自体骨髓基质细胞与同种异体脱钙骨基质复合移植修复关节软骨缺损的实验研究

目的 :探讨自体骨髓基质细胞与同种异体脱钙骨基质复合移植对关节软骨缺损的修复效果。方法 :抽取兔骨髓基质细胞体外培养增殖后 ,与制备好的同种异体脱钙骨基质相结合 ,一并植入到兔膝关节实验性关节软骨缺损包 ,并与空白对照组及单纯脱钙骨基质植入对照组相比较 ,术后第 3 ,6 ,9,12周活体取材大体观察并做组织形态学观察。结果 :实验组的关节软骨缺损其修复表面渐光滑 ,接合渐牢固 ,透明软骨渐形成 ,术后 12周其软骨及软骨下骨组织基本修复 ;而对照组关节软骨缺损仅有类软骨或纤维组织修复。结论 :骨髓基质细胞来源充足 ,取材容易 ;而脱钙骨基质和骨髓基质细胞之间的组织相容性好 ;脱钙骨基质能促进骨髓基质细胞的分化 。

重组人骨形成蛋白2基因转染大鼠自体骨髓基质细胞成骨能力研究

目的 在构建的SD大鼠骨组织工程模型中 ,观察以含孔磷酸钙陶瓷为支架的基因转染自体骨髓基质细胞异位骨形成能力。方法 成年雄性SD大鼠 2 0只 ,全麻及无菌条件下取其左侧股骨及胫骨 ,将骨髓冲入75ml培养瓶中并在常规培养条件下进行体外扩增 ;5d后将部分骨髓基质细胞消化并通过LipofectAMINETM2 0 0 0介导进行重组人骨形成蛋白 (rhBMP2 )基因转染及G_4 18连续筛选 14d ;再将转染和未转染的自体细胞一同接种于经纤连蛋白表面修饰的含孔磷酸钙陶瓷上继续培养 10d,并将细胞陶瓷复合体对应地种植于大鼠背部皮下及肌肉内。分别于 2～ 2 0周处死动物 ,从形态学及组织学角度观察异位骨形成情况。结果 基因转染细胞陶瓷复合体无论种植于皮下或肌肉内均表现明显的异位骨形成能力 ;其同期骨形成与早期实验中的经诱导骨髓基质细胞陶瓷复合体异位骨形成相似。结论 应用以含孔磷酸钙陶瓷为支架的rhBMP2 基因转染自体骨髓基质细胞移植 ,可获得与诱导分化的自体骨髓基质细胞相同的成骨能力 ,说明基因转染自体骨髓基质细胞再次植入体内后 ,可相当于生物反应器 ,在增殖的同时促进干细胞的分化和成骨潜能。

诱导后自体骨髓基质细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的采用经诱导的兔自体骨髓基质细胞移植于受损关节软骨组织进行修复，并对其组织形态学进行观察。方法取新西兰兔髂棘骨髓，分离基质细胞，以含碱性成纤维生长因子 (basic fibroblast growth factor, bFGF,25 ng/ml)及转化生长因子 (transforming growth factor beta 1, TGF-β 1,2 ng/ml)的无血清培养液作诱导培养。采用明胶海绵为载体，实验组用诱导培养后的骨髓基质细胞移植修复兔自体股骨髁关节面的缺损；对照组仅进行单纯明胶海绵移植。结果诱导后的骨髓基质细胞，通过 RT- PCR检测证实有Ⅱ型前胶原 mRNA表达。移植 24周后，肉眼下实验组移植物与正常软骨组织难以区分，表面光滑。而对照组移植物在 24周后为白色松软的组织。光镜下，实验组移植 4周后新生的软骨组织即充填于软骨缺损区，甲苯胺蓝异染性明显， 12周时修复组织逐渐塑形， 24周后修复组织塑形成类似周围正常的软骨组织结构；对照组关节缺损区在各阶段无明显关节软骨修复， 24周后关节缺损区被纤维软骨样组织充填，甲苯胺蓝异染性不明显。结论经诱导后自体骨髓基质细胞移植于受损关节软骨，可促进软骨缺损的快速修复，恢复软骨组织的结构和功能。

自体骨髓基质干细胞治疗骨缺损的初步实验研究

目的 探讨自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨远端骨缺损的可行性。方法 取兔髂骨骨髓，体外分离培养扩增骨髓基质干细胞，与生物材料混合后植入体内修复兔桡骨远端骨缺损。结果 12周后X片、大体标本、组织切片均显示缺损处有新骨形成。结论 自体骨髓基质干细胞移植是修复兔桡骨远端骨缺损的理想方法。

体外菲立磁标记恒河猴骨髓基质细胞自体移植入纹状体后磁共振对标记细胞形态学的示踪观察

目的:体外菲立磁标记的骨髓基质细胞经单细胞悬液微移植后,观察将其在恒河猴纹状体的存活、迁移、分化和整合状况,为细胞移植治疗疾病奠定基础。方法:实验于2004-04/2005-05在南方医科大学珠江医院全军神经医学研究所和解放军第四军医大学神经科学研究所完成。纳入健康恒河猴3只,离恒河猴骨髓基质细胞,利用神经干细胞培养基、白血病抑止分因子和碱性成纤维母细胞生长因子进行细胞扩增并诱导成骨髓基质源神经干细胞,再经体外菲立磁和活细胞荧光染料PK67标记后,采用微移植的方法,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植入脑纹状体内。细胞移植后1,4,8周应用核磁共振成像对脑内移植的细胞进行活体示踪,最后利用光镜和电镜观察标记细胞在脑内的形态学情况。结果:①体外菲立磁标记结果:骨髓基质细胞经微移植后可在脑内纹状体区域存活,移植的干细胞可向周围的脑实质内迁移和整合,迁移细胞沿特定的纹状体结构分布,少量细胞可分化成神经元。②核磁共振成像检查结果:发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,未标记细胞侧脑组织无明显的低信号改变,与组织学切片结果基本相一致。结论:髓基质源神经干细胞移植后,可在脑内存活、迁移、分化和整合,骨利用核磁共振成像技术可以对脑内移植后的标记细胞进行初步的活体追踪。

放血增加自体骨髓基质干细胞浓度实验研究

目的:寻找提高骨髓基质干细胞浓度的方法。方法:随机取中国白兔5只,分别在干预前及干预后的第5、7、10天抽取耳缘静脉血进行网织红细胞检测;随机取中国白兔10只,于放血干预前后经股骨大转子抽取骨髓,分别进行离心前后的骨髓基质干细胞培养和计数。对结果进行分析,找出动员后骨髓基质干细胞增多最明显时间。结果:兔骨髓基质干细胞(MSCs)经放血动员后,细胞附壁数目增多,第5天最为明显,与应激前对比,有显著性差异(P<0.05)。结论:自体骨髓基质干细胞(MSCs)经放血动员和浓集后,干细胞数量明显增多。

髋关节镜下钻孔减压自体松质骨联合自体骨髓基质细胞移植手术护理配合效果探析

目的:探讨髋关节镜下钻孔减压自体松质骨联合自体骨髓基质细胞移植手术的护理配合方法及干预效果,为临床护理提供参考依据.方法:选取2014年8月-2015年10月我院收治的68例股骨头坏死患者,随机分为2组各34例,2组均行髋关节镜下钻孔减压自体松质骨联合自体骨髓基质细胞移植术,对照组给予常规手术护理配合,观察组给予综合手术护理配合,比较2组护理效果.结果:观察组手术时间及并发症发生率均显著优于对照组,远期随访显示观察组髋关节疼痛症状完全消失,不需服用镇痛药物,步态正常,对照组有7例(20.59%)髋关节疼痛症状明显,需服用镇痛药物,2组近远期效果差异显著(P<0.05).结论:围术期护理配合是改善髋关节镜治疗股骨头坏死疗效的重要因素,需要引起临床重视.

兔骨髓基质细胞组织工程骨治疗骨缺损的研究

目的 探讨应用自体骨髓基质细胞为种子细胞的组织工程骨修复骨缺损的效果。方法 将兔自体骨髓基质细胞经淋巴细胞分离液分离培养、传代扩增后 ,与胶原海绵混合培养后植于兔桡骨干 1.5cm缺损处。 12周后处死动物 ,通过大体形态及X线、组织学检查进行评价。比较细胞和胶原海绵复合物移植与单纯胶原移植治疗骨缺损的疗效。结果 以组织工程骨移植于骨缺损处 ,骨缺损完全愈合 ,骨髓腔通畅。而单纯胶原移植对照组骨缺损未愈合 ,髓腔不通 ,与实验组有明显差别。结论 骨髓基质细胞是一种良好的骨源细胞 ,能定向分化成骨细胞 ,其成骨机制为膜内化骨和软骨内化骨。

未经分离纯化和经分离纯化的自体红骨髓复合物治疗骨囊肿的临床疗效

目的比较未经分离纯化和经分离纯化自体红骨髓复合物治疗骨囊肿的临床疗效。方法对24例骨囊肿分为A、B两组,其中肱骨近端14例,股骨近端8例,胫骨远端2例,以透明质酸钠为载体抽取自体髂骨红骨髓(未经分离纯化和经分离纯化)加入甲强龙,在X线透视下,将2根骨穿针经皮分别自囊腔顶部和底部刺入骨囊肿内,抽去囊液,冲洗囊腔后注入复合物。其中21例注射1次,3例注射2次间隔2～3个月。结果本组病例随访时间10月～24月,平均18个月,骨愈合良好,无复发及并发症,治愈率100%。骨囊腔愈合时间A组4～10个月,平均6个月,B组4～9个月,平均5个月。两组比较无统计学差异。结论未经分离纯化与经分离纯化的自体红骨髓复合物相比较具有治疗骨囊肿疗效确切、方法简单、费用较低,是一种便于基层医院推广使用的新型治疗方法。

自体骨髓基质干细胞移植对扩张型心肌病心功能及血浆脑钠肽的影响

目的探索自体骨髓基质干细胞(MSCs)移植对兔扩张型心肌病(DCM)心功能及血浆脑钠肽(BNP)的影响。方法36只健康大白兔经耳缘静脉注射盐酸阿霉素建立DCM模型后,将存活兔随机分为细胞移植组、对照组和假手术组。移植前和移植后4周,采用超声心动图测定左室收缩末期内径(LVDs)、左室舒张末期内径(LVDd)及左室射血分数(LVEF),并测定血浆BNP水平。移植后4周测定血流动力学指标,免疫荧光检测移植区组织内存活的移植细胞。结果移植后4周移植组的左心室收缩压、压力变化最大速率及LVEF明显高于其他两组(P<0.01)。移植组的LVDd、LVDs和左室舒张末压较假手术组明显减小(P<0.05、P<0.01)。移植后4周移植组的血浆BNP水平显著下降(P<0.01),而对照组及假手术组中均无显著性改变;移植组组织切片可见BrdU染色阳性细胞,核发绿色荧光,其他组均未见BrdU染色阳性细胞。结论MSCs移植能改善阿霉素诱导DCM的心功能,作用机制中神经体液调节可能起重要作用。

同种异体骨髓基质干细胞辅助骨软骨镶嵌成形术修复骨软骨缺损的研究进展

组织工程学和自体骨软骨镶嵌移植成形术（Mosaicplasty）是近年来在治疗关节软骨缺损中涌现出的新的治疗方法，两者的治疗效果各有千秋，却也有不尽完美之处。组织工程的种子细胞由软骨细胞发展到自体骨髓基质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs），但细胞培养的“时间窗”却没有改变。

骨形态发生蛋白-2基因治疗对假体-骨界面影响的实验研究

目的观察假体周围骨缺损重建中,骨形态发生蛋白(BMP)2基因治疗对假体骨界面骨整合的影响。方法14条成年Beagle犬,于双侧股骨外髁造成横向骨缺损,植入光滑面钛合金假体后保持假体周围3mm骨缺损。共28侧分成4组:空白对照组(2侧),缺损区未行处理;其余分3组为无细胞组(8侧)、细胞组(8侧)和基因组(10侧),采用压缩植骨技术重建股骨髁假体周围骨缺损,分别植入犬异体冻干骨、复合自体骨髓基质干细胞的冻干骨以及复合转BMP2基因自体骨髓基质干细胞的冻干骨。通过组织学、组织形态计量学及生物力学评估假体骨界面的愈合和整合。结果术后6周,基因组假体表面明显较多的新骨沉积,可见散在的假体与新骨间点状接触,假体骨接触率(BIC)达10%左右,而空白对照组、无细胞组和细胞组界面为厚薄不一的软组织,BIC为0;12周时,空白对照组界面仍是较厚的软组织,无细胞组和细胞组的界面主要为结缔组织纤维膜,少量点状骨接触,BIC均未超过10%,基因组的假体骨界面主要为骨组织,假体骨界面可见连续性骨接触,部分BIC达50%,远高于前两组(39.2±7.5比8.4±1.3、7.2±1.5,均P<0.01)。各组的界面推出强度随时间增加,基因组的强度在各个时间段均远高于前两组(1.40±0.22比0.09±0.04、0.08±0.04,均P<0.01)。结论BMP2基因治疗可明显提高假体骨界面的骨整合。