地榆皂苷Ⅰ对大鼠膝骨关节炎的作用机制研究

目的研究地榆皂苷Ⅰ对大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法选择SD雄性乳鼠8只,提取乳鼠软骨细胞,采用CCK-8实验检测细胞增殖率以确定最佳药物浓度。将软骨细胞随机分为对照组、炎症组和治疗组,对照组在完全培养基中进行培养,炎症组在含有10μg/mL白细胞介素-1β(IL-1β)的培养基中培养,治疗组在含有10μg/mL IL-1β和最佳浓度地榆皂苷Ⅰ的培养基中培养。采用Calcein-AM/PI染色观察各组软骨细胞生长情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组软骨细胞中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶13(MMP13)mRNA相对表达量。取8周龄左右的SD雄性大鼠24只随机分为对照组、炎症组和治疗组,每组8只,对炎症组和治疗组建立骨关节炎模型,建模完成4周后,炎症组和对照组的关节腔内注射等体积生理盐水,治疗组的关节腔内注射100μL最佳浓度的地榆皂苷Ⅰ溶液,1次/周,连续给药4周。采用HE染色和番红O-固绿染色观察各组膝关节组织结构。采用免疫组化染色观察各组膝关节组织中IL-6、MMP13蛋白表达情况。结果CCK-8实验结果显示,各实验浓度均未表现明显细胞毒性,当地榆皂苷Ⅰ的浓度为20 mg/L时,软骨细胞增殖率最高。Calcein-AM/PI染色结果显示,炎症组和治疗组细胞增殖率低于对照组,治疗组细胞增殖率高于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示,炎症组和治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量高于对照组,治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量低于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色和番红O-固绿染色结果显示,对照组的膝关节组织结构比炎症组和治疗组完整,与炎症组相比,治疗组膝关节组织损伤有所减轻。免疫组化染色结果显示,炎症组IL-6、MMP13蛋白表达水平最高,治疗组IL-6、MMP13蛋白表达水平高于对照组。结论地榆皂苷Ⅰ可通过维持软骨细胞活力、降低炎症因子的释放以及减少软骨细胞外基质(ECM)的降解发挥抗炎作用,对膝骨关节炎有一定的药用潜力。

大鼠滑膜组织中S100A12、IL-1β、Galectin-3与早期膝骨关节炎相关性研究

目的检测早期膝骨关节炎大鼠滑膜组织中的S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达,探讨大鼠滑膜组织中三种炎性细胞因子与早期膝骨关节炎相关性的研究。方法 28只成年雄性Wistar大鼠,随机数字表法分成对照组、实验组。实验组大鼠采用左膝关节腔内注射木瓜蛋白酶诱导早期膝骨关节炎;对照组大鼠相同方法及部位注射等量生理盐水。分别于造模成功后第1、28天提取大鼠滑膜组织,采用免疫组化法和酶联免疫吸附法检测滑膜组织中的S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达。结果①实验组造模成功后第1天检测S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②实验组造模成功后第28天检测S100A12、IL-1β水平表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但Galectin-3水平表达仍较明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论滑膜组织中S100A12、IL-1β、Galectin-3三种炎性细胞因子均与早期膝骨关节炎密切相关,为临床早期诊断膝骨关节炎提供理论依据,同时明确Galectin-3在早期膝骨关节炎病情进展中的持续表达。