自体表皮细胞-纤维蛋白膜创面移植治疗大鼠烧伤

目的:观察自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植到大鼠烧伤创面治疗皮肤缺损的效果。方法:健康Wistar大鼠20只,随机分成烧伤皮肤缺损造模组和自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组,治疗后计算表皮细胞在纤维蛋白膜上最佳接种密度,观察移植后的各组创面愈合情况、创面伤口的收缩比例等。结果:在纤维蛋白膜上接种表皮细胞的最佳密度为5×104/㎝2,烧伤皮肤缺损造模组创面完全愈合时间平均22.3 d,自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组为18.1 d,造模组创面收缩率为(70±5)%,移植组为(20±5)%(均P<0.05)。结论:自体表皮细胞-纤维蛋白膜可用于覆盖大面积烧伤造成的皮肤缺损,预防创面伤口瘢痕化的形成,减轻创面收缩率,加速皮肤缺损创面的愈合速度。

成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

目的 探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法。为组织工程皮肤的构建提供种子细胞。方法 通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞，再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸（EDTA）消化并制成单个表皮细胞悬液，接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内．以Dulbecco改良Eagle培养基／F12（DMEM／F12，1：1）作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养，37℃静置10～l5min，留用快速贴壁细胞继续培养，所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19（K19）免疫细胞化学染色进行鉴定。结果 人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24h后细胞呈克隆状生长；电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征；细胞周期分析示，第2代中静息期／DNA合成前期（G0／G1期）细胞占86．83％。β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性。结论 成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养。

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞TGF-β_1 mRNA及PAI-1mRNA表达的影响

目的:研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)和纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1mRNA(PAI-1mRNA)表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,用实时定量PCR方法测定各组HMCTGF-β1以及PAI-1mRNA表达,并以福辛普利为对照。结果:虫草肾茶胶囊高、中剂量组及福辛普利组TGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达均低于高糖组,且以虫草肾茶胶囊高剂量组表达最低(P<0.05)。结论:高糖可促进HMCTGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达,虫草肾茶胶囊可下调高糖刺激下HMCTGF-β1mRNA及PAI-1mRNA的表达,从而预防肾小球硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。

二甲双胍通过AMPK/Smad3信号通路抑制卵巢癌腹腔间皮细胞的间皮-间质转化

目的:探讨二甲双胍对人腹腔间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMC)间皮-间质转化的影响及其可能机制,以及进一步对卵巢癌细胞系SKOV3系膜清除能力的影响。方法:搜集2018年02月至2021年02月襄阳市第一人民医院妇产科正常网膜组织和高级别浆液性卵巢癌网膜转移灶标本进行免疫组织化学检测Calretinin表达情况;分离、培养原代人腹腔间皮细胞并进行Calretinin流式鉴定;Western blot和Transwell实验检测二甲双胍或肿瘤上清处理正常患者来源HPMC后其间皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、Vimentin、α-SMA)及迁移能力改变情况;Western blot检测二甲双胍、Smad3抑制剂及AMPK干扰处理前后正常来源原代人腹腔间皮细胞中MMP2、E-cadherin、Vimentin、p-AMPK和p-Smad3的表达情况;SKOV3球体的系膜清除实验验证二甲双胍预处理人腹膜间皮细胞系HMrSV5对SKOV3系膜清除能力的影响。结果:正常网膜中Calretinin表达于腹腔侧表面的腹腔内皮细胞,卵巢癌网膜转移灶表面Calretinin表达缺失,肿瘤间质中高表达Calretinin;分离培养的肿瘤来源原代人腹腔间皮细胞流式检测表现为CD326^(-)CD45^(-)CD31^(-)Calretinin^(+);二甲双胍能够抑制肿瘤上清诱导的正常来源原代HPMC的间皮-间质转化及迁移;二甲双胍能够抑制肿瘤上清诱导的正常来源原代HPMC中Smad3/MMP2通路活化和E-cadherin表达,并依赖于AMPK信号活化;二甲双胍预处理HMrSV5通过AMPK信号的介导抑制了HMrSV5的间皮-间质转化进而间接抑制了SKOV3的系膜清除能力。结论:卵巢癌转移灶中的间质成分部分来源于腹腔间皮细胞,二甲双胍通过AMPK调控的Smad3信号通路抑制其间皮-间质转化,进而抑制卵巢癌肿瘤细胞的系膜清除。

失水-吸水过程中集球藻的生理生化特性研究

荒漠结皮藻类广泛分布于干旱、半干旱地区,经常面临生存水源的短缺。以一种从荒漠结皮中分离的典型绿藻-集球藻(Palmellococcus sp.)为材料,研究其在失水-吸水过程中的某些生理生化特性。即在温室模拟条件下设置相对湿度分别为0%(极度失水)、43%(适度失水)和98%(水合,对照),测定不同失水处理对集球藻光合活性、膜脂过氧化产物丙二醛含量、细胞内可溶性物质含量和抗氧化酶活性的影响,并测定蒸馏水、BBM培养基、0.2 g/L蔗糖溶液、0.2 g/L蓝藻多糖、0.2 g/L脯氨酸和2.5 mmol/L氯霉素及50μmol/L敌草隆进行吸水处理时对失水藻体光合活性的恢复效果。结果表明,与对照处理相比,集球藻在失水过程中光合活性迅速降低,SOD和CAT活性大量升高,细胞内可溶性糖含量和可溶性蛋白含量明显增加,并且膜脂丙二醛含量出现大量积累。不同的失水-吸水处理发现,外源蔗糖和胞外多糖吸水对集球藻的光合活性有较好的恢复作用,添加脯氨酸和氯霉素吸水时光合活性也获得了一定程度的恢复,采用敌草隆吸水时则出现光合活性的明显抑制。研究结果对于更好地理解荒漠结皮绿藻对干旱的生理适应机制提供了有意义的参考。

sICAM-1和血小板PAC-1在慢性心力衰竭患者中的表达及与心功能的相关性

目的 分析可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)和血小板膜暴露纤维蛋白原受体(PAC-1)在慢性心力衰竭(CHF)患者中的表达及与心功能的相关性。方法 选取2016年7月—2017年7月收治的CHF患者92例,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分为心功能Ⅱ级组32例、Ⅲ级组34例和Ⅳ级组26例,另选取同期健康体检者41例作为健康对照组,比较4组sICAM-1、血小板PAC-1和脑钠肽(BNP)表达水平,分析NYHA心功能分级与sICAM-1、血小板PAC-1及BNP表达水平的相关性。结果 不同心功能分级CHF患者sICAM-1、血小板PAC-1和BNP水平高于健康对照组,且随着心功能分级的增高,sICAM-1和BNP水平呈不断上升趋势(P<0.05),而不同心功能分级患者间血小板PAC-1比较差异无统计学意义(P>0.05)。sICAM-1、血小板PAC-1和BNP水平与NYHA心功能分级呈正相关(P<0.01)。结论 CHF患者sICAM-1、血小板PAC-1和BNP水平较高,与NYHA心功能分级呈正相关。

益气活血通络汤联合西药治疗椎-基底动脉供血不足随机平行对照研究

[目的]观察益气活血通络汤治疗椎-基底动脉供血不足疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将90例住院患者按随机数字表法分为两组。对照组45例尼膜同片30mg/次,3次/d,口服。治疗组45例益气活血通络汤(黄芪20g,茯苓、太子参、白术、白芍、山萸肉各15g,川芎、陈皮各6g,赤芍、泽泻各12g,地龙、天麻各10g),1剂/d,水煎200mL,早晚服用。西药治疗同对照组。连续治疗14d为1疗程。观测临床症状、血浆黏度、全血黏度、纤维蛋白原、血细胞比容、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组治愈28例,显效10例,有效5例,无效2例,总有效率95.60%。对照组治愈18例,显效8例,有效9例,无效10例,总有效率77.80%。治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。血浆黏度、全血黏度、纤维蛋白原、血细胞比容两组均有改善,治疗组改善优于对照组(P<0.05)。[结论]益气活血通络汤治疗椎-基底动脉供血不足效果显著,值得推广。

保留蒂部筋膜对大鼠肋间后动脉穿支蒂皮瓣成活的影响

目的:探讨保留蒂部筋膜对大鼠肋间后动脉穿支蒂皮瓣成活的影响。方法:50只SD大鼠,雌雄不限,采用随机数字表法分为A、B 2组,每组25只。于每只SD大鼠右侧背部设计并切取以肋间后动脉穿支为蒂的皮瓣,大小为10.0 cm×2.5 cm,A组保留穿支及其周围2.5 cm×1.0 cm的筋膜组织,B组仅保留穿支,尽可能剔除穿支周围的筋膜组织,最后均将皮瓣原位缝合。观察术后2组皮瓣成活情况,并计算皮瓣成活面积百分比;切取2组皮瓣组织行HE染色,于光镜下观察标本血管生成情况,并应用Image-Pro Plus 6.0软件统计术后第7天HE染色切片中的血管密度,测量并计算血管直径及血管壁厚度;应用免疫组织化学检测2组皮瓣组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和细胞珠蛋白(CYGB)表达的情况;蛋白质印迹法检测2组皮瓣组织中HIF-1α和CYGB的蛋白相对表达量,并比较2组间的差异。计量资料以±s表示,2组间数据比较采用双侧t检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果:A组皮瓣术后成活良好,B组术后7 d皮瓣远端缺血坏死,A组皮瓣成活面积百分比为96.19%±0.65%,高于B组的88.97%±3.24%,差异有统计学意义(P<0.01)。HE染色结果显示,2组皮瓣组织均可见新生血管,A组新生血管多于B组;A组血管密度、血管直径、血管壁厚度分别为(7.77±0.92)条/mm 2、(65.23±14.62)μm、(10.49±1.99)μm,均高于B组的(5.82±0.85)条/mm 2、(40.61±7.78)μm、(6.27±2.63)μm,差异均有统计学意义(P均<0.05)。免疫组织化学结果显示,术后第1天A组HIF-1α表达高于B组,并逐渐趋于稳定;A组和B组CYGB表达于术后第7天达到高峰。蛋白质印迹结果显示,术后第1、3天A组中HIF-1α表达量高于B组(P均<0.01),于术后第5天达到峰值后逐渐下降,并趋于稳定;术后第5、7、9天B组中HIF-1α表达量高于A组(P<0.01),直至第9天出现缓慢下降的趋势。术后第3、5、9天A组中CYGB表达量均高于B组(P<0.01),A组和B组CYGB表达量均于术后第7天出现峰值。结论:大鼠肋间后动脉穿支蒂皮瓣切取时在蒂部保留部分筋膜,可提高皮瓣成活面积,可能是其中的HIF-1α的表达稳定及CYGB的表达上调所致。