基于“腠理开阖”理论的黑膏药对寒凝血瘀证膝骨关节炎模型家兔血管反应性研究

目的:通过寒凝血瘀证膝骨关节炎模型家兔的血管反应性研究,评价黑膏药促“腠理开阖”的作用机制。方法:选用寒凉刺激与药物诱导结合技术制备寒凝血瘀证膝骨关节炎家兔模型,采用彩色多普勒超声技术并辅以血液流变学指标,密切观察家兔膝周动脉网(股动脉下段、膝上外侧动脉和膝下外侧动脉)血管效应,考察0~15 d三个厂家狗皮膏(厂家一组、厂家二组和厂家三组)与黑膏药基质(基质组)对膝周动脉网的管径、血流速度及血液流变学指标的影响。结果:15 d治疗周期后,厂家一组、厂家二组、厂家三组和基质组家兔股动脉下段、膝上外侧动脉和膝下外侧动脉血管管径均有增加,流速均有提高,全血黏度、红细胞聚集指数均呈现降低趋势,红细胞变形指数呈现升高趋势。结论:黑膏药基质与狗皮膏均表现出显著的诱发膝周动脉网血管效应的作用,提示在促进“腠理开阖”方面,黑膏药基质同样起到了关键作用。

独活寄生汤干预食蟹猴自发性膝骨关节炎模型炎症的作用

背景:Meta分析显示:独活寄生汤可改善膝骨关节炎患者的临床症状,缓解患者的疼痛,但具体的作用机制与途径还不十分清楚。目的:进一步验证独活寄生汤药物治疗食蟹猴自发性膝骨关节炎模型疗效。方法:自然条件下,从12只食蟹猴选取清洁级青年型(年龄3-5岁)6只食蟹猴为正常组,老年型(年龄≥20岁)食蟹猴建立自发性膝骨关节炎模型6只为模型组;再将老年型食蟹猴随机分为模型对照组和干预组,干预组采用独活寄生汤进行干预,对比两组间全血白细胞计数、C-反应蛋白、血沉,以及关节液性状和肿瘤坏死因子α的表达变化。结果与结论:(1)老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型会出现典型与人类相似的骨关节炎相关指标的改变;(2)独活寄生汤干预可下调肿瘤坏死因子α的表达,降低全血白细胞水平、C-反应蛋白,干预前后差异有统计学意义;(3)结果说明,老年型食蟹猴自发性膝骨关节炎模型是一个能有效模拟人类自发性膝骨关节炎发生发展的动物模型,独活寄生汤干预可能通过抑制肿瘤坏死因子α的表达,降低关节软骨的炎症因子水平,从而缓解膝骨关节炎病程,产生治疗作用;全血白细胞水平、C-反应蛋白可作为疗效判断的重要参考指标。

食蟹猴自发性膝骨关节炎模型的中药干预实验

目的分析独活寄生汤干预对食蟹猴自发性膝骨关节炎(KOA)模型炎症调节的作用,为进一步药物治疗的疗效检验及安全性评估提供可靠保证。方法选取清洁级青年型和老年型食蟹猴各6只,对食蟹猴自发性KOA模型进行评价;将老年型食蟹猴随机分为干预组和空白对照组,采用独活寄生汤进行干预,对比两组全血白细胞、C反应蛋白、红细胞沉降率及关节液性状和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量的表达变化。结果老年型食蟹猴自发性KOA模型会出现典型与人类相似的骨关节炎相关指标改变。独活寄生汤干预可下调TNF-α表达,降低全血白细胞、C反应蛋白水平,干预前后差异有统计学意义(P<0. 05)。结论老年型食蟹猴自发性KOA模型能有效模拟人类自发性KOA发生发展;独活寄生汤干预可能通过抑制TNF-α的表达,降低关节软骨的炎症因子水平,从而缓解KOA病程,产生治疗作用;全血白细胞、C反应蛋白可作为疗效判断的重要参考指标。

三种方法制备兔膝骨关节炎模型的结果分析

目的:寻找一种稳定、方便、快捷的膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)模型制备方法,用以研究KOA的病理机制及防治手段,并为后期科研提供相应理论依据。方法:将24只新西兰大白兔随机分为手术组、制动组、木瓜蛋白酶组、空白组,每组6只。对比模型组(手术组、制动组、木瓜蛋白酶组)家兔造模后与空白组Pelletier评分、Mankin’s评分以及血清及关节液中炎性因子[白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α]的含量水平。结果(:1)大体观察模型组实验兔均出现不同程度的关节僵硬、肿胀,股四头肌萎缩,解剖膝关节均可见股骨内外髁软骨颜色变灰白,软骨面光泽度降低,软骨面有不同程度粗糙、糜烂、溃疡形成,关节周缘骨刺形成;(2)模型组Pelletier评分、Mankin’s评分、血清及关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均高于空白组(P<0.01),模型组与空白组的差异具有统计学意义(P<0.05);(3)关节腔内注射木瓜蛋白酶制备兔KOA模型更方便快捷,短期内效果更佳,木瓜蛋白酶组血清及关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α含量高于手术组、制动组(P<0.05),木瓜蛋白酶组与手术组、制动组的差异具有统计学意义(P<0.05);(4)手术、关节制动制备较为复杂并存在较多局限性,如手术感染,重新固定等问题,但可以反映真实状况下KOA的发生发展情况。结论:不同造模方法各有优缺点,现阶段仍未有系统且全面的定论。因此,应根据不同造模方法的优缺点结合后续研究来选择合适的动物疾病模型。

地榆皂苷Ⅰ对大鼠膝骨关节炎的作用机制研究

目的研究地榆皂苷Ⅰ对大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法选择SD雄性乳鼠8只,提取乳鼠软骨细胞,采用CCK-8实验检测细胞增殖率以确定最佳药物浓度。将软骨细胞随机分为对照组、炎症组和治疗组,对照组在完全培养基中进行培养,炎症组在含有10μg/mL白细胞介素-1β(IL-1β)的培养基中培养,治疗组在含有10μg/mL IL-1β和最佳浓度地榆皂苷Ⅰ的培养基中培养。采用Calcein-AM/PI染色观察各组软骨细胞生长情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组软骨细胞中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶13(MMP13)mRNA相对表达量。取8周龄左右的SD雄性大鼠24只随机分为对照组、炎症组和治疗组,每组8只,对炎症组和治疗组建立骨关节炎模型,建模完成4周后,炎症组和对照组的关节腔内注射等体积生理盐水,治疗组的关节腔内注射100μL最佳浓度的地榆皂苷Ⅰ溶液,1次/周,连续给药4周。采用HE染色和番红O-固绿染色观察各组膝关节组织结构。采用免疫组化染色观察各组膝关节组织中IL-6、MMP13蛋白表达情况。结果CCK-8实验结果显示,各实验浓度均未表现明显细胞毒性,当地榆皂苷Ⅰ的浓度为20 mg/L时,软骨细胞增殖率最高。Calcein-AM/PI染色结果显示,炎症组和治疗组细胞增殖率低于对照组,治疗组细胞增殖率高于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示,炎症组和治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量高于对照组,治疗组IL-6、MMP13 mRNA相对表达量低于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色和番红O-固绿染色结果显示,对照组的膝关节组织结构比炎症组和治疗组完整,与炎症组相比,治疗组膝关节组织损伤有所减轻。免疫组化染色结果显示,炎症组IL-6、MMP13蛋白表达水平最高,治疗组IL-6、MMP13蛋白表达水平高于对照组。结论地榆皂苷Ⅰ可通过维持软骨细胞活力、降低炎症因子的释放以及减少软骨细胞外基质(ECM)的降解发挥抗炎作用,对膝骨关节炎有一定的药用潜力。

马钱子总碱对兔膝骨关节炎模型软骨损伤修复作用及机制

目的探讨马钱子总碱对兔膝骨Hulth-Telhag关节炎模型的作用及机制。方法新西兰兔随机分为正常对照组,模型组,假手术组,马钱子总碱高、中、低剂量组,玻璃酸钠组,每组8只。除正常对照组外,其余各组均以Hulth-Telhag方法造模。造模8周后,马钱子总碱高、中、低剂量组分别给予兔每个膝关节腔注射0.3、0.2、0.1mL马钱子总碱注射液,玻璃酸钠组给予兔每个膝关节腔注射0.2mL玻璃酸钠,每周2次,连续用药5周。正常对照组、模型组及假手术组常规饲养,无其他特殊处理。停药1周后光镜观察关节软骨病理改变和Mankin′s评分,血液流变仪检测全血黏度(低切、中切、高切)及血浆黏度,ELISA检测关节液NO、SOD、过氧化脂质(LPO)及尿液吡啶酚(PYD)含量。结果与正常对照组比较,模型组Mankin′s评分、全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05)。与模型组比较,马钱子总碱高、中剂量组及玻璃酸钠组Mankin′s评分降低(P<0.05);各给药组全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05)。马钱子总碱中剂量组较低剂量组中、高切变率全血黏度、SOD升高(P<0.05),NO、LPO及PYD降低(P<0.05);马钱子总碱高剂量组较中剂量组全血黏度、血浆黏度升高(P<0.05),NO、LPO及PYD降低(P<0.05),SOD升高(P<0.05)。与玻璃酸钠组比较,马钱子总碱低剂量组Mankin′s评分、NO、LPO及PYD升高(P<0.05),SOD降低(P<0.05);马钱子总碱中剂量组Mankin′s评分、SOD降低(P<0.05),NO、LPO及PYD升高(P<0.05);马钱子总碱高剂量组Mankin′s评分、全血黏度及血浆黏度升高(P<0.05)。结论马钱子总碱对骨关节炎的软骨损伤具有修复作用,其机制主要与通过SOD途径抑制NO介导的软骨细胞凋亡有关,还与改善软骨代谢有关。

大鼠滑膜组织中S100A12、IL-1β、Galectin-3与早期膝骨关节炎相关性研究

目的检测早期膝骨关节炎大鼠滑膜组织中的S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达,探讨大鼠滑膜组织中三种炎性细胞因子与早期膝骨关节炎相关性的研究。方法 28只成年雄性Wistar大鼠,随机数字表法分成对照组、实验组。实验组大鼠采用左膝关节腔内注射木瓜蛋白酶诱导早期膝骨关节炎;对照组大鼠相同方法及部位注射等量生理盐水。分别于造模成功后第1、28天提取大鼠滑膜组织,采用免疫组化法和酶联免疫吸附法检测滑膜组织中的S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达。结果①实验组造模成功后第1天检测S100A12、IL-1β、Galectin-3水平表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②实验组造模成功后第28天检测S100A12、IL-1β水平表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但Galectin-3水平表达仍较明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论滑膜组织中S100A12、IL-1β、Galectin-3三种炎性细胞因子均与早期膝骨关节炎密切相关,为临床早期诊断膝骨关节炎提供理论依据,同时明确Galectin-3在早期膝骨关节炎病情进展中的持续表达。

去势大鼠劳损性膝骨关节炎新模型的建立

目的:通过模拟女性膝骨关节炎的主要病因,建立新动物模型,为进一步研究该病的机制奠定基础。方法:24只8月龄雌性SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组和去卵巢组3组:去卵巢组大鼠行双侧卵巢切除术,假手术对照组切除卵巢周围脂肪组织,3组大鼠术后开展动物跑台运动训练。7周后处死,取膝关节及血清行组织学及免疫学分析。结果:去卵巢组大鼠膝关节呈现中度软骨损伤,与空白对照组比较,去卵巢组血清中iNOS浓度显著升高,(P<0.05)、SOD浓度显著下降(P<0.05);与假手术对照组比较,iNOS浓度升高程度更明显。结论:大鼠双侧卵巢切除后行疲劳运动创建的去势大鼠劳损性膝骨关节炎新模型稳定性高,符合临床更年期女性的骨关节炎病理,值得推广。