自体脂肪间充质干细胞治疗躯干部位带状疱疹后神经痛的临床效果分析

针对躯干部位带状疱疹后神经痛情况,分析使用自体脂肪间充质干细胞治疗产生的效果。方法 从2021.01~2022.10时间段内,选择我院收治的80例带状疱疹患者做样本,随机平均分组后对照组采用常规治疗,观察组使用自体脂肪间充质干细胞治疗。就实际产生的效果进行分析对比。结果 两组治疗前疼痛评分相比差距不大,治疗后观察组评分均低于对照组;观察组治疗有效率高于对照组,不良反应发生率低于对照组,后遗症发生率低于对照组;治疗前两组生活质量各项评分无明显差别,治疗后关注各评分较对照组高;上述差异有统计学意义(P<0.05)。结论 为更好地帮助躯干部位带状疱疹患者缓解神经痛情况,实施自体脂肪间充质干细胞治疗能有效抑制疼痛感,减少后遗症和不良反应,整体治疗效果突出,值得广泛应用。

自体脂肪间充质干细胞治疗放射性肺损伤的应用前景及研究进展

放射性肺损伤(RILI)是胸部肿瘤接受放疗时的主要并发症,临床上仍缺乏治疗该病的有效方法。脂肪间充质干细胞(AD-MSCs)具有多向分化潜能,体外较易分离、纯化和扩增,临床治疗中易实现自体移植。近年来研究证实:干细胞移植对各种肺损伤有较好的修复作用,但目前国内外学者就骨髓、脐带等干细胞治疗肺损伤的研究相对较多,而有关AD-MSCs治疗肺损伤的研究报道较少。本文就RILI发病机制、干细胞对肺损伤的修复机制及国内外研究现状做系统回顾,并对自体AD-MSCs在RILI治疗中的应用展望进行综述。

自体脂肪间充质干细胞治疗躯干部位带状疱疹后神经痛的临床研究

目的:探讨自体脂肪间充质干细胞治疗躯干部位(胸3-腰12节段)带状疱疹后神经痛的临床效果。方法:选取2017年2月至2020年3月在我院进行治疗的110例躯干部位(胸3-腰12节段)带状疱疹后神经痛患者作为本次研究对象,并按照随机数字表法分为干细胞组与射频组(各55例)。其中射频组患者使用常规神经根脉冲射频阻滞治疗,干细胞组通过自体脂肪间充质干细胞治疗。比较两组患者临床疗效、不良反应发生率、疼痛控制满意度以及治疗前后视觉模拟评分法(VAS)、生活质量评分、后遗症状(痒感、紧束感、蚁行感)发生率。结果:干细胞组患者临床治疗总有效率(92.73%)明显高于射频组(76.36%)(P<0.05);治疗后1、3个月,两组VAS评分均明显降低(P<0.05),且干细胞组低于射频组(P<0.05);治疗后1、3个月,两组睡眠、饮食、情绪、日常生活等生活质量评分均明显降低,且干细胞组低于射频组(P<0.05);干细胞组不良反应发生率明显低于射频组(5.45%vs 21.28%,P<0.05),而疼痛控制满意度明显高于射频组(90.91%vs 70.91%,P<0.05);治疗后,两组患者痒感、紧束感、蚁行感发生率均明显降低,且干细胞组痒感、紧束感、蚁行感发生率明显低于射频组(P<0.05)。结论:自体脂肪间充质干细胞治疗躯干部位(胸3-腰12节段)带状疱疹后神经痛患者具有较好的临床效果,能够有效缓解患者疼痛程度,改善患者生活质量,同时明显降低不良反应和后遗症状发生率,提高疼痛控制满意度,因此值得临床应用。

人自体脂肪间充质干细胞治疗骨关节炎的临床研究

目的探讨人自体脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)复合玻璃酸钠、富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)注射治疗膝关节骨关节炎的安全性和有效性。方法取人腹部脂肪组织,分离获取ADSCs,经体外培养获得足量的ADSCS,并以流式细胞仪检测其表面标志物,分析成软骨细胞分化能力。选择咸阳市第一人民医院骨科中心门诊30例膝关节轻中度骨关节炎患者,关节腔内注射人ADSCs复合玻璃酸钠、富血小板血浆,评价观察干预前、后的患者是否有不良反应以及膝关节活动度的评分、疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、核磁共振下膝关节面。结果人腹部脂肪组织分离出来的ADSCs均阳性表达CD105、CD29,阴性表达CD45、CD34,体外具有良好的成骨、成脂、成软骨能力;临床治疗干预后患者无不良反应,膝疼痛减轻,关节活动度较前增大,核磁共振可见关节面斑片状影较治疗前显著减少,低信号区显著减少,未见明显关节腔积液,关节面厚度增加。结论关节腔注射ADSCs复合玻璃酸钠、富血小板血浆治疗骨关节炎能有效改善患者膝关节活动度,减少疼痛,提高生活质量,通过核磁共振发现关节面厚度增加,延缓关节退化。

自体脂肪组织来源间充质干细胞或可治疗脊髓损伤

据Bydon M 2024年4月1日[Nat Commun,2024,15(1):2201-2201.]报道,梅奥医学中心的研究人员介绍了CELLTOP试验所有的10例创伤性脊髓损伤(SCI)患者入组和96周随访结果。证明了自体脂肪组织来源的间充质干细胞(AD-MSC)的采集和鞘内注射给药在SCI治疗中的安全性。鞘内注射自体培养扩增的AD-MSC可用于治疗SCI。在10例接受治疗的SCI患者中,未观察到严重不良事件,在治疗后2年内随访中,有7例患者美国脊髓损伤协会(ASIA)评定量表等级较治疗前有所改善。该临床试验达到了主要终点,表明了AD-MSC的采集和鞘内注射给药在SCI患者中是安全、可耐受的。脂肪组织是间充质干细胞最主要的来源,即AD-MSC,其具有可获得性、易获取性和多能性等优点。在创伤和退行性疾病中,AD-MSC的使用已经被深入研究。在SCI的动物模型中进行的临床前试验表明,AD-MSC可以调节炎症反应并促进再生环境。

米托蒽醌甲磺酸盐预处理脂肪间充质干细胞对犬糖尿病的治疗效果评价

本研究在高脂饮食(high-fat diet, HFD)饲喂和链脲佐菌素(streptozotin, STZ)注射的联合作用下成功建立小鼠及犬糖尿病模型,旨在探究米托蒽醌甲磺酸盐(mitoquionl mesylate, MitoQ)预处理脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADMSCs)对糖尿病动物模型治疗效果的提升作用及机制。取正常培养状态的ADMSCs及添加1μmol·L^(-1)MitoQ处理的ADMSCs,对MitoQ处理的细胞形态变化、生长、增殖、迁移及抗氧化能力等进行检测。选取48只8周龄的昆明(KM)雄性小鼠和12只中华田园犬,随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病模型组(Diabetes组)、ADMSCs单独治疗组(ADMSCs组)和MitoQ预处理ADMSCs联合治疗组(MitoQ-ADMSCs组)。常规方法制作小鼠及犬糖尿病模型,对模型小鼠和犬分别进行ADMSCs和MitoQ-ADMSCs细胞静脉移植治疗,细胞数为2×10^(6)·只^(-1)(小鼠)和1×10^(7)·只^(-1)(犬),每周1次,连续3周。持续监测临床指标变化,治疗结束后1周收样,血清学、组织学、氧化应激及犬血清代谢组学分析。结果表明,MitoQ预处理ADMSCs不会影响其细胞形态,但能促进其生长、增殖及迁移能力,同时增强其抗氧化能力;ADMSCs和MitoQ-ADMSCs移植治疗后,发现MitoQ显著促进ADMSCs降低血糖的能力,且提高胰岛β细胞功能和机体血糖调节能力;ADMSCs经MitoQ预处理后有效减轻糖尿病伴发的肝代谢功能障碍和血脂代谢异常;ADMSCs可以减轻胰腺和肝组织损伤,促进胰岛素分泌,减轻肝糖原合成障碍和纤维化水平,而MitoQ处理能够显著改善ADMSCs治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs能够有效提升机体的抗氧化能力,减轻氧化损伤,进而增强治疗效果;MitoQ预处理ADMSCs可以显著促进机体内与抗氧化相关的代谢物表达上调。结果揭示,MitoQ能够通过提高ADMSCs的抗氧化能力、加速组织损伤修复,从而更好地治疗小鼠及犬糖尿病。

脂肪间充质干细胞外泌体预防和治疗瘢痕疙瘩的研究进展

瘢痕疙瘩的发病机制复杂,受多种因素影响,如局部机械力、感染、激素水平、血压、缺氧、遗传及生活习惯等^([1]).瘢痕疙瘩较难自行消退,易复发,对患者的生理和心理健康产生一定的负面影响.近年来,外泌体成为干细胞治疗瘢痕疙瘩的替代方法^([2]).本文就脂肪间充质干细胞外泌体(Adipose derived stem cells-exosomes,ADSCs-EXOs)预防和治疗瘢痕疙瘩的研究进展进行了综述。

脂肪间充质干细胞在纤维化疾病治疗中的作用

纤维化疾病由于其广泛性和复杂性带来了重大临床挑战,探究纤维化的发生机制并寻求更有效的治疗方法势在必行。脂肪间充质干细胞(adipose⁃derived stem cell,ADSC)是适用于再生医学的理想干细胞,可作为许多疾病的替代治疗方案。近年来研究表明,ADSC有显著的抗纤维化潜力。本文就ADSC抗组织纤维化过程中涉及的上皮⁃间充质转变、成纤维细胞活化、抗炎及免疫调节等潜在干预靶点进行综述,旨在为防治纤维化提供新思路。

自体脂肪间充质干细胞对大鼠肝切除术后早期肝再生的促进作用

目的:观察自体脂肪间充质干细胞(ADSCs)对大鼠70%肝部分切除术(PH)后早期残肝再生的促进作用。方法:健康雄性Wistar大鼠24只随机分为两组,大鼠70%PH组(模型组,n=12)、大鼠70%PH后自体ADSCs移植组(移植组,n=12)。比较模型组和移植组术后24、72 h血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),获取肝组织,比较形态学改变及增殖细胞核抗原(PCNA)水平,RT-PCR检测肝细胞生长因子(HGF)mRNA表达水平。结果:与模型组比较,移植组术后24 h血清ALT水平显著降低,差异有统计学意义(t=2.925,P<0.05);与模型组比较,移植组术后24、72 h血清AST水平显著降低,差异有统计学意义(t=4.139、3.323,均P<0.01)。光镜下观察移植组术后24、72 h肝窦轻度扩张,肝细胞结构排列紊乱程度较模型组轻。与模型组比较,移植组术后24、72 h PCNA指数显著增高,差异有统计学意义(t=3.001、2.825,均P<0.05)。与模型组比较,移植组术后24、72 h HGF mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=2.291、3.263,均P<0.05)。结论:自体ADSCs移植可促进70%PH后早期残余肝脏再生能力。

间充质干细胞对代谢功能障碍相关脂肪性肝炎的作用及机制研究

目的探讨间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)对代谢功能障碍相关脂肪性肝炎(Metabolic dysfunction-associated steatohepatitis,MASH)的作用及机制。方法(1)体内实验:8周龄C57BL/6小鼠高脂喂养24周后,给予链脲佐菌素一次性注射制作MASH模型。将造模成功小鼠随机分为MASH组(n=6)和MSCs组(n=6),另取6只同期正常饲料喂养小鼠为对照组(n=6)。MSCs组小鼠每周经尾静脉注射1×10^(6)MSCs,连续6周,MASH组和对照组给予同等剂量的磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline,PBS)输注。输注结束后,检测3组小鼠肝功能、血脂;HE染色、油红染色观察肝脏病理改变;qRT-PCR检测小鼠肝脏及血清中炎症因子的表达。(2)体外机制研究:提取6周龄C57BL/6小鼠骨髓巨噬细胞,并分为3组(n=3):对照组、脂多糖(LPS)+干扰素-γ(IFN-γ)组及MSCs组。对照组为未处理的巨噬细胞;LPS+IFN-γ组:给予LPS和IFN-γ诱导为促炎型巨噬细胞;MSCs组:LPS+IFN-γ诱导后再经MSCs共培养24 h。处理结束后,通过流式细胞技术比较3组巨噬细胞表型变化,qRT-PCR比较巨噬细胞促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达。结果(1)MASH小鼠给予MSCs输注后,血清AST、ALT水平低于MASH组[AST:(51.33±5.47)U/L vs.(83.33±4.50)U/L,P<0.05;ALT:(67.67±6.71)U/L vs.(111.33±5.47)U/L,P<0.05]。与MASH组相比,MSCs输注后,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈下降趋势,甘油三酯(TG)下降明显[(0.69±0.24)mmol/L vs.(1.11±0.25)mmol/L,P<0.05],提示脂代谢得到改善。与MASH组相比,MSCs组肝细胞脂肪变减轻,炎细胞灶浸润减少,NAFLD活动度积分(NAFLD activity score,NAS)评分明显降低[(3.10±0.13)vs.(5.66±0.52),P<0.05]。MSCs组肝脏油红染色面积较MASH组明显减少[(36.30%±6.06%)vs.(53.10%±3.06%),P<0.05]。MSCs组炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6表达较MASH组明显下调(P<0.05),提示小鼠MASH明显减轻。(2)体外,LPS+IFN-γ诱导的促炎型巨噬细胞与MSCs共培养后,促炎表型CD11c的表达从79.01%±6.08%下降到39.67%±6.11%(P<0.05),抑炎表型CD206从22.67%±4.04%上升至44.67%±4.16%(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达明显下降(P<0.05),提示巨噬细胞的促炎能力被明显抑制。结论间充质干细胞可以减轻代谢功能障碍相关脂肪性肝炎,可能与抑制促炎型巨噬细胞的促炎能力有关。

人骨髓间充质干细胞通过YAP影响人脂肪肉瘤SW872细胞的生物学行为

目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)条件培养基(CM)与人脂肪肉瘤SW872细胞共培养后对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响,探讨hMSCs CM对脂肪肉瘤细胞的作用及可能的作用机制。方法:体外培养hMSCs,采用慢病毒方法分别转染慢病毒空载体shNS(对照组)和慢病毒shRNA Yes相关蛋白(YAP)(shYAP-hMSCs组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组hMSCs中YAP mRNA和蛋白表达水平,提取CM。体外培养SW872细胞,分为对照组(正常培养)、hMSCs CM组和shYAP-hMSCs CM组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中YAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,shYAP-hMSCs组hMSCs中YAP mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),表明成功构建了shYAP-hMSCs稳定转染细胞株。CCK-8法,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞增殖活性升高(P<0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞增殖活性降低(P<0.01);流式细胞术,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞凋亡率无明显变化(P>0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞凋亡率升高(P<0.01);细胞划痕实验,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞划痕愈合率升高(P<0.05),shYAP-hMSCs CM组SW872细胞划痕愈合率降低(P<0.01);Western blotting法,与对照组比较,hMSCs CM组SW872细胞中YAP、MMP-9和cyclin D1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),shYAP-hMSCs组SW872细胞中YAP、MMP-9和cyclin D1蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hMSCs参与调控人脂肪肉瘤SW872细胞增殖和迁移,其机制可能与YAP表达有关。

脂肪间充质干细胞过表达骨形态发生蛋白2促进骨质疏松大鼠牙槽骨缺损修复

背景:颌骨在骨质疏松症中最容易受累,脂肪间充质干细胞和骨形态发生蛋白2具有促进骨质疏松症骨再生的效果,然而骨形态发生蛋白2修饰的脂肪间充质干细胞对骨质疏松症牙槽骨缺损的修复作用鲜有报道。目的:探究过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞对骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的修复作用。方法:①将过表达骨形态发生蛋白2基因的慢病毒感染大鼠脂肪间充质干细胞,通过检测绿色荧光蛋白和骨形态发生蛋白2表达进行鉴定;②切除卵巢建立骨质疏松大鼠模型,于上颌两侧第一磨牙位置制备3 mm×3 mm×3 mm的圆柱形缺损;③假手术组和骨质疏松组大鼠植入明胶海绵,脂肪间充质干细胞组植入空载体慢病毒感染的脂肪间充质干细胞与明胶海绵复合体,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组植入过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞与明胶海绵复合体,1个月后进行相关指标检测。结果与结论:①脂肪间充质干细胞组和过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组转染效率均达到70%以上;与脂肪间充质干细胞组相比,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组骨形态发生蛋白2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);②假手术组骨缺损区可见大量新骨生成;与假手术组相比,骨质疏松组有少量新骨生成,新骨面积明显减小,碱性磷酸酶、骨钙素及骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白水平明显降低;与骨质疏松组相比,脂肪间充质干细胞组和过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组有大量新骨生成,新骨面积明显增加,碱性磷酸酶、骨钙素及骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白水平明显升高,且过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞组优于脂肪间充质干细胞组(均P<0.05);③结果表明,骨形态发生蛋白2在骨质疏松大鼠牙槽骨表达较少,过表达骨形态发生蛋白2的脂肪间充质干细胞能够促进骨质疏松大鼠牙槽骨缺损的成骨再生。

影响肝硬化失代偿患者人脐带间充质干细胞治疗效果的影响因素探究

目的探讨多次进行人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)肝内移植及不同时间间隔治疗失代偿期肝硬化患者的临床疗效。方法选取河南科技大学第一附属医院2021年02月-2023年12月失代偿期肝硬化自愿接受治疗患者51例,随机分为单次移植组、多次移植组和对照组,各17例。对比三组实验室指标、影像学检查以及不良反应发生率。结果治疗前,三组肝功能及凝血功能指标差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,多次移植组谷丙转氨酶、总胆红素低于单次移植组与对照组,白蛋白水平高于单次移植组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05);单次移植组白蛋白水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。多次移植B组谷丙转氨酶、总胆红素低于A组,白蛋白高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。经影像学检查显示,多次移植组肝脏占位病变、门静脉血栓以及腹水发生率均低于单次移植组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05);单次移植组肝脏占位病变、门静脉血栓以及腹水发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者治疗过程中均未出现严重不良反应,仅多次移植组术后发生2例发热,经对症处理后消失。三组不良反应对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论HUC-MSCs多次移植治疗肝硬化失代偿期患者具有良好的临床疗效,能够有效改善患者的肝脏功能,预防相关并发症的发生。同时,HUC-MSCs多次移植治疗的频率、间隔时间对疗效也有一定的影响,其中间隔3个月的疗效优于间隔1个月。

脂肪间充质干细胞对小型猪肝缺血再灌注合并肝切除组织细胞焦亡的影响

本研究旨在探究脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对小型猪肝缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)合并肝切除组织细胞焦亡的影响。将18头巴马小型猪随机平分成3组,每组6头,分别为假手术组(sham组)、模型组(IRI组)、异体移植ADSCs干预组(ADSCs组,剂量为1×10^(6)cells·kg^(-1)),通过腹腔镜微创技术建立肝IRI合并肝切除损伤模型,于术后即刻分别向IRI组和ADSCs组小型猪肝实质注射生理盐水和ADSCs。于术后1、3和7 d采集血液和肝组织样本。应用ELISA法对血清中促炎因子白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量进行测定,应用RT-qPCR技术和Western blot技术对细胞焦亡相关基因与蛋白进行检测。结果显示,术后1、3 d时,相比于sham组,IRI组血清中促炎因子IL-18、IL-1β含量显著增加(P<0.01),肝组织中IL-18、IL-1β基因与蛋白表达量同样显著升高(P<0.01);肝组织中细胞焦亡相关因子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、Caspase-1、GSDMD和核因子κBp65(nuclear factor kappa-Bp65,NF-κBp65)基因与蛋白水平均显著升高(P<0.05)。经ADSCs干预后,血清和肝组织中IL-18、IL-1β表达量显著降低(P<0.05),肝组织中细胞焦亡相关因子NLRP3、ASC、GSDMD和NF-κBp65基因与蛋白水平均显著降低(P<0.05)。综上,本研究证明,小型猪腹腔镜肝IRI合并肝切除损伤会诱导细胞焦亡的发生,而ADSCs能够降低及改善这种肝损伤引起的组织细胞焦亡损伤。

诱导多能干细胞来源的间充质干细胞的治疗潜力与应用风险

诱导多能干细胞衍生的间充质干细胞(iMSC)已被提出作为原代间充质干细胞(MSC)的替代来源,在疾病治疗相关研究中也显示出多种优势。但是iMSC更适用于何种疾病类型,以及是否具有潜在的风险均未被充分阐明。本研究利用公共数据库中的高通量测序数据,将iMSC与骨髓源的MSC(BM-MSC)、脂肪源的MSC(AD-MSC)和脐带源的MSC(UC-MSC)进行对比,通过不同生物信息学方法,包括差异表达基因分析、功能富集分析、蛋白质相互作用网络分析及CMap数据库筛选,结果表明,iMSC具有独特的基因转录特征,与3种常用的MSC在基因表达上存在显著差异,特别是在神经、肌肉发育和免疫调节相关基因表达上;差异基因的功能富集分析进一步证实,iMSC在神经相关疾病治疗中表现出潜在优势,同时具有较低的免疫原性,但也存在较高的成瘤性风险;通过CMap数据库分析,识别了可能抑制iMSC成瘤性的基因靶点和小分子抑制剂,为降低iMSC应用风险提供了可能的策略。综上所述,iMSC作为细胞治疗的潜在来源,在神经疾病治疗中具有潜在优势,但其安全性需通过更多实验和临床研究来验证。

间充质干细胞源性外泌体对肝纤维化潜在治疗机制的研究进展

大多数慢性肝脏疾病的病理过程中存在肝纤维化。间充质干细胞分泌的外泌体可通过抑制炎症反应和肝星状细胞活化增殖、调节免疫细胞及代谢等机制调控肝纤维化。因此,间充质干细胞来源的外泌体作为慢性肝病的一种无细胞治疗,为慢性肝病的治疗扩展新思路。本文对近年来间充质干细胞来源的外泌体治疗肝纤维化的研究进展进行综述。

脂肪间充质干细胞外囊泡通过增加LC3B表达对人微血管内皮细胞损伤的影响

目的:探讨低氧微环境诱导下脂肪间充质干细胞(ADSCs)外囊泡(Evs)通过增加微管相关蛋白轻链3B(LC3B)表达对人微血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:分离大鼠ADSCs,并通过成骨、成脂分化和细胞表面标志物的表达进行鉴定。利用常氧(21%O2)和低氧(1%O2)条件分别获得常氧Evs和低氧Evs,通过形态和表面标志物的表达进行鉴定。构建心肌微血管内皮细胞(CMECs)细胞氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型,并将CMECs分为对照组(Control组)、氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组)、常氧Evs组(N-Evs组,给予常氧Evs培养24 h)、低氧Evs组(H-Evs组,给予低氧Evs培养24 h)、低氧Evs+自噬抑制剂组(H-Evs+3-MA组,给予低氧Evs和3-MA 5 mmol/L培养24 h)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、划痕实验、Transwell实验、管腔形成实验和透射电镜分别检测CMECs增殖、迁移、侵袭、血管形成和自噬能力;采用酶联免疫吸附法(Western Blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、基质金属蛋白酶(MMP)-2/MMP-9、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、LC3B、重组人自噬效应蛋白1(Beclin1)蛋白表达。结果:与Control组比较,OGD/R组CMECs增殖、迁移、侵袭、血管形成、自噬能力减弱(P<0.05),PCNA、Ki67、MMP-2/MMP-9、HIF-1α、VEGF、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达减少(P<0.05)。与OGD/R组比较,N-Evs组和H-Evs组CMECs增殖、迁移、侵袭、血管形成、自噬能力增强(P<0.05),PCNA、Ki67、MMP-2/MMP-9、HIF-1α、VEGF、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达增加(P<0.05),且H-Evs组优于N-Evs组(P<0.05)。与H-Evs组比较,H-Evs+3-MA组CMECs增殖、迁移、侵袭、血管形成、自噬能力减弱(P<0.05),PCNA、Ki67、MMP-2/MMP-9、HIF-1α、VEGF、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达减少(P<0.05)。结论:低氧微环境诱导下的ADSCs-Evs通过增加LC3B表达可促进OGD/R损伤CMECs的增殖、迁移、侵袭、血管形成和自噬能力。

脐带间充质干细胞输注对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病患者的疗效评估:一项前瞻性临床试验的事后分析

背景2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)和非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)常并发,二者共患可加剧并发症及靶器官的损害。近年来国内外间充质干细胞治疗代谢病正在兴起,但其临床研究比较缺乏。目的分析脐带来源的间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cell,UC-MSC)对T2DM和NAFLD共病患者的治疗效果。方法本研究是一项前瞻性、单中心、随机、双盲试验的事后分析,选取2015年10月—2018年12月就诊于解放军总医院第一医学中心内分泌科的T2DM合并NAFLD患者,按照随机化原则1∶1分配至UC-MSC组和安慰剂组。对治疗前后患者的血糖控制水平、胰岛素抵抗水平、肝超声结果、肝纤维化程度、部分脂质代谢和肝功能指标进行比较。结果UC-MSC组男22例,女11例,平均年龄(51.36±8.85)岁;安慰剂组男性22例,女性10例,平均年龄(50.47±8.42)岁;两组性别、年龄及基线信息差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗9周后,UC-MSC空腹血糖水平显著低于治疗前[(7.46±1.79)mmol/L vs(8.33±1.80)mmol/L,P=0.001],并在治疗9周[(7.46±1.79)mmol/L vs(8.19±1.95)mmol/L,P=0.007]和20周[(7.51±1.77)mmol/L vs(9.10±2.78)mmol/L,P=0.002]时显著低于安慰剂组。同时,糖化血红蛋白达标(<7.0%)比例在治疗的第9周(60.60%vs 28.10%,P=0.008)、第20周(51.50%vs 25.00%,P=0.028)和第48周(48.50%vs 12.50%,P=0.002),UC-MSC组患者显著高于安慰剂组。在第20周,UC-MSC组在肝超声检查结果上呈现出改善的患者比例高于安慰剂组(45.45%vs 18.75%,P=0.021)。高胰岛素正葡萄糖钳夹实验结果显示,UC-MSC组在第9周和第48周的葡萄糖输注率较基线有所提高,并在第48周显著高于安慰剂组[(4.77±1.70)mg/(min·kg)vs(3.57±1.76)mg/(min·kg),P=0.007]。UC-MSC组在治疗过程中三酰甘油和γ-谷氨酰转移酶水平持续优于基线水平,总胆固醇在第9周和第48周均显著低于基线,丙氨酸转移酶在第20周显著降低,而天冬氨酸转移酶水平在各时间点均无显著变化。结论UC-MSC治疗可在一定程度上改善T2DM合并NAFLD患者的血糖控制、胰岛素敏感性、脂肪肝表现及脂质代谢状况。

大鼠脂肪间充质干细胞及其外泌体的蛋白组学对比分析

背景:从蛋白组学方面分析脂肪间充质干细胞及其来源外泌体促进组织修复的研究较多,但缺少二者之间的蛋白组学对比分析。目的:对脂肪间充质干细胞及其外泌体进行蛋白组学分析。方法:分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,从细胞上清液中提取外泌体并进行鉴定;运用DIA蛋白组学分析大鼠脂肪间充质干细胞及其外泌体差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行GO和KEGG分析。结果与结论:①脂肪间充质干细胞以长梭形为主,类似成纤维样;②经BCA法测定外泌体悬液的蛋白质量浓度为7.66 mg/mL;③外泌体呈典型的茶杯型,可见双层膜的囊泡结构,中央为低电子密度成分,外泌体粒径分布峰值为112.2 nm,浓度为7.5×10^(11)粒子/mL,平均直径在70-140 nm之间;④外泌体有表面标记蛋白CD9、TSG101高表达;⑤GO分析脂肪间充质干细胞及其外泌体的差异表达蛋白主要集中在细胞外基质和突触等位置,与离子结合和核糖体的结合能力相关,在细胞黏附和翻译过程中最为显著;⑥KEGG通路分析结果显示,差异表达蛋白主要参与细胞外基质受体交互、核糖体和细胞因子受体相互作用等,并且与胆固醇和甲状腺等多种代谢性疾病有关。

重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化

本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导犬AMSCs向IPCs分化中的作用,在此基础上联合胰岛细胞发育过程中起关键作用的级联调控因子Pdx1、Ngn3、Pax4、Nkx6.1,组成三种不同的多基因共表达腺病毒感染犬AMSCs,重编程其向IPCs分化,通过检测筛选出最佳诱导组合。结果表明,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用。pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3(A)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Pax4(B)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Nkx6.1(C)三种组合的多基因共表达腺病毒载体,在感染犬AMSCs 25 d后,A、B、C三组均形成胰岛样细胞团,且B组数量最多,双硫腙染色着色最深;高糖刺激下B组的胰岛素分泌量极显著高于A组和C组。A、B、C三组的胰岛细胞发育相关基因表达量显著升高;B组Pdx1基因的表达量显著高于A组和C组,Pcsk1基因表达量极显著高于C组;Ins基因的表达量显著高于A组。综上所述,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用,Hnf1b、Pdx1、Ngn3和Pax4基因联合诱导效率最佳。该研究结果为探究干细胞向IPCs分化的更高效方法提供新参考,也为糖尿病的临床治疗提供新思路。