大鼠自体骨骼肌卫星细胞移植治疗心肌梗死后血清血管内皮生长因子的改变及其意义

目的:了解自体骨骼肌卫星细胞移植治疗大鼠心肌梗死后血清血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的改变及临床意义。方法:30只Wistar大鼠随机分为移植组(n=15)及对照组(n=15),所有大鼠经结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。将体外培养2周的大鼠自体卫星细胞以注射的方式移植到梗死区周围,4周后病理观察移植细胞的生长、增殖情况及缺血心肌毛细血管密度的改变,并测定血清VEGF浓度及血流变参数的改变。结果:卫星细胞在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维,与对照组相比,移植组的缺血心肌毛细血管密度犤(523.42±82.14)和(430.73±65.04)/mm2,t=2.98,P<0.01犦、血清VEGF质量浓度明显增高犤(320.05±39.29)和(271.14±37.52)μg/L,t=2.37,P<0.05犦,而某些血液流变参数明显改善犤低切全血黏度:(11.09±1.52)和(13.02±1.56)mPa·s,t=2.22,P<0.05;红细胞聚集指数:7.59±0.81和8.56±0.59,t=3.25,P<0.01;卡松黏度:(1.64±0.41)和(2.26±0.41)mPa·s,t=3.66,P<0.01;卡松屈服应力:(11.23±1.54)和(12.69±1.59)Pa,t=2.23,P<0.05犦。结论:卫星细胞在心肌梗死区中可增殖分化为横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式提高血清VEGF浓度,由此改善血流变参数及缺血心肌毛细血管密度。

自体骨骼肌卫星细胞移植对MI大鼠心肌的治疗性血管新生作用

目的 了解自体骨骼肌卫星细胞移植对MI大鼠心肌的治疗性血管新生作用及其机制。方法 4 5只Wistar大鼠随机分为假手术组 (n =1 5 )、对照组 (n =1 5 )及移植组 (n =1 5 ) ,对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死 (MI)模型。将体外培养 2周的移植组大鼠自体SC以注射的方式移植到梗死区周围 ,4周后病理观察移植细胞的生长、增殖情况 ,测定缺血心肌中VEGFmRNA、VEGF蛋白的表达情况及缺血心肌毛细血管密度的改变。结果 SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维。与假手术组及对照组相比 ,移植组缺血心肌中VEGFmRNA、VEGF蛋白的表达及毛细血管密度均明显增高 (P <0 0 1或 0 0 0 1 )。结论 SC在心肌梗死区中可增殖分化为横纹肌样细胞 ,并通过自分泌和旁分泌的方式增加缺血心肌VEGF的表达 。

自体骨骼肌卫星细胞移植治疗冠心病的实验及临床研究

目的:研究骨骼肌卫星细胞在心肌微环境下的转归及移植对心功能的影响,并在动物实验成功的基础上进行临床验证。方法:①动物实验:苏中幼猪,随机分为治疗组和对照组,各5只,治疗组切取骨骼肌标本,获取卫星细胞,体外培养扩增后以二脒基苯基吲哚标记;结扎冠状动脉的方法建立急性心肌梗死模型,通过局部方法将卫星细胞植入梗死区及周边区,对照组予以相同量的、不含卫星细胞的培养液接种,观察移植4周后卫星细胞的分化和转归;核素心血池检测心功能。②临床验证:对4例心肌梗死患者给予冠脉旁路移植术和/或自体骨骼肌卫星细胞移植。观察手术前后患者心功能及左室形态变化。结果:动物实验:卫星细胞接种培养后48h开始贴壁,细胞呈梭形。将细胞培养液中胎牛血清浓度降至20g/L以下时,细胞生长停滞,相互融合形成肌管。治疗组梗死区及周边心肌内HE染色可见孤岛状、带横纹的肌纤维,肌细胞核位于周边,细胞之间未见闰盘连接;对照组梗死区为均一纤维疤痕组织,无肌细胞存在。电镜检查:治疗组梗死区见带横纹肌纤维,肌细胞之间未见闰盘连接。两组1周时左室射血分数比较,差异无统计学意义(23±2)%和(26±3)%,t=0.074,P>0.05;在4周时,治疗组左室射血分数明显比对照组提高(33±2)%和(40±2)%,t=6.085,P<0.001。临床验证:4例患者卫星?

自体骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的了解自体骨骼肌卫星细胞(satellitecell,SC)移植至心肌对心肌梗死(myocardialinfarction,MI)大鼠心功能的影响及其可能机制。方法45只Wistar大鼠采用随机抽签法分为假手术组、对照组及移植组,对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型。将体外培养2周的大鼠自体SC以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围,4周后测定各组大鼠血流动力学、心功能、血清血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)浓度及缺血心肌毛细血管密度的变化,同时观察移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系。结果SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维;与假手术组比较,尽管对照组及移植组大鼠之收缩压、舒张压、平均动脉压、左室收缩压及左室压力最大上升/下降速率均明显降低(P<0.05,P<0.01),左室舒张末压均明显增高(P<0.01),但移植组左室压力最大上升速率、左室压力最大下降速率及左室舒张末压较之对照组则有明显改善(P<0.05,P<0.01);SC移植4周后,对照组大鼠毛细血管密度较之假手术组明显增高(P<0.05);移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度及血清VEGF浓度较之假手术组、对照组亦明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论SC在心肌梗死区中能增殖分化为横纹肌样细胞,并可分泌VEGF促使缺血心肌毛细血管增生,从而共同参与改善心功能。

自体骨骼肌卫星细胞移植治疗心肌梗死后心衰的实验研究

目的 :研究骨骼肌卫星细胞植入梗死区心肌组织后对心功能的影响 .方法 :幼猪 10只 ,对照组和治疗组各 5只 .治疗组从幼猪三角肌群处切取骨骼肌标本 ,获取卫星细胞 ,体外培养扩增 ,结扎冠状动脉建立幼猪的急性心肌梗死模型 ,通过局部注射的方法将卫星细胞植入梗死周边区及梗死区心肌 .对照组以同样的方法建立心肌梗死模型 ,予以等量的、不含卫星细胞的培养液接种 ,观察移植 4wk后卫星细胞移植对心功能的影响 .结果 :卫星细胞接种培养后 4 8h开始贴壁 ,细胞呈梭形 ,将细胞培养液中胎牛血清浓度降至 2 0mL·L-1以下时 ,细胞生长停滞 ,相互融合形成肌管 ;HE染色治疗组梗死区可见岛状、带横纹的肌肉组织 ,肌细胞核位于周边 ,光镜及电镜移植细胞及移植细胞与宿主细胞之间均未见闰盘连接 ;对照组梗死区为均匀一致的纤维疤痕组织 ;对照组 1wk左室射血分数 (LVEF)为 (2 3± 2 ) % ,4wk为 (33± 2 ) % ,治疗组 1wk为 (2 6± 3) % ,4wk为 (4 0± 2 ) % ,治疗组与对照组 1wk比较 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;而 1wk与 4wk比较 ,有统计学差异 (P <0 .0 0 1) ,治疗组与对照组 4wk比较 ,LVEF有统计学差异 (P <0 .0 1) .治疗组 1wk与 4wk比较 ,1/3充盈分数 (1/3FF)有统计学差异 (P <0 .0 5 ) .结论

自体骨骼肌卫星细胞移植改善心功能的实验研究

目的:探讨移植骨骼肌卫星细胞(satellite cell,SC)治疗心肌梗死,改善心功能的机制。方法:雄性苏中幼猪10头,随机分成实验组与对照组。实验组采用改良Dorfman法培养SC。开胸结扎冠状动脉对角支制作急性心肌梗死模型。实验组心肌内注射种植体外扩增的自体SC,对照组注射等量细胞培养液。单电子发射断层扫描(SPECT)行心血池显像检查评估治疗前后的心功能变化。结果:①SC贴壁生长,延迟分瓶或降低培养液中胎牛血清(FBS)浓度,SC相互融合形成肌管。②实验组梗死区室壁厚度大于对照组,内见新生的带横纹的肌纤维,细胞问无闰盘。③实验组术后4周左室射血分数(EF)、1/3射血分数(1/3EF)、1/3充盈分数(1/3FF)优于对照组。结论:SC易于获取和体外扩增培养,移植于自体心脏可存活,通过提供具有收缩功能的细胞、阻断心室重构过程,改善心脏顺应性提高心功能。

自体骨骼肌卫星细胞移植治疗急性心肌梗死的研究

目的 研究自体骨骼肌卫星细胞 (SC)移植对心肌梗死的治疗作用。方法 雄性苏中幼猪 10头 ,随机分为实验组与对照组。实验组采用改良Dorfman法培养SC ,开胸结扎冠状动脉对角支制作急性心肌梗死模型。实验组心肌内注射种植体外扩增的自体SC ,对照组注射等量细胞培养液。通过心血池显像了解心功能变化 ,评估SC移植对心肌梗死的治疗作用。 4周后处死动物 ,取出心脏标本 ,通过病理形态学观察SC存活和分化情况。结果 SC呈梭形 ,贴壁生长 ,延迟分瓶或降低培养液中胎牛血清浓度 ,SC生长停滞 ,相互融合形成肌管 ;实验组梗死区内见新生的带横纹的肌纤维 ,排列方向大体一致 ,多核 ,核位于周边 ,细胞间未见闰盘样结构 ;实验组术后左室射血分数 (EF)、 1/3射血分数 (1/3EF)优于对照组。结论 SC易于获取和体外扩增培养 ,移植于自体心脏可存活并改善心功能。

碱性成纤维细胞生长因子基因修饰骨骼肌卫星细胞自体移植急性心肌梗死组织的血管新生

背景:前期研究发现,骨骼肌卫星胞移植能够诱导心肌梗死区新生血管形成,缩小梗死面积,改善其心功能,但整体效果并不太理想。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因修饰骨骼肌卫星细胞在急性心肌梗死区的存活及对心肌梗死区血管新生的影响。方法:将18只新西兰大白兔随机分为3组,实验组、对照组结扎冠状动脉左前降支,构建急性心肌梗死动物模型;空白对照组只穿线,不结扎。造模成功即刻,实验组于局部梗死心肌内注射DAPI标记的碱性成纤维细胞生长因子基因修饰自体骨骼肌卫星细胞悬液50μL,对照组注射等量DAPI标记的自体骨骼肌卫星细胞。细胞移植4周后取标本,观察心肌梗死区骨骼肌卫星细胞存活及成纤维细胞生长因子基因表达情况,免疫组织化学染色检查心肌梗死区新生血管形成情况。结果与结论:(1)空白对照组未见DAPI标记的细胞,对照组及实验组缺血心肌区域均可见大量DAPI标记的骨骼肌卫星细胞,实验组还可见大量EGFP-碱性成纤维细胞生长因子融合蛋白绿色荧光表达;(2)实验组、对照组新生微血管密度多于空白对照组(P<0.05),实验组新生微血管密度多于对照组(P<0.05);(3)结果表明,碱性成纤维细胞生长因子修饰骨骼肌卫星细胞可在急性心肌梗死区存活,促进心肌梗死区血管新生。

移植方法对自体骨骼肌卫星细胞心肌再生的影响

目的研究不同移植方法对骨骼肌卫星细胞心肌内移植后心肌再生作用的影响。 方法自犬臀部取骨骼肌提取、培养、扩增骨骼肌卫星细胞 ,4’ ,6 -diamidino - 2 - phenylindone(DAPI)荧光标记 ,经局部注射和结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗塞区域 ,2、4、8周后处死动物 ,取心肌标本行组织形态学检查。结果DAPI标记卫星细胞效果良好 ,在梗塞区、乳头肌及局部注射部位均观察到带荧光的卫星细胞 ,部分已分化成带横纹的肌纤维并以闰盘相连。经冠状动脉灌注移植的卫星细胞排列有序 ,与心肌细胞排列方向一致 ,而局部注射移植的卫星细胞排列紊乱。 结论骨骼肌卫星细胞经冠状动脉灌注移植所形成的肌纤维排列有序 ,分布于整个梗塞区域 ,有利于心肌再生。

自体骨骼肌卫星细胞心肌移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响

目的了解自体骨骼肌卫星细胞(satellite cell,SC)心肌移植对心肌梗死(myocardial infarction,MI)大鼠心肌纤维化的影响及可能机制。方法45只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=15)、对照组(n=15)及移植组(n=15),对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立MI模型;假手术组除不结扎左前降支外,其余操作同对照组和移植组。将体外培养2周的大鼠自体SC以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围,4周后测定各组大鼠缺血心肌VEGFmRNA的表达、VEGF蛋白质的表达、缺血心肌毛细血管密度的变化及缺血心肌的纤维化程度,同时观察移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系。结果SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维;SC移植4周后,与假手术组比较,对照组大鼠缺血心肌中毛细血管密度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度及VEGFmRNA、VEGF蛋白质的表达较之假手术组、对照组亦明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01或0.001)。移植组心肌梗死区域的纤维化被有效抑制,而对照组则呈现出明显的纤维化特征。结论SC在心肌梗死区中可增殖分化为具有弹性和收缩功能的横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式分泌VEGF促使缺血心肌毛细血管增生,从而有效地抑制了缺血心肌的纤维化进程。

自体骨骼肌卫星细胞心肌移植对心肌梗死大鼠心室重构的影响

目的:了解自体骨骼肌卫星细胞心肌移植对心肌梗死大鼠心室重构的影响及可能机制。方法:实验于2004-03/06在第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室完成。45只Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、对照组及移植组,每组各15只。①对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型;假手术组除不结扎左前降支外,其余操作同对照组和移植组。②将体外培养2周的大鼠自体卫星细胞以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围。③4周后测定各组大鼠心室质量及质量指数、血管内皮生长因子mRNA及血管内皮生长因子蛋白质的表达、缺血心肌毛细血管密度的变化,同时观察移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系。结果:45只大鼠,实验中假手术组及移植组死亡3只,对照组死亡4只,进入结果分析35只。①卫星细胞在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维。②卫星细胞移植4周后,移植组及对照组左室质量、右室质量、左室质量指数(左室质量/体质量)及右室质量指数(右室质量/体质量)比假手术组均明显增加[左室质量:(621.25±25.34),(699.82±47.38),(550.33±21.47)mg,P<0.001,0.001;右室质量:(192.92±26.83),(219.82±38.23),(160.08±19.63)mg,P<0.01,0.001;左室质量指数:(2.36±0.20),(2.69±0.07),(2.12±0.05)mg/g,P<0.001,0.001;右室质量指数:(0.73±0.09),(0.84±0.11),(0.61±0.02),P<0.001,0.001];移植组左室质量、左室质量指数及右室质量指数比对照组明显减低(P<0.001,0.001,0.01)。③移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度及血管内皮生长因子mRNA、血管内皮生长因子蛋白质的表达较之假手术组、对照组亦明显升高[(523.42±82.14),(378.23±43.16),(430.73±65.04)n/mm2,P<0.001,0.01;1.601±0.251,0.582±0.066,0.590±0.072,P<0.001,0.001;0.148±0.030,0.110±0.012,0.117±0.014,P<0.001,0.01]。结论:卫星细胞在心肌梗死区中可增殖分化为具有弹性和收缩功能的横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式增加血管内皮生长因子的表达,促使缺血心肌毛细血管增生,从而抑制心室重构过程。

大鼠自体骨骼肌卫星细胞向心肌梗死区移植后血液流变特性的改变

目的了解大鼠自体骨骼肌卫星细胞(SC)梗死心肌移植后血液流变特性的改变及临床意义。方法45只W istar大鼠随机分为假手术组(n=15)、对照组(n=15)及移植组(n=15),对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立M I模型;假手术组除不结扎左前降支外,其余操作同对照组和移植组。将体外培养2周的大鼠自体SC以注射的方式移植到移植组大鼠梗死区周围,4周后测定大鼠血清VEGF浓度(酶联免疫吸附法)、血液流变学参数的改变以及大鼠缺血心肌中VEGFmRNA(RT-PCR法)、VEGF蛋白(免疫组化法)的表达情况,同时病理检测移植细胞在梗死区的生长、增殖情况并探讨它们相互的关系。结果SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维。移植组大鼠血清VEGF浓度及缺血心肌中VEGFmRNA、VEGF蛋白质的表达较之假手术组、对照组明显升高(P<0.05或0.01或0.001),而某些血液流变学参数明显改善(P<0.05或0.01)。结论SC在心肌梗死区中可增殖分化为横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式增加VEGF的表达进而提高血清VEGF浓度,由此改善血液流变学参数。

梗死心肌骨骼肌卫星细胞移植后心肌细胞结蛋白变化

目的 观察骨骼肌卫星细胞梗死心肌移植后心肌细胞结蛋白的变化。 方法 自犬臀部取骨骼肌体外提取、培养、扩增骨骼肌卫星细胞 ,4′,6 -二脒基 - 2 -苯吲哚 (DAPI)荧光标记 ,经结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗死区域 ,2周、4周和 8周后将犬处死 ,取病理标本行免疫组织化学检测心肌细胞结蛋白表达、组织切片染色观察组织结构。 结果 在梗死区部位观察到带荧光的细胞核及肌纤维 ,部分已分化成横纹肌并以闰盘相连。正常区域心肌细胞结蛋白排列位于心肌细胞 Z线处 ,可见清晰显示的肌小节 ;梗死区心肌细胞结蛋白表达明显高于正常区域心肌细胞 ,但排列紊乱 ,整个心肌细胞均见阳性表达的结蛋白 ,未见肌小节 ;4周、8周时治疗组部分梗死心肌细胞已恢复排列并重见肌小节 ,但梗死区心肌细胞结蛋白表达仍明显高于正常区域心肌细胞 (P<0 .0 1)。 结论骨骼肌卫星细胞梗死心肌移植后对梗死心肌的组织结构起到了保护作用 。

骨骼肌卫星细胞移植对残存心肌细胞游离Ca^(2+)的影响

目的研究骨骼肌卫星细胞移植对梗塞心肌残存心肌细胞游离Ca2 +分布及Ca2 +波的恢复作用。方法自犬臀部取骨骼肌 ,提取、培养、扩增骨骼肌卫星细胞 ,4’ ,6-diamidino -2 -phenylindone(DAPI)荧光标记 ,经结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗塞区域 ,2、4、8周后处死动物 ,取心肌标本行组织形态学、心肌细胞游离Ca2 +分布及Ca2 +波检测。 结果梗塞区观察到带荧光的细胞核及肌纤维 ,部分已分化成横纹肌并以闰盘相连。梗塞区残存心肌细胞游离Ca2 +增加 ,Ca2 +波峰出现明显晚于正常区域心肌细胞 ,且峰值低于正常心肌细胞。骨骼肌卫星细胞移植 8周后 ,梗塞区残存心肌细胞游离Ca2 +分布及Ca2 +波峰恢复正常。 结论经冠状动脉灌注移植骨骼肌卫星细胞使梗塞心肌残存心肌细胞游离Ca2 +分布及Ca2 +波恢复 ,利于心肌收缩力的恢复。

骨骼肌卫星细胞移植到大鼠体内生长发育的初步研究

目的探讨胶体金标记方法的可行性以及卫星细胞移植到正常大鼠左心室心肌后的生长分化情况。方法将胶体金标记的骨骼肌卫星细胞移植到正常大鼠心肌中,用免疫组化、共聚焦免疫荧光双标染色及透射电镜多种方法观察卫星细胞的增殖分化情况。结果移植细胞可以在宿主心肌中生长分化。在移植后1月,有多核的肌管和骨骼肌纤维形成,但移植细胞与心肌细胞之间未见连接。结论胶体金标记方法适用于光镜、电镜研究。卫星细胞移植到正常大鼠左心室心肌后能够增殖分化为骨骼肌纤维,但没有与宿主心肌产生连接。

骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响(英文)

背景:现已发现心肌梗死后心肌纤维化是心室重构的重要机制,而相关干细胞心肌移植对这一过程的影响报道不多。目的:观察自体骨骼肌卫星细胞移植对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响,并探讨其可能机制。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/09在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所第三研究室完成。材料:Wistar大鼠45只,雌雄各半,体质量150～200g,其中30只用于制备心肌梗死模型。方法:45只大鼠按随机抽签法分为3组,每组15只。心肌梗死组:结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死,2周后沿梗死区与正常心肌交界处多点注射0.2mL无血清M199培养液;移植组:造模后将体外培养2周的大鼠自体卫星细胞0.2mL以注射的方式移植到大鼠梗死区周围。假手术组:不造模,仅在左前降支周围心前壁多点注射0.2mL生理盐水。主要观察指标:4周后测定各组大鼠缺血心肌血管内皮生长因子mRNA、血管内皮生长因子蛋白质的表达,缺血心肌毛细血管密度变化,苏木精-伊红染色观察各组心肌细胞在梗死区的生长、增殖情况。结果:①卫星细胞移植4周后,假手术组和心肌梗死组血管内皮生长因子mRNA和血管内皮生长因子蛋白表达较移植组明显降低(P<0.01);心肌梗死组大鼠毛细血管密度较假手术组升高(P<0.05);移植组大鼠缺血心肌中毛细血管密度较假手术组、心肌梗死组亦明显升高(P<0.01)。②苏木精-伊红染色显示假手术组大鼠心肌形态正常,结构清晰,心肌纤维排列整齐有序,肌纤维间无成纤维细胞聚集、增生现象。心肌梗死组大鼠心肌内可见成纤维细胞增生及胶原形成,心肌有序的基本结构发生紊乱。移植组大鼠其梗死区可见较多带有横纹且具有多核的肌细胞存在,组织排列较有序,纤维组织明显少于心肌梗死组。结论:卫星细胞在心肌梗死区中可增殖分化为具有弹性和收缩功能的横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的形式分泌血管内皮生长因子促使缺血心肌毛细血管增生,从而有效地抑制了缺血心肌的纤维化进程。