大鼠自体原位肝移植肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6的表达

【目的】观察大鼠自体原位肝移植围术期肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达和水平的变化。【方法】选取健康SPF级SD大鼠30只,随机分为假手术对照组(S组,n=6)和移植(肝脏再灌注)后4、8、16、24 h组(M4、M8、M16和M24组,每组n=6)。观察肺组织病理损伤,RT-PCR检测肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6基因表达,ELISA分析肺组织匀浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平。【结果】①病理学检查:假手术组肺组织结构基本正常,移植组表现为肺间质明显出血、充血,中性粒细胞浸润显著增多,以肝脏再灌注后8 h最为明显。②与S组相比,M4、M8、M16、M24组肺含水率显著升高,TNF-α、IL-1β及IL-6的基因表达均显著上调(P<0.05),在肝脏再灌注8h达到峰值。③与S组相比,M4、M8、M16、M24组肺组织匀浆TNF-α、IL-1β及IL-6水平显著升高(P<0.05);TNF-α、IL-1β在肝脏再灌注8h达到峰值,而IL-6则在肝脏再灌注后16 h达到峰值。【结论】大鼠自体原位肝移植围术期肺组织TNF-α、IL-1β和IL-6浓度显著升高,基因表达水平增高,可能与围术期发生急性肺损伤有关。

自体原位肝移植大鼠急性肾损伤的研究

【目的】建立SD大鼠自体原位肝移植模型,观察自体模拟肝移植后大鼠肾功能与病理学变化特点。【方法】SD大鼠40只,随机分为对照组(C组,n=8)和模型组(M组),模型组根据肝脏再灌注时间,再分为再灌注4 h模型组(M1组,n=8),再灌注8 h模型组(M2组,n=8),再灌注16 h模型组(M3组,n=8),再灌注24 h模型组(M4组,n=8)4个亚组。对照组在麻醉后只进行开腹和血管的分离,不进行肝脏的阻断和灌注;模型组则进行自体肝移植手术,分别在肝脏再灌注后4、8、16、24 h时取左肾组织和血标本,观察其血肌酐、尿素氮和病理形态学变化。【结果】与C组相比,模型组大鼠肾脏在肝脏再灌注后出现明显的病理学损伤,可见间质出现较多炎性细胞浸润,肾小管扩张,部分肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落,较多管型形成,在再灌注8 h时最为显著,在再灌注16 h开始修复;血清肌酐和尿素氮在肝脏再灌注后明显升高,在再灌注后16 h达到高峰,在24 h恢复。【结论】SD大鼠经历自体原位肝移植后,肾脏出现病理损伤和功能损害。

自体原位肝移植术后早期胃氧化损伤及其与NF-E2相关因子2的关系

【目的】探讨SD大鼠自体原位肝移植后16 h内胃病理学变化特点,胃黏膜氧化损伤及NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的变化。【方法】将24只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组(Sham,n=6)、自体原位肝移植再灌注后4 h组(R4h)、自体原位肝移植再灌注后8 h组(R8h)和16 h组(R16h)。假手术组在麻醉后只进行开腹和血管的分离,不进行肝脏的阻断和灌注;其余各自体原位肝移植组则进行自体肝移植手术,观察胃组织病理学变化特点、羟自由基(·OH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及Nrf2蛋白表达的变化。【结果】自体原位肝移植引起了各组大鼠明显的胃黏膜损害,其中R4h组损伤最严重。与假手术组相比,自体原位肝移植后4 h和8 h胃黏膜的·OH及MDA水平均明显升高,伴随SOD、CAT活性的明显降低。Nrf2蛋白在自体原位肝移植再灌注后4 h表达下调,在8 h和1 6 h逐渐恢复至假手术组水平。相关分析显示,胃黏膜损伤评分与·OH和MDA含量呈正相关,与SOD和CAT活性呈负相关(P<0.05);Nrf2蛋白表达含量与胃黏膜损伤评分、·OH含量和MDA含量呈负相关,与CAT活性呈正相关(P<0.05)。【结论】大鼠自体原位肝移植引起胃损伤,胃损伤与修复与氧化和抗氧化能力变化一致;胃黏膜Nrf2表达增强可能有利于胃的自我修复。

大鼠自体原位肝移植术后肺部炎症以及氧化应激标志物变化趋势

目的:分析大鼠自体原位肝移植术(AOLT)后肺部组织学以及相关的炎症因子、氧化应激指标的变化趋势。方法:30只SD大鼠分为sham组(5只)以及AOLT组(25只)。对术后肺部组织学以及相关炎症因子以及氧化应激标记物进行检测。结果:(1)与sham组相比,AOLT组肺部出现明显的病理学损伤,并且在术后8 h达到峰值,术后24～48 h恢复到sham组术后水平;(2)肺组织中TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-8相对表达量在术后8 h到达峰值,而后在24～48 h降到sham组术后水平;(3)氧化应激指标MDA和H_2O_2的相对表达量也呈现出和组织炎症因子一致的变化趋势,而SOD则在术后开始下降,于8 h最低,后开始上升。结论:大鼠AOLT术后的肺部组织学以及相应的炎症因子以及氧化应激状态的变化趋势是相符的。

脂肪肝模型大鼠自体原位肝移植后的脂质代谢变化

背景:研究显示,重度脂肪肝移植后移植物原发性无功能和早期移植物功能不良发生率明显升高,因此何种程度脂肪变性能最大程度提高移植物和受体的存活率,有待进行更深入的研究。目的:探讨不同程度脂肪肝大鼠行自体原位肝移植对脂质代谢的影响。方法:取160只SD大鼠(福建医科大学实验动物中心提供),通过高脂饮食分别建立中、重度脂肪肝模型,每种模型80只大鼠;将中度脂肪肝大鼠随机分2组,模型组(A组)进行自体原位肝移植手术,对照组(C组)不做手术;将重度脂肪肝大鼠随机分2组,模型组(B组)进行自体原位肝移植手术,对照组(D组)不做手术。术前、术后1 d、术后1周、术后3周、术后5周分别进行肝功能、脂质代谢及肝脏组织病理学检查。结果与结论:(1)肝功能:A组谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平均于术后1 d达峰值,随后逐渐下降,B组术后5周的谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平高于A组;(2)脂质代谢:4组大鼠术后总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平总体呈下降趋势,高密度脂蛋白、脂联素水平总体呈升高趋势;术后第5周,A组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平低于B组(P <0.05),高密度脂蛋白、脂联素水平高于B组(P <0.05);(3)肝脏组织病理学:A组术后1 d肝脏呈中度脂肪变性,术后5周脂肪变性程度逆转;B组术后1 d肝脏呈重度脂肪变性,术后5周呈中、重度脂肪变性,未见明显好转,可见炎症细胞浸润,汇管区内静脉淤血及轻度胆汁淤积;(4)结果表明:中、重度脂肪肝大鼠行自体原位肝移植后,均有不同程度加重脂质代谢紊乱,重度脂肪肝较中度脂肪肝可产生更严重的脂质代谢紊乱且恢复更加缓慢。

自体原位肝移植逆行灌注法对大鼠急性肾损伤的影响

目的探讨自体原位肝移植术中经下腔静脉逆行灌注对大鼠肾功能的影响,为临床肝移植应用经下腔静脉逆行灌注法提供实验依据。方法 60只自体原位肝移植大鼠随机分为逆行灌注组、门静脉灌注组与假手术组各20只。前两组建立自体肝移植模型,其中逆行灌注组采用经下腔静脉逆行灌注法,先开放下腔静脉,再开放门静脉,最后开放肝动脉。门静脉灌注组采用常规经门静脉正向灌注法,先开放门静脉,再开放下腔静脉,最后开放肝动脉。假手术组开腹后游离肝门处门静脉、肝动脉及肝上、下下腔静脉,不予阻断,17min后关腹。分别检测3组术前1h、术后1h、8h及术后1d、5d的血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;无肝期结束后1h、8h、1d取左肾组织行光镜检查观察肾组织病理形态学变化。结果术前1h,各组肾功能指标比较差异均无统计学意义(均为P>0.05);与假手术组比较,逆行灌注组、门静脉灌注组术后1h、8h及1d的Scr、BUN水平显著增高,而且逆行灌注组上述两指标明显低于门静脉灌注组(均为P<0.05),但术后5d3组比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。无肝期结束后1h,逆行灌注组和门静脉灌注组肾组织病理学检查发现肾间质充血,8h出现明显的肾小管上皮细胞水肿及肾间质充血,逆行灌注组明显轻于门静脉灌注组;无肝期结束后1d两组肾组织损伤呈现好转趋势,且逆行灌注组明显优于门静脉灌注组。结论自体原位肝移植术中实施逆行灌注可减轻大鼠急性肾损伤,改善大鼠早期肾功能。

自体原位肝移植大鼠围术期急性肺损伤的研究

目的建立SD大鼠自体原位肝移植模型，动态观察自体原位肝移植围术期肺损伤特点。方法选取健康SPF级SD大鼠40只，随机分为假手术对照组（S组，n=8）和模型组（M组），M组进行自体原位肝移植手术，根据肝脏再灌注时间不同再分为4个亚组。S组在麻醉后只进行开腹和血管的分离，不进行肝脏的阻断和灌注。分别在肝脏再灌注后4、8、16、24h采集动脉血和肺组织标本，分别用于检测动脉氧分压、肺组织病理学。结果与s组[（120．75±6．58）mmHg（1mmHg=0．133kPa）]比较，M2组（97．50±8．22）mmHg动脉氧分压降低（P〈0．05），其余各组差异无统计学意义（P〉0．05）。M组肺组织镜下见大量的炎症细胞浸润，肺泡腔内渗出明显，肺泡腔狭窄，肺间质明显出血充血，肺泡间隔明显增厚，肺实质所占的比例显著增加；这些病理改变在M2组（肝脏再灌注8h）达到高峰，然后逐渐好转。结论自体原位肝移植后SD大鼠存在肺损伤，在肝脏再灌注后8h达到高峰。

他克莫司预处理对大鼠自体原位肝移植冷缺血再灌注损伤的影响和机制

目的分析他克莫司预处理对自体原位肝移植大鼠肝脏冷缺血再灌注损伤(IRI)的影响及机制。方法无特殊病原体雄性Sprague Dawley大鼠24只,8~10周龄,220~250 g,采用随机区组法将大鼠分3组,每组8只。假手术组仅开腹关腹,他克莫司组术前经静脉注射他克莫司,模型组注射等量生理盐水。他克莫司组和模型组制备自体原位肝移植冷IRI模型。检测再灌注后大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),HE染色评估肝组织损伤。实时荧光定量PCR和蛋白质电泳检测低氧诱导因子-1α(HIF-lα)、血红素加氧酶-1(HO-1)相对表达。结果模型组大鼠血清ALT为(1332.0±52.8)U/L、AST为(2472.0±257.8)U/L,高于假手术组(65.0±17.4)U/L、(222.3±45.2)U/L和他克莫司组(789.9±54.0)U/L、(533.4±31.6)U/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。他克莫司组肝组织损伤程度轻于模型组。模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β高于假手术组和他克莫司组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。他克莫司组HIF-lα、HO-1相对表达均高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论他克莫司预处理通过增加HIF-1α和HO-1表达,抑制炎症因子生成,减轻大鼠自体原位肝移植冷IRI。

罗格列酮预处理对自体原位肝移植大鼠围术期肠氧化应激及肠损伤的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPARγ）激动剂罗格列酮在自体原位肝移植（OALT）围术期肠氧化应激的影响及肠损伤的保护作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组：对照组（CTL）、假手术组（Sham）、自体原位肝移植模型组（OALT）和罗格列酮预处理组（ROS）。建立自体肝移植模型，无肝期持续20min，肝脏再灌注8h后，观察回肠组织病理学变化，检测血清二胺氧化酶（DAO）、脂肪酸结合蛋白2（FABP2）水平和肠组织PPARγ蛋白表达、转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）激活、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、羟自由基（·OH）、丙二醛（MDA）的含量。结果相对于OALT组，ROS组大鼠回肠组织PPAR1蛋白表达上调（P〈0．01）和Nrf2激活增加（P〈0．01），肠损伤减轻（P〈0．01）；肠组织T-AOC、SOD活性升高[（3．01±0．80）nmoL／g蛋白比（0．64±0．06）nmol／g蛋白，P〈0．01；（111．6±9．9）U／mg蛋白比（61．9±5．1）U／mg蛋白，P〈0．01]，·OH和MDA含量降低[（180±44）nmol／g蛋白比（508±106）nmol／g蛋白，P〈0．01；（92±22）nmol／g蛋白比（162±30）nmol／g蛋白，P〈0．01）]；血清DAO和FABP2水平显著下降[（61．7±25．2）μg/L比（158．7±30．5）μg／L，P〈0．01；（42．0±32．5）ng／L比（65．3±51．0），P〈0．01]。结论PPARγ激动剂罗格列酮通过上调肠组织PPARl蛋白表达和Nrf2激活，增强机体抗氧化能力，减轻肠组织氧化损伤，对OLAT造成的肠道损伤具有保护作用。

FK506抑制HMGB1的释放减轻肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的研究他克莫司(tacrolimus,FK506)预处理对自体原位肝移植(autologous orthotopic liver transplantation,AOLT)大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤的作用.方法将32只成熟的♂SD大鼠随机分为4组:假手术组(S组)、AOLT组、AOLT+FK506低剂量处理组(L组)、AOLT+FK506高剂量处理组(H组).术后6 h取材,检测4组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;观察肝组织病理学改变;测定高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGBl)的mRNA及蛋白表达情況.结果肝移植术后,L组和H组血清中的ALT、AST及炎症因子TNF-α、IL-6水平均显著低于AOLT组,但明显高于S组(P<0.05).肝组织病理表明,AOLT组肝血窦淤血、肝细胞坏死及炎症细胞浸润程度较显著,而L组和H组较AOLT组明显减轻.L组和H组中HMGB1mRNA及蛋白表达水平显著低于AOLT组,但高于S组(P<0.05).上述检测指标在L组和H组之间比较无显著差异.结论 FK506预处理可以显著降低AOLT大鼠肝脏HMGB1的表达,抑制炎症因子释放,减少细胞坏死,从而减轻肝脏IR损伤,保护移植肝脏.

PPARγ激动剂罗格列酮通过抑制炎症反应减轻肝移植大鼠围术期肠损伤

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对自体原位肝移植大鼠围术期肠组织中PPARγ表达、NF-κB激活及肠损伤的影响。方法:SD大鼠40只,随机分为对照(control)组、假手术(sham)组、原位自体肝移植(OALT)组、罗格列酮(0.3 mg/kg,iv)预处理(ROS+OALT)组。建立自体原位肝移植模型,在肝脏再灌注后8 h时取肠组织,观察肠组织病理学变化,检测肠组织PPARγ蛋白表达、NF-κB核转运激活情况、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)浓度以及血清二胺氧化酶(DAO)和脂肪酸结合蛋白2(FABP2)水平。结果:与sham组相比,OALT组大鼠肠黏膜存在明显的病理学损伤,肠黏膜病理Chiu’s评分明显增高,血清DAO和FABP2升高(P<0.05)。罗格列酮预处理后,大鼠肠黏膜损伤减轻,肠黏膜病理Chiu’s评分降低,血清DAO和FABP2降低,肠组织PPARγ表达明显上调,NF-κB p65亚基核转位减少,肠组织IL-6和TNF-α浓度降低。结论:自体原位肝移植大鼠围术期炎症反应明显,存在明显的肠道损伤;PPARγ激动剂罗格列酮明显上调PPARγ表达,抑制肠道的炎症反应,减轻自体原位肝移植大鼠围术期的肠损伤。