～0.9 mol/L氯化钠,1～10 mmol/L氯化钙均能诱导膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖含量的显著提高,其中添加0.7 mol/L氯化钠后诱导的膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖产生量最高,添加0.9 mol/L次之,添加5 mmol/L氯化钙后诱导的膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖产生量最高;不添加任何保护剂时,添加0.7 mol/L和0.9 mol/L氯化钠培养后的膜醭毕赤酵母经真空干燥后活性较未添加氯化钠的对照组高;添加5 mmol/L氯化钙培养后的膜醭毕赤酵母经真空干燥后较未添加氯化钙的对照组活性高。在添加保护剂时,添加不同浓度氯化钠处理和添加不同浓度氯化钙处理后的膜醭毕赤酵母干燥后活性与对照组基本没有显著性差异,说明添加氯化钠或氯化钙培养后的膜醭毕赤酵母在真空干燥过程中,保护剂对其活性的影响更大。

CO_2胁迫对膜醭毕赤酵母细胞膜通透性的影响

膜醭毕赤酵母是传统盐渍菜腌制发酵过程中形成菌醭的主要微生物之一。以膜醭毕赤酵母为研究对象,通过测定CO2胁迫处理后膜醭毕赤酵母上清液中电导率、蛋白质、核酸、丙二醛(MDA)的含量以及荧光强度,研究其对膜醭毕赤酵母细胞膜通透性的影响。结果表明,CO2胁迫处理使毕赤氏酵母菌浮液的电导率及其内部的蛋白质、核酸、MDA含量以及荧光强度都比对照的高,说明这些物质在CO2胁迫处理时一部分已泄漏到胞外,反映了经CO2胁迫处理后酵母细胞通透性发生了改变,从而导致了部分膜醭毕赤酵母的死亡。

膜醭毕赤酵母和壳聚糖复合处理对柑橘果实炭疽病的诱导抗病性（英文）

以‘锦橙447’为试材,研究了膜醭毕赤酵母和壳聚糖复合处理对柑橘果实采后炭疽病的防治效果,以及在接种炭疽菌的情况下诱导柑橘果实抗病性的机制。结果表明:1×10~8 cells/mL的膜醭毕赤酵母和0.1 g/L的壳聚糖单独处理均能够有效抑制柑橘果实炭疽病的发病率,而复合处理的防治效果更好。膜醭毕赤酵母和壳聚糖复合处理能够增加NO、水杨酸、H_2O_2等信号物质的含量;提高苯丙烷代谢中间产物阿魏酸、对香豆酸、绿原酸的含量,相关防御酶如苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸-4-羟基化酶、4-香豆酸:辅酶A连接酶、过氧化物酶、多酚氧化酶的活力;以及病程相关蛋白如几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活力。该研究结果表明,膜醭毕赤酵母与壳聚糖复合处理可通过增强柑橘的抗病性来提高柑橘炭疽病的防治效果。

膜醭毕赤酵母结合杀菌剂对柑橘果实采后病害的控制效果

探究膜醭毕赤酵母与低剂量杀菌剂(多菌灵、甲基硫菌灵)结合使用对柑橘采后病害的防治效果。通过筛选能与膜醭毕赤酵母结合使用的杀菌剂,考察柑橘常见病原菌对杀菌剂的敏感性,继而在果实上验证结合处理对柑橘采后病害的防治效果。离体实验的结果表明,多菌灵和甲基硫菌灵对酵母生长无抑制作用;柑橘青霉菌、绿霉菌和炭疽菌对两种杀菌剂敏感性不同,但半数抑制浓度(EC50值)均小于建议剂量的1%。果实活体实验的研究结果表明,膜醭毕赤酵母结合低剂量的多菌灵或甲基硫菌灵对柑橘果实青霉病、绿霉病的防治效果均好于膜醭毕赤酵母和低剂量杀菌剂单独处理;但膜醭毕赤酵母结合低剂量的甲基硫菌灵对夏橙果实接种炭疽病的防治效果不佳。同时,膜醭毕赤酵母结合低剂量的多菌灵或甲基硫菌灵对夏橙果实自然发病率的控制呈增效作用,对锦橙果实自然发病率的控制呈叠加作用,两种结合处理均能保证夏橙和锦橙的好果率。

膜醭毕赤酵母对侵染苹果的扩展青霉拮抗作用研究

通过牛津杯法测定不同浓度膜醭毕赤酵母对扩展青霉体外抑制作用,将扩展青霉分别接入膜醭毕赤酵母和无菌水处理(对照组)的苹果,统计发病率和病变直径,结合顶空气相色谱-离子迁移谱(HS-GC-IMS)检测膜醭毕赤酵母拮抗组和对照组苹果的挥发性物质。结果表明,酵母在10^(8) CFU/mL时抑菌圈最大(25.4 mm),并能显著抑制扩展青霉的孢子萌发率和芽管长度。培养10 d,酵母拮抗组的苹果发病率为10.6%,显著低于对照组(92.2%)。HS-GC-IMS共定性出38种挥发性成分,主要为酯类及醇醛化合物。对照组中丙酸乙酯、苯乙烯等含量显著高于酵母拮抗组。10^(8) CFU/mL膜醭毕赤酵母细胞悬浮液能够明显抑制扩展青霉和有效防治苹果采后青霉病。

膜醭毕赤酵母和BTH结合使用对桃果实青霉病的抑制效果

本文研究了0.2 g·L-1苯比噻二唑(BTH)提高膜醭毕赤酵母对桃果实采后青霉病的抑制作用效果。结果表明,0.2 g·L-1BTH能够增强膜醭毕赤酵母对扩展青霉菌诱发的桃果实青霉病的生物防治活性。二者结合使用,对青霉病的抑制作用比单独使用膜醭毕赤酵母或BTH更有效。这种复合处理对超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、抗坏血酸过氧化物酶、几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶活性具有协同增效作用,这种作用可以诱发果实产生更强的抗病性,降低青霉菌对桃果实的伤害。而且使用这种复合处理方法,在20℃下贮藏6 d内,可很好地保持桃果实的硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸和VC含量。说明使用BTH是增强膜醭毕赤酵母生物防治活性的一种有效方法。

膜醭毕赤酵母产尿酸酶培养条件的选择

膜醭毕赤酵母产尿酸酶培养条件的选择公卫学院卫生化学教研室陈文华，刘彦成大庆市第五医院内科蔡福祥，李贵平临床上测定生物样品中尿酸的含量，能辅助诊断肾炎、痛风、慢性白血病、多发性骨髓瘤等疾病。尿酸酶专一性强，反应效率高，因此，现在常用酶法诊断试剂盒检测尿...

膜醭毕赤酵母对杨梅果实采后绿霉病的抑制与抗病性的诱导

为研究膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)对杨梅果实绿霉病的抑制及其对抗病性的诱导作用,将杨梅果实先接种15μL浓度为1×109cfu/mL的膜醭毕赤酵母菌悬液,风干1h后再接种15μL的1×105cfu/mL的桔青霉(Penicillium citrinum)孢子悬浮液,然后转入(1±1)℃下贮藏8d,每隔2d测定果实腐烂率、病斑直径、抗病相关酶几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性以及总酚含量;同时分析了离体条件下P.membranaefaciens对P.citrinum孢子萌发和芽管伸长的影响。结果显示,P.membranaefaciens可显著抑制果实贮藏期间绿霉病的发生,并可诱导几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、PAL、POD和PPO活性和总酚含量的升高;同时P.membranaefaciens在离体条件下也明显抑制病原菌的生长。因此,P.membranaefaciens抑制杨梅果实采后腐烂与直接抑制病原菌生长以及间接诱导抗病性密切相关。

离子液体中酵母细胞不对称还原合成(R)-3-羟基丁酸乙酯

采用疏水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM]PF6)与缓冲液构成的两相体系,在其中进行了膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens Hansen)细胞催化乙酰乙酸乙酯(EOB)不对称还原,制备光学活性的(R)-3-羟基丁酸乙酯(R-EHB)。系统地考察了一些因素,如离子液体浓度、缓冲液pH、辅助底物种类和浓度、反应温度、底物浓度、菌体浓度和转化时间等对该反应的影响。结果表明,上述因素对反应的产率和产物光学纯度影响较大。较佳的生物还原反应条件为:[BMIM]PF6体积分数20%,辅助底物为80g·L-1葡萄糖,pH7.8,反应温度30℃,底物乙酰乙酸乙酯浓度0.5mol·L-1,菌体浓度280g·L-1,转化18h。在此优化条件下,反应产率达72.2%,R-EHB对映体过量值为70.3%。与单一水相体系和正己烷-缓冲液两相体系相比较,在[BMIM]PF6-缓冲液两相体系中进行EOB的生物不对称还原可有效减少底物抑制,提高反应效率。

蜜橘酸腐病病原菌的分离鉴定以及不同抑菌剂处理对其控制效果

为确定蜜橘果实酸腐病的致病菌及膜醭毕赤酵母、水杨酸和壳寡糖对蜜橘果实采后酸腐病的控制效果,从自然发病的蜜橘果实上分离出一株致病真菌,通过形态学特征、rDNA-ITS分析以及致病性检测,发现该真菌为蜜橘白地霉(Geotrichum candidum)。离体实验发现2.5 mmol/L水杨酸、质量分数1.5%壳寡糖处理能够抑制白地霉孢子萌发和菌丝的生长,膜醭毕赤酵母产生的挥发性物质能够抑制白地霉菌丝的生长。果实上的实验结果表明,1×10~8 CFU/m L膜醭毕赤酵母、2.5 mmol/L水杨酸、1.5%壳寡糖同孔接种和异孔接种处理均能够有效抑制蜜橘果实酸腐病的发病率和病斑直径的上升,其中同孔处理膜醭毕赤酵母效果最好,异孔处理水杨酸效果最好。

不同保鲜剂对柑橘果实贮藏品质的影响

以纽荷尔脐橙、奉节72-1脐橙、夏橙3种柑橘果实为研究对象,分别在复合有2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)的壳寡糖、"活力鲜"保鲜剂、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)以及低剂量多菌灵+膜醭毕赤酵母4种处理液中浸泡后,晾干套袋,室温、低温(5℃)下贮藏,观察发病和品质变化情况。结果表明,与对照相比,各保鲜剂处理对柑橘果实都有不同程度的病害控制效果,其中"活力鲜"保鲜剂复合2,4-D处理效果最佳;多菌灵复合膜醭毕赤酵母和2,4-D处理的保鲜效果优于膜醭毕赤酵母复合2,4-D处理;各保鲜剂处理对果实可溶性固形物(Total Soluble Solid,TSS)、可滴定酸(Titratable Acid,TA)含量无明显影响;低温可显著延缓果实TSS含量、TA含量和重量的降低。

拮抗菌Pichiame mbrane faciens与病原菌Rhizopus stolonifer在桃果实伤口处的拮抗作用(英文)

膜醭毕赤酵母 (PichiamembranefaciensHansen)是本实验室从果实上分离获得的一种能有效防治桃果实采后软腐病的拮抗菌。本文将P .membranefaciens与葡枝根霉 (Rhizopusstolonifer)在桃果实伤口部位共培养 2 4h后 ,用扫描电子显微镜观测了它们的拮抗作用。结果表明 ,在有病原菌的地方聚集了大量的酵母拮抗菌 ,而且拮抗菌紧密地吸附在病原菌的菌丝体上。结合以前的研究结果可以推断 ,P .membranefaciens主要通过与病原菌进行营养和空间的竞争 ,紧密地吸附在病原菌菌丝体上分泌能降解病原菌细胞壁的水解酶 (如几丁质酶和 β_1,3_葡聚糖酶 ) ,并可能诱导寄主产生抗性 ,从而抑制桃软腐病的发生。

不对称还原制备(R)-3-羟基丁酸乙酯酵母菌株的选育

从5株酵母菌中优选出可用于乙酰乙酸乙酯（EAA）不对称还原为（R）-3-羟基丁酸乙酯的高转化活力菌株膜醭毕赤酵母-218，以其为出发菌株经紫外诱变处理，并结合底物抗性筛选，获得较佳菌株PC-126，该菌株相对酶活力和e．e．值（对映体过量值）分别比出发菌株提高39％和11％。由该突变株的底物耐受性研究表明，底物浓度可提高至0．35mol／L。同时考察了PC-126菌株在5L发酵罐中的产酶过程和转化时间曲线，结果表明，最佳菌体培养时间为14～16h，酶活力可达111．7U／L，不对称还原反应转化时间为16h，产率可达70．8％，e．e．值可达80．5％。

混合发酵法生产L-苹果酸的工艺研究及浅析

采用华根霉和毕赤酵母菌株混合培养发酵生产L-苹果酸,分别探讨了葡萄糖浓度、华根霉接种量、混合培养方式和聚乙二醇添加量对发酵生产L-苹果酸的影响。通过正交实验确定了发酵条件的最优组合:葡萄糖浓度140.0g/L,华根霉接种量为发酵液的10.0%,混合培养方式是先在往复摇床上培养3d,再在旋转摇床上培养2d,然后接入毕赤酵母继续培养5d,聚乙二醇的添加量为10.0%。在最优条件下,L-苹果酸产酸水平达78.9g/L,对投糖浓度的摩尔转化率为87.4%。

防治果蔬采后病害的生物杀菌剂及其专用菌株

该发明专利是一种防治果蔬采后病害的生物杀菌剂及其专用菌株。