自体外周血CD_(34)^+造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤

[目的]探讨自体外周血CD+ 造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的可行性。[方法]应用CliniMACS系统分选纯化患者外周血CD+ 造血干细胞 ,用流式细胞仪检测分选纯化结果。选马法兰200mg/m2 作为预处理方案。[结果]分选纯化结果 ,单个核细胞数为3.7136×108,活性率96.6% ,CD+ 细胞数3.68018×108,即5.52×106/kg。移植后患者骨髓像获得完全缓解。移植相关并发症少且易于控制。[结论]自体外周血CD+ 造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤是安全、有效、可行的。

高剂量化疗联合自体外周血造血干细胞移植时骨髓及外周血采集物中CD34^+细胞黏附分子的表达

本研究的目的是应用免疫荧光直接三色标记和流式细胞术 (FCM) ,观测高剂量化疗 (HDC)联合自体外周血造血干细胞移植 (APBSCT)时不同阶段的骨髓及外周血CD3 4 +细胞 ,表达CD5 4、CD4 9d和CD62L的情况 ,探讨不同来源的CD3 4 +细胞表达黏附分子的差异及其临床意义。将动员前、干细胞采集后和移植结束而骨髓重建后的骨髓样本及每次外周血单个核细胞样本 ,以CD3 4 PE和CD4 5 PerCP标记的同时 ,分别加CD5 4 FITC、CD4 9d FITC、CD62L FITC直接三色荧光标记 ,应用FACS测定CD3 4 +细胞及各黏附分子表达情况 ,并比较不同时段骨髓中各类黏附分子表达的差异 ,以及外周血造血干细胞采集物与动员前骨髓中各类黏附分子表达的差异。结果表明 ,动员前、采集后及移植重建后骨髓中CD3 4 +细胞对CD5 4、CD4 9d和CD62L表达的变化无统计学差异 ;造血干细胞第 1和第 2次采集物之间CD3 4 +细胞对CD5 4、CD4 9d和CD62L的表达变化也无统计学差异 ;而造血干细胞采集物中CD3 4 +、CD4 9+细胞较之动员前骨髓中CD3 4 +CD4 9d+细胞明显减少 (P =0 .0 0 1)。结论 :化疗联合粒细胞集落刺激因子 (G CSF)的动员方法 ,可使骨髓中CD3 4 +细胞的CD4 9d表达下调 ,并使之动员而进入外周血。移植重建后骨髓中CD3 4 +细胞的CD4

恶性肿瘤患儿自体外周血CD_(34)^+造血干细胞的动员和检测

目的探讨恶性肿瘤患儿经化疗和细胞因子动员后，外周血CD造血干细胞的含量变化及意义。方法恶性肿瘤患儿6例，经化疗和细胞因子动员后，用CD抗体标记，流式细胞仪检测外周血CD细胞18次，对测定结果进行统计学分析。结果6例患儿的CD细胞的百分率为1．78％～9．72％，较正常儿童外周血的含量增加17～97倍，CFU-GM增加19～74倍。三组不同疾病：NHL、ANLL和ALL之间CD细胞含量有显著性差异，P＜0．01。结论恶性肿瘤患儿经动员后，CD造血干细胞及CFU-GM有明显扩增，CD的检测在自体造血干细胞移植中具有重要的意义。

外周血CD34^+造血干细胞加适量T细胞输注进行HLA半相合的异体移植

对1例Ph+染色体的急淋患儿进行母子间HLA半相合的异体外周血造血干细胞移植 ,为避免由于HLA不相合所产生的由T细胞介导的严重移植物抗宿主病(GVHD) ,采用了CD34+细胞正性分离去除淋巴细胞 ;同时为避免由于T细胞过度去除而引起宿主抗移植物反应(HVG)导致植入失败 ,在移植次日又加入部分T细胞 ,使病儿接受CD34 +细胞6×106/kg 和CD3 +细胞1.05×107/kg。结果 :随访1年来 ,红系、粒系和巨核系均恢复正常 ,临床上仅出现一过性的IIOaGVHD以及轻微的局限于口唇粘膜的cGVHD。STR位点DNA检验以及染色体检查 :移植后 +180天受体已从供体型嵌合体转为完全供体型 ,病儿获得植入成功。结果表明 ,常规剂量的CD34 +细胞移植加以适量CD3 +T细胞 ,可克服HLA部分不相配的难点 ,减轻GVHD ,同时也可避免由于过度的T细胞去除而出现的HVG。

外周血CD34^+细胞计数预测造血干细胞收获量

目的 了解外周血CD34+细胞计数与造血干细胞收获量的关系。方法 用流式细胞仪Pro-COUNT方法检测了16例造血干细胞移植患者单采前外周血和采集物中CD34+细胞百分率、绝对数,用血细胞计数仪计数白细胞数。分析各项检测指标与CD34+细胞收获量(×104/kg体重)的相关性。结果外周血白细胞计数、CD34+百分率、CD34+细胞计数与CD34+细胞收获量的相关系数分别为-0.307,0.738,0.665。经相关系数t检验,单采前外周血白细胞计数与CD34+收获量无相关性(P>0.05),而外周血CD34+百分率和绝对计数与CD34+收获量密切相关(P<0.01)。结论 外周血CD34+计数可准确预测采集效果,确定干细胞采集时机。

化疗后恰当时机使用G-CSF能显著提高自体外周血干细胞移植物中CD34^+细胞的含量

本研究旨在观察COAEP化疗后选择不同时机使用G-CSF对动员自体外周血干细胞(PBSC)产率的影响。选择39例恶性淋巴瘤(NHL和HD)或多发性骨髓瘤(MM)患者,接受相同的动员化疗方案(COAEP),包括CTX400mg/m2d1,VLB2mg/m2d1,Ara-C60mg/m2×d1-5,VP-16 60mg/m2×d1-5,prednisone40mg/m2×d1-5。历史对照组(12例)在化疗后外周血白细胞降至最低点首次回升时使用G-CSF(filgrastim)。试验组(27例)在外周血白细胞稳定回升(白细胞在首次回升后仍会出现波动2-3天)时使用G-CSF。G-CSF以5μg/kg每天1次皮下注射直至最后1次PBSC采集前。2组患者开始使用G-CSF后每日进行血常规检查,当白细胞总数大于10.0×109/L,单个核细胞(MNC)大于1.0×109/L时使用COBE血细胞分离机,以自动干细胞分离程序采集PBSC。结果表明,2组病例都使用了烷化剂(累积剂量无统计学差异),试验组获得26.4×106/kg CD34+细胞,显著高于历史对照组3.1×106/kg CD34+细胞(p=0.0031)。结论 :化疗后选择恰当的时机使用G-CSF能显著提高移植物中CD34+细胞含量。

Sysmex XE-2100血液分析仪外周血造血干细胞检测与CD34^+流式细胞仪检测的相关性

目前．已有许多疾病可应用干细胞（stem cells）来治疗．而由于脐带血中的干细胞（cord blood stern cells）是属较后期、功能限制在一个系统的造血干细胞，因此在临床应用上，主要用于血液恶性病、先天性代谢缺陷以及免疫缺损病变．以及用来恢复因化学治疗或放射线治疗受伤害的骨髓功能。因此需要一种方便快捷的方法来检测外周血造血干细胞．我们这次将评价Sysmex XE-2100血液分析仪外周血造血干细胞的检测功能。

CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

肿瘤患者外周血干细胞动员过程中CD_(34)^+细胞的动态变化及意义

为观察肿瘤患者 CD+ 34 细胞数量在动员过程中的动态变化 ,确定采集干 /祖细胞的最佳时机 ,采用环磷酰胺 (CTX)联合粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)对 2 1例肿瘤患者进行造血干 /祖细胞动员。动员过程中 ,每天进行血细胞计数 ,于前期、极期、恢复早期、恢复期计数外周血 CD+ 34 细胞、白细胞 (WBC)、单核细胞 (MNC)、血小板(Plt)。结果显示 ,不同患者出现极期、恢复早期、恢复期的时间差异较大。与前期相比 ,极期 CD+ 34 明显降低(P<0 .0 5 ) ,恢复期则显著增加 (P<0 .0 1)。WBC、MNC、Plt变化均与 CD+ 34 细胞变化呈显著正相关 (r分别为 0 .99、0 .82 7、0 .886 ,P均 <0 .0 1)。提示在 WBC>5 .0× 10 9/ L时采集外周血造血干细胞 (PBSC)较合适 ,MNC>1.5×10 9/ L时采集 PBSC较理想 ,监测 Plt计数变化 。

自体外周血纯化CD34^+细胞移植治疗进展型多发性硬化

目的评价自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗进展型多发性硬化(PMS)的安全性和疗效。方法2002-09—2006-03期间15例PMS患者在首都医科大学宣武医院接受了自体外周血纯化CD34+细胞移植。单独使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员造血干细胞,全部回输采集物进行CD34+细胞纯化。预处理采用BEAM(卡氮芥、依托泊甙、阿糖胞苷、马法兰)方案。中位随访期为21(3～45)个月,移植前后应用扩充神经功能残疾量表(EDSS)、年平均发病次数进行疗效评价。结果分选后中位CD34+细胞纯度为93.2(78.6～97.7)%,中位回收率为67.0(22.4～79.8)%,相当于减少了4个对数级的T细胞。无移植相关死亡,造血重建时间与其自体外周造血干细胞移植(APBSCT)相当,未出现严重的毒性反应及并发症。患者移植后12个月EDSS评分(3.95±2.55)较移植前(5.64±0.71)降低(P<0.05),年平均发病次数移植后(0.45±0.82)较移植前(1.31±0.71)减少(P<0.05)。移植后45个月疾病无活动者生存率为(47.01±17.87)%,EDSS评分无进展者(包括稳定和改善)生存率为(57.69±20.24)%。结论自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗PMS安全有效。

外周血干细胞移植中标本放置时间对CD34^+细胞及单个核细胞计数结果的影响

目的探讨标本放置温度及时间对外周血CD34+细胞及单个核细胞(MNC)计数结果的影响。方法抽取10例健康供者或自体外周血干细胞(APBSCT)移者经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员第5天EDTA-K2抗凝静脉血,各分装2管,分别在室温和4℃条件下保存,对每份外周血标本分别于0、1、2、4、6、8、10、12、24h计数MNC和CD34+细胞。结果室温放置的标本中,MNC和CD34+细胞计数随着标本放置时间的延长而逐渐减低,放置到8h时,CD34+细胞计数和0h相比差异有统计学意义(t=5.04,P<0.05);放置到12h时,MNC计数和0h相比差异有统计学意义(t=3.68,P<0.05)。4℃条件下,标本放置到24h,MNC和CD34+细胞计数结果和0h相比差异均无统计学意义(t分别为0.50、1.24,P>0.05)。结论为确保检测结果的准确性,室温放置的标本CD34+细胞计数应在采血后8h内完成,MNC计数可在采血后10h内完成,外周血标本最好放置于4℃条件下保存。

系统性红斑狼疮患者自体外周血造血干细胞移植前后外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的变化

目的观察SLE患者自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)前后CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及Th1、Th2细胞亚群的变化。方法对4例行APBSCT的重症SLE病人分别采集不同时间段的外周血,分别用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+细胞、T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD69+、CD95+细胞)及用ELISA方法检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β以判断患者免疫功能的变化。结果病人症状明显改善,自身抗体转阴。IL-4、IL-10在移植后明显低于动员前水平,"Th2优势"得到纠正。移植后CD4+细胞回升缓慢,CD4+/CD8+持续降低;CD4+CD25+/CD4+在移植后降低。结论初步观察APBSCT后重症SLE病人"Th2优势"得到纠正,CD4+CD25+/CD4+降低。

监测外周血CD34^(+)细胞计数预测普乐沙福联合G-CSF自体干细胞动员的效果

目的探讨外周血CD34阳性(CD34^(+))细胞计数对普乐沙福自体干细胞动员效果的预测价值。方法回顾性分析2021年5月—2023年7月中山大学附属第七医院使用人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合普乐沙福进行自体干细胞动员的13例患者临床资料,分析普乐沙福动员前后外周血CD34^(+)细胞计数的变化及干细胞采集情况。结果共有13例患者纳入研究,包括淋巴瘤10例和多发性骨髓瘤3例。多发性骨髓瘤患者中1例为新诊断,另2例为复发患者;淋巴瘤患者中3例为套细胞淋巴瘤,6例为弥漫大B细胞淋巴瘤(包括1例复发),1例为B细胞淋巴瘤(不能明确类型)。本研究纳入的患者均使用G-CSF动员,在使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数均升高,使用普乐沙福前中位CD34^(+)细胞计数为13.3(2.5~76.1)/μL,使用普乐沙福后中位CD34^(+)细胞计数为73.6(10.4~208.70)/μL,升高4.18(1.99~13.60)倍。13例患者中有2例患者在使用普乐沙福前外周血CD34^(+)细胞计数<5/μL,均动员失败。Spearman相关分析结果显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数与使用普乐沙福前CD34^(+)细胞数呈正相关(rs=0.769,P=0.003)。多元线性回归分析显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数能较好地预测采集结果(P=0.004)。结论监测外周血CD34^(+)细胞计数可预测普乐沙福自体干细胞动员效果,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数越多,CD34^(+)细胞采集量越大。

外周血CD34^+细胞自体移植促进老年动脉粥样性缺血肢体的血管新生:前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验方案

背景:老年动脉硬化闭塞症的主要临床表现为下肢缺血,目前治疗较为困难。自体干细胞移植可将干细胞移植到缺血的肢体肌肉中,使其分化形成新生毛细血管,改善和恢复下肢血流,达到治疗下肢缺血的目的。目前已有研究证实,内皮祖细胞标记物CD34^+细胞移植可促进动物的缺血肢体的血管新生。目的:试验假设采用老年动脉粥样性缺血患者外周血的CD34^+细胞自体移植,可有效促进血管新生。方法:研究为前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验,在中国山东省,青岛大学附属医院完成。纳入老年动脉粥样性下肢缺血患者20例,随机分为2组,细胞移植组10例采用促血管生长因子-血管内皮生长因子165基因转染并纯化老年下肢动脉粥样硬化性缺血患者外周血的CD34^+细胞,自体移植至缺血侧肢体肌肉组织;对照组10例于缺血肌肉组织内注射生理盐水,随访6个月。试验的主要观察指标为两组移植前和移植后6个月踝肱指数的变化以评估下肢缺血情况。试验的次要观察指标为移植前和移植后6个月下肢肌肉组织微血管数量变化,CT血管成像显示的新生血管形态;移植后6个月患者血管内皮生长因子免疫阳性细胞数及不良反应发生率。试验在北美临床试验注册中心注册(NCT03098771)。试验经中国山东省青岛大学附属医院伦理委员会批准。研究符合世界医学会制定的《赫尔辛基宣言》的要求。参与者本人对治疗方案和过程均知情同意,并签署知情同意书。讨论:试验拟2018年1月开始,2019年12月完成,希望证实血管内皮生长因子165基因转染修饰的CD34^+细胞移植治疗老年动脉粥样性缺血肢体的确切疗效,研究结果有助于开拓下肢缺血性疾病治疗的新模式。

免疫磁珠分离及流式细胞仪分选纯化外周血CD34^+/CD90^+干细胞

目的 建立人外周血CD34+ 细胞及其亚群的纯化分离方法。方法 用干细胞采集仪收集了 3例病人的外周血干细胞 ,应用免疫磁珠分离柱快速分离其中的CD34+ 细胞 ,随后采用分选型EPICSElite流式细胞仪进一步分选出CD34+ /CD90 + 双阳性早期造血干细胞。结果 免疫磁珠分离纯化后CD34+ 干细胞的纯度可达 83%～ 95 % ,回收率 5 4 %～ 71% ,活细胞率 >95 %。流式细胞仪分选后的CD34+ /CD90 + 细胞纯度可达 90 %以上 ,回收率在 4 0 %～ 5 0 % ,生存率 >95 %。起始标本中CD34+ 细胞含量越高 ,纯化所得到的干细胞纯度和回收率越高。两种纯化后的干细胞在形态学上有明显的不同。结论 联合应用免疫磁珠分离和流式细胞仪分选 ,可以较高的回收率快速纯化高纯度的CD34+