自体脂肪源性干细胞基质凝胶治疗慢性难愈性创面的临床疗效观察及炎症调节机制研究

目的观察自体脂肪源性干细胞基质凝胶治疗慢性难愈性创面的临床疗效,并探讨其对慢性难愈性创面炎症调节的机制。方法选取2017年8月至2019年1月我院整形美容烧伤科收治的30例符合纳入标准的慢性难愈性创面患者,对其进行前瞻性随机对照研究。随机分为自体脂肪源性干细胞凝胶(ECM/SVF gel)治疗组(A组)、封闭式负压引流(VSD)治疗组(B组),每组15例。计算创面愈合率,进行VAS疼痛评分,创面肉芽组织生长评分,留取创面组织行免疫组化检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达情况。对数据行t检验,χ^(2)检验。结果治疗后第7、10、14天,A组创面愈合率分别为(39.98±19.92)%、(47.53±15.34)%、(58.54±20.62)%,显著高于B组(11.44±11.80)%、(15.34±6.96)%、(19.81±8.09)%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后第7天,VAS评分A组为(1.88±0.83)分,B组(4.50±0.76)分,差异有统计学意义(P<0.05)。创面肉芽组织生长较治疗前均有明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),治疗10、14天后,A组评分明显高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗7 d后两组MMP-1表达下调,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),但两组间相比,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗7 d后A组TIMP-1表达(0.2112±0.1173)显著上调,B组TIMP-1表达(0.0138±0.0102)上调,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论ECM/SVF gel治疗慢性难愈性创面效果明显,其下调MMP-1表达,上调TIMP-1表达,可能是调节慢性难愈性创面胶原沉积、局部炎症的分子机制之一。

脂肪源性干细胞:甲状旁腺样细胞自体移植的新来源

目的研究脂肪源性干细胞(ADSCs)分化成甲状旁腺样细胞的方法,为治愈甲状腺手术后甲状旁腺功能减退症提供新的理论与实验依据。方法切取SD大鼠腹股沟区脂肪,经过处理培养后,通过成脂和成骨诱导实验进行ADSCs鉴定;应用Shh和激活素A(Activin A)刺激ADSCs,通过对甲状旁腺激素(PTH)的检测,证明ADSCs向甲状旁腺样细胞分化是否成功。结果大鼠脂肪细胞分离出ADSCs,100 ng/mL Shh加75 ng/mL Activin A诱导ADSCs 21 d,培养基中PTH明显增加,证明ADSCs成功分化成甲状旁腺样细胞。结论 ADSCs经Shh和Activin A诱导后可分化成甲状旁腺样细胞。

自体富血小板凝胶联合脂肪干细胞对糖尿病足大鼠lncRNA的影响

目的:分析自体富血小板凝胶(APG)联合脂肪干细胞(ADSCs)对糖尿病足(DF)大鼠lncRNA的影响。方法:2021年6-9月,选取30只SPF级C57BL/6大鼠,适应性喂养1周后随机分为正常组、对照组、治疗组,各10只,正常组自由饮水不建模,其余两组建立DF模型,其中对照组注射磷酸缓冲盐溶液(PBS)于DF大鼠溃疡处,治疗组注射APG+ADSCs于溃疡处,连续治疗14 d后测定大鼠血糖、炎症因子[白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平与血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平,同时收集溃疡组织进行lncRNA芯片分析,测定lncRNA表达谱变化。结果:治疗14 d后,正常组血糖与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05),对照组血糖水平高于治疗前,治疗组血糖水平低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05);治疗14 d后,治疗组IL-6、CRP、TNF-α均低于对照组,而VEGF、bFGF均高于对照组(P<0.05)。与正常组比较,对照组存在1627个显著差异的lncRNA,治疗组存在1896个显著差异的lncRNA,与治疗组比较,对照组存在2576个显著差异的lncRNA。将靶基因代入差异mRNA数据,筛选得到DF相关的靶基因有8个,分别为DLX6-AS1、CHI3L1、CAMTA1、STRADB、ARAP1-AS1、ARAP1-AS2、PVT1、ROR。结论:APG联合ADSCs治疗DF的机制可能是通过改变lncRNA的表达,影响炎症因子与血管生成因子水平而发挥作用。

透明质酸凝胶中肌源性干细胞与透明软骨联合培养的实验研究

目的探讨肌源性干细胞与软骨细胞混和培养体外成软骨的可行性。方法分离培养、扩增传代兔MDSCs及关节软骨细胞,二者按一定比例混和,6×1010/L密度接种于5%浓度的透明质酸凝胶为共培养组,以相同密度的单纯MDSCs和单纯软骨细胞作为阴性与阳性对照。倒置相差显微镜下观察,10 d后行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA表达。结果 5 d后镜下见共培养组MDSCs形态由梭形向多边多角形转化,10 d后细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测与阳性对照组相同,RT-PCR检测Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA呈阳性表达。阴性对照组在体外培养过程中未分化为软骨细胞。结论软骨微环境在MDSCs成软骨分化过程中具有重要作用,软骨细胞能有效地诱导MDSCs向软骨样细胞分化,透明质酸凝胶可以作为软骨组织工程的良好载体。

人脂肪源性干细胞成骨诱导过程中Ⅰ型胶原的表达

目的:研究人脂肪源性干细胞(hADSCs)成骨诱导后其合成和分泌Ⅰ型胶原能力的变化,探讨hADSCs作为组织工程骨的种子细胞的效能。方法:从人脂肪抽吸物中分离基质细胞,体外培养、扩增及鉴定。采用成脂诱导剂诱导hADSCs向脂肪细胞分化,采用油红O染色鉴定。采用成骨诱导剂诱导hADSCs向成骨细胞分化,将成骨诱导组分为0、7、14、21和28d组,分别于0、7、14、21及28d行茜素红染色检测矿化结节、VanGieson胶原纤维特殊染色染胶原纤维、Ⅰ型胶原细胞免疫荧光染色检测细胞Ⅰ型胶原的表达。用FVViewer1.7软件对Ⅰ型胶原表达的强度进行定量检测。结果:hADSCs成脂诱导14d后油红O染色阳性;hADSCs成骨诱导21d茜素红染色阳性;成骨诱导21dVanGieson胶原纤维特殊染色阳性;hADSCs成骨诱导后Ⅰ型胶原染色21d所有的细胞均阳性表达,28d呈强阳性表达。统计结果显示:Ⅰ型胶原的表达从7d开始,到28d逐渐升高,7、14、21和28d组与0d组比较差异均有显著性(P<0.05)。结论:hADSCs成骨诱导后全部细胞呈现成骨表型,成骨能力强,可以作为骨种子细胞应用于临床骨再生治疗。

兔自体血清对脂肪源性干细胞增殖能力的影响研究

目的观察5%、10%、20%兔自体血清浓度对脂肪源性干细胞(ADSC)增殖活力的影响。方法取3月龄新西兰大白兔46只,麻醉后提取脂肪,并分离ADSC进行培养传代,加入不同浓度兔自体血清,通过MTT检测ADSC增殖情况。结果培养第3、4、5、6、7天10%和20%自体血清组光密度(OD)值明显高于5%自体血清组,差异有统计学意义(P<0.05);培养第2、3、4天20%自体血清组OD值明显低于10%自体血清组,差异有统计学意义(P<0.05);培养第5、6天20%自体血清组OD值明显高于10%自体血清组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 10%和20%浓度兔自体血清培养ADSC明显优于5%浓度兔自体血清。

自体脂肪源性干细胞联合无菌生物护创膜对慢性创面愈合的影响

目的探讨自体脂肪源性干细胞联合无菌生物护创膜对慢性创面愈合的影响。方法选择清洁级SD大鼠86只作为研究对象,并将其随机分为对照组(43只)和研究组(43只),均建立背部开放性慢性创面模型。对照组大鼠采用无菌生物护创膜治疗,研究组大鼠采用自体脂肪源性干细胞联合无菌生物护创膜治疗。比较两组大鼠创面愈合时间、不同时间段创面愈合率及新生微小血管密度。结果研究组大鼠创面愈合时间显著短于对照组(P<0.05);治疗后第7、14、21天,研究组大鼠创面愈合率和新生微小血管密度均显著高于对照组(P<0.05)。结论对慢性创面采用自体脂肪源性干细胞联合无菌生物护创膜治疗,可显著促进创面血管再生,加快创面愈合,具有临床推广意义。

重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶联合自体脂肪移植对面部凹陷性瘢痕患者的疗效

目的探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)凝胶联合自体脂肪移植对面部凹陷性瘢痕患者的疗效。方法选取郑州人民医院2017年5月至2019年5月收治的82例面部凹陷性瘢痕患者,按随机数表法分为观察组(41例)与对照组(41例)。对照组接受自体脂肪移植治疗,观察组接受rh-bFGF凝胶联合自体脂肪移植治疗。比较两组临床疗效、手术前后面部美容权重(ECCA)评分和瘢痕基底深度。结果观察组总有效率[85.37%(35/41)]高于对照组[63.41%(26/41)](P<0.05);术后1、3个月观察组ECCA评分低于对照组(P<0.05);术后1、3个月观察组瘢痕基底深度低于对照组(P<0.05)。结论 rh-bFGF凝胶联合自体脂肪移植可显著降低患者瘢痕深度,提高美容效果,是面部凹陷性瘢痕患者的有效治疗方案。

面部整形美容中自体脂肪源性干细胞的运用

目的研究面部整形美容中自体脂肪源性干细胞应用价值。方法选择2011年9月至2012年11月我院收治的采用自体脂肪源性干细胞进行面部整形美容46例患者临床治疗资料进行回顾性的分析和研究。结果通过对46例患者采取自体脂肪源性干细胞进行治疗,并随访6～12个月后,面部显著性改善有39例,面部得到有效改善有7例,治疗满意度为97.8%。结论对面部整形美容患者采取自体脂肪源性干细胞进行治疗,能够提高面部整形美容的效果,是一种有效且安全的整形美容方法,值得在整形美容中推广和应用。

面部整形美容中自体脂肪源性干细胞应用价值研究

目的深入探讨将自体脂肪源性干细胞作用于面部整形美容中的临床效果。方法选取我院2014年10月至2015年10月期间接受自体脂肪源性干细胞进行面部整形美容的30例患者作为研究对象,采用回顾性分析的方式对所有患者和的一般资料及治疗方法和结果进行总结和分析。结果经过系统的治疗及资料整理,本次研究所选取的30例患者,面部显著改善的患者共计25例(83.33%),有效改善4(13.33%),治疗总有效率为96.67%,效果基本达到临床预期。结论在面部整形美容中对患者实施自体脂肪源性干细胞治疗,不仅能够保证较好的治疗效果,而且具有一定的安全性,值得在美容整形中予以借鉴和推广。

自体脂肪源性干细胞移植治疗四肢骨不连疗效观察

目的探讨临床自体脂肪源性干细胞(ADSCs)移植治疗四肢骨折骨不连的疗效。方法选择四肢骨折骨不连患者36例,应用自体提取ADSCs,进行经皮骨折处注射进行治疗。结果 36例患者随访3～46个月,中位数12.1个月,X线显示骨折线消失以及骨痂形成32例,符合骨性愈合标准,平均骨愈合时间(自ADSCs移植时起)为4.5个月(2.8～5.6个月)。结论自体ADSCs经皮移植治疗骨折骨不连是一种具有较大临床应用价值且安全有效的方法,值得深入研究推广。

以脂肪源性干细胞膜片构建组织工程皮肤

背景:细胞膜片技术以细胞自分泌的透明质酸及胶原蛋白做为内源性支架,能消除外源性支架的各种弊端。人脂肪源性干细胞结合细胞膜片技术用于全层皮肤缺损成为当前的研究热点。目的:综述脂肪源性干细胞膜片研究现状及进展。方法:计算机检索维普、PubMed数据库中1993年1月至2014年4月关于脂肪源性干细胞、细胞膜片技术及皮肤组织工程相关文章。在关键词中以"脂肪源性干细胞,创面愈合,组织工程皮肤,细胞膜片"或"adipose-derived stem cell,wound healing,tissue-engineered skin,cell sheet"为检索词进行检索。最终选择27篇文献进行分析。结果与结论:来源于人废弃脂肪组织的脂肪干细胞具有成体干细胞的多向分化潜能和免疫相容性,可理想的用于再生医学。细胞膜片技术与传统的外源性可降解材料支架构建的组织相比具有多种优势。脂肪源性干细胞结合细胞膜片技术相结合,有利于组织血管化,能从多个方面促进创面愈合,其所分泌的细胞外基质层能提供适宜于细胞分化和生长的微环境,对全层皮肤缺损创面愈合具有正调控作用,可望构建真正的3-D化组织工程皮肤。

脂肪组织源性干细胞在临床脂肪雕塑术中的指导意义

注射器法吸脂术与自体脂肪颗粒注射填充移植术临床亦称脂肪雕塑术,取材安全方便，供源充足丰富，容易获取，微创无痕，无排斥反应，无伦理学问题，可反复取材，减少术后瘢痕，受区外形满意，手感自然，无供区畸形并能同时获得吸脂减肥瘦身塑体事半功倍的效果，具有良好的组织免疫相容性。脂肪组织是一种新发现的内分泌组织，是现今整形美容外科领域较理想，最具发展潜力的良好的人体软组织填充材料叫。其中脂肪组织源性于细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs）作为组织工程学的种子细胞有着非常重要的研究和应用价值。

组织工程化肌源性干细胞治疗压力性尿失禁可行性的初步实验研究

该文成功分离纯化出肌源性干细胞,并以胶原海绵为支架,获得组织工程化肌源性干细胞,并进行了大鼠自体移植,为进行细胞/组织工程治疗压力性尿失禁打下一定基础,具有一定创造性。但该文设计不够严谨,只是研究的初步结果。

联合诱导兔脂肪源性基质细胞的成肌潜能

背景: 成肌种子细胞是构建工程化成肌复合物的基础,如何优化其扩增是过渡到临床应用的核心。目的: 分析将MyoD、转化生长因子β1及5-氮杂胞苷不同模式下联合诱导兔脂肪源性基质细胞体外成肌潜能的变化。方法: 取兔腹部脂肪,采用胶原酶消化法分离获取脂肪源性基质细胞,分别以不同方式进行成肌细胞诱导:5-氮杂胞苷诱导组;MyoD+转化生长因子β1诱导;5-氮杂胞苷+MyoD+转化生长因子β1联合诱导组;并设空白对照。于诱导第1,4,8,12,16,20,24,28天观察细胞形态学特点,行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞,检测Ⅲ型胶原含量。结果与结论: 联合诱导组与其他组相比,细胞生长迅速,16d增殖达高峰,20d肌管数量增多,体积增大,排列规则,呈结蛋白强阳性表达,细胞周期显示联合诱导组脂肪源性基质细胞的DNA复制期细胞比例增加,间隙期细胞减少,Ⅲ型胶原含量明显增高,差异有显著性意义。结果提示,多因子联合5-氮杂胞苷模式能有效促进脂肪源性基质细胞向成肌细胞定向分化,细胞增殖显著,是成肌细胞体外诱导的理想方法。

自体脂肪注射隆乳术后硅凝胶假体置入的效果观察

自体脂肪注射隆乳术具有操作简便、创伤小、供区皮肤表面几乎不留瘢痕的优点，而且自体脂肪细胞组织相容性好，没有免疫排斥反应及毒性物质吸收等问题，故在临床上仍有使用。但是，由于自体脂肪游离移植术后成活率不高（50％），容易出现脂肪液化吸收、硬化、钙化等并发症，而且有个别患者被误诊为乳房肿瘤，给患者精神上带来压力。有些患者在自体脂肪注射隆乳术后效果不满意，或出现并发症后要求治疗，并且同时要求达到改善乳房形态的目的。

脂肪干细胞三维生长骨组织工程复合体的构建

背景:组织工程支架是模仿细胞赖以生长代谢的细胞外基质而构建的支架和环境,其选择、制备以及种子细胞的选择是骨组织工程领域中的一项十分重要的课题。目的:利用几丁质凝胶/异种骨构建脂肪干细胞三维生长环境,并对其相容性进行研究。方法:从出生8 d新西兰大白兔腹股沟获取脂肪组织,提取脂肪干细胞。脂肪干细胞经过体外成骨诱导分化后,种植于几丁质凝胶/异种骨,构建新型骨组织工程复合体,并将其设为细胞/几丁质凝胶/异种骨组;将脂肪干细胞直接种植于异种骨,构成脂肪干细胞/异种骨复合体作为细胞/异种骨组,单独异种骨为空白组。体外诱导2周后进行电镜扫描,观察细胞与支架的复合情况。结果与结论:镜扫描观察显示几丁质凝胶充分渗透于支架的空隙内,形成一个细胞的三维生长环境,使原本只能在材料上贴壁生长的脂肪干细胞能够在三维的环境中生长,为细胞外基质的再生提供足够的空间。几丁质凝胶/异种骨悬浮诱导后的脂肪干细胞,承载了更多的细胞,减少了细胞在载体中的流失,是一种较好的骨组织工程载体。

脂肪组织来源细胞再生技术在整形修复领域中的研究进展

自体脂肪由于具有易获得、数量多、供体部位发病率低等优势广泛应用于整形外科的各个领域。但脂肪移植的高吸收率是整形外科医师普遍遇到的难题,为解决这一问题,大量涉及生物细胞再生医学的研究成果应用于临床,脂肪组织来源细胞的再生潜能已越来越多地应用于整形外科。这些细胞包括纳米脂肪、基质血管成分以及脂肪源性干细胞等,它们在瘢痕修复、面部年轻化、毛发生长和创面愈合等整形修复领域发挥重要的作用,预示着脂肪组织来源细胞再生技术具有广阔的应用前景。

自体脂肪干细胞治疗复杂性腺源性肛瘘的疗效

目的观察自体脂肪干细胞治疗复杂性腺源性肛瘘的临床疗效。方法收集自体脂肪干细胞治疗复杂性腺源性肛瘘10例患者的临床资料,回顾性分析相关资料。结果术后随访3个月,5例痊愈,3例显效,2例未愈。术前和术后3、7d的VAS疼痛评分相仿,均≤1分(P>0.05)。术前及术后30、50d的肛门括约功能评分亦无统计学差异(P>0.05)。术前生活质量评分为(116.72±17.71)分,与术后7d的(115.13±12.71)分和术后30d的(118.02±12.52)分相仿(P>0.05)。结论自体脂肪干细胞治疗复杂性腺源性肛瘘近期疗效较好。

同种异体脂肪干细胞联合自体富血小板血浆凝胶修复大鼠皮肤软组织创面的临床效果

目的探讨同种异体脂肪干细胞(ADSCs)联合自体富血小板血浆凝胶对大鼠皮肤软组织创面的修复效果。方法选择40只SD大鼠为研究对象,于大鼠背部行3 cm×3 cm全层皮肤缺损创面,根据治疗方式不同分为A、B、C、D组,每组10只。A组创缘局部注射异体ADSCs悬液联合自体PRP,B组创缘局部注射异体ADSCs悬液,C组创缘局部注射自体PRP,D组采用0.9%氯化钠注射液静脉注射方式。比较4组大鼠创伤面面积、创面愈合时间、微血管计数CD31细胞阳性表达率、Ⅰ型胶原蛋白含量和创面组织的转化生长因子-β1(TGF-β1)表达情况。结果 4组大鼠接受治疗前微血管计数CD31细胞阳性表达率、Ⅰ型胶原蛋白含量和创面组织TGF-β1表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后不同阶段,A组大鼠创伤面面积明显小于B、C、D组,差异有统计学意义(P<0.05),B、C两组大鼠的创伤面面积比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,4组大鼠微血管计数CD31细胞阳性表达率均明显上升,A组大鼠微血管计数CD31细胞阳性表达率明显高于B、C、D组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗7 d和治疗14 d后,4组的Ⅰ型胶原蛋白含量和创面组织的TGF-β1表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);A组大鼠创面完全愈合时间明显短于B、C、D组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论同种异体ADSCs联合自体PRP治疗大鼠皮肤软组织创伤临床效果显著。