负载肺癌全抗原的自体树突状细胞诱导T细胞反应的体外研究

目的在体外研究负载肺癌全抗原的自体树突状细胞（DCs）诱导的T细胞增殖及细胞毒作用。方法肺癌组织、正常肺组织和外周血新鲜标本均取自肺鳞状细胞癌并行手术治疗的7例患者,肺癌组织和正常肺组织制备为单细胞悬液。自外周血分离单核细胞并诱导DCs,尼龙毛柱法分离T细胞。冻融法制备自体肺癌细胞裂解液,并刺激DCs,制备负载自体肺癌全抗原的DCs。MTS法检测负载肺癌全抗原的DCs对T细胞增殖的影响;流式细胞术测定DCs表型及负载肺癌全抗原的DCs对T细胞细胞毒作用的影响。结果外周血单核细胞经GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养后,在细胞膜上出现大量的树突状突起,表面分子CD14表达显著降低（t=20.157,P〈0.01）,CD1a、CD11c、CD80、CD83和HLA-DR表达明显增加（t=8.927,3.042,14.311,18.537,5.612,P〈0.05,P〈0.01）,获得负载肺癌全抗原的成熟DCs;其能刺激自体T细胞增殖,不同患者刺激指数不同为6.98-39.15（21.56±4.38）,而且DC/T比率越高,刺激指数越高,T细胞增殖反应能力越强（t=31.203,19.550,P〈0.01）;负载肺癌细胞全抗原的DCs能诱导自体T细胞的细胞毒作用,且T细胞对自体肿瘤细胞的杀伤率为（56.52±2.75）%;对正常细胞的杀伤率平均为（5.31±1.37）%,明显低于对自体肿瘤细胞杀伤率（t=16.429,P〈0.01）。对K562细胞杀伤率为（9.71±2.46）%,明显低于对自体肿瘤细胞杀伤率（t=25.010,P〈0.01）。结论负载肺癌全抗原的DCs能诱导肺癌患者自体T细胞增殖及细胞毒作用,且体外可有力的杀伤肿瘤细胞,而几乎不杀伤正常细胞。

自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞(Treg)下调的机制。方法自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫(每只小鼠5×106/次),每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS。ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体。免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化。结果免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+Treg数量较对照组减少(P<0.01),抑制功能也显著降低(P<0.01),但血清中抗CD25的抗体增加(P<0.01)。正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调(P<0.01)。结论采用ConA活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量和功能。

灭活自体T细胞增强小鼠免疫功能作用机制的研究

接种灭活自身反应性T细胞用于治疗自身免疫性疾病已获初步成效。本研究采用辐射方法灭活ConA活化自体T细胞,经皮下和腹腔免疫正常的C57BL/6J小鼠,结果发现,该免疫方案可明显上调T细胞功能,表现为:免疫小鼠体内活化T细胞增多且Th1型细胞因子分泌增加,淋巴细胞体外增殖能力增强且凋亡细胞明显减少。进一步研究结果提示,接种灭活自体T细胞可能通过上调Fas、GADD45β及下调FasL基因表达而促进T细胞的活化和存活,并增加其生物学功能。这些结果表明,自体T细胞免疫具有增强机体的细胞免疫功能,为其抗肿瘤免疫作用提供了一定的实验依据。

自体γδT细胞回输治疗消化系统恶性肿瘤术后78例临床护理

目的:探讨自体γδT细胞回输治疗消化系统恶性肿瘤术后患者的临床效果及护理措施。方法:选取78例消化系统恶性肿瘤术后患者行自体γδT细胞回输治疗,给予精心护理,观察治疗、护理效果。结果:本组患者治疗后症状改善明显(P<0.05);卡氏(Karnofsky)评分升高57例(73.1%),增加≥20分40例(51.3%);体质量升高50例(64.1%);1年生存74例(94.9%),3年生存65例(83.3%),5年生存53例(67.9%)。结论:自体γδT细胞回输治疗消化系统恶性肿瘤术后患者效果较好,可提高卡氏评分和生存率。

Interaction between antigen presenting cells and autoreactive T cells derived from BXSB mice with murine lupus

全身的豺狼座 erythematosus (SLE ) 是包含多重系统和机关的典型自体免疫病。宽大的证据建议反应 T 房间玩的那辆汽车在这自体免疫的混乱的发展的一个枢轴的角色。这研究被承担调查在介绍房间(APC ) 和反应 T 房间(ATL1 ) 克隆从豺狼座容易的 BXSB 老鼠获得了的一辆汽车的抗原之间的相互作用的机制。ATL1 房间，在 gamma 光线照耀前后的任何一个，能激活天真的 B 房间，由 B 细胞增殖试金决定了。巨噬细胞 fromBXSB 老鼠能刺激在一个应答者 / 激发器(R/S ) 放松 ATL1 房间的增长 1/2.5 的比率。树枝状的房间(DC ) 是为 aper 房间基础上的 ATL1 房间的更强大的激发器。刺激巨噬细胞的能力的 T 房间和 B 房间，然而并非 DC，对 gamma 光线敏感照耀。对老鼠 MHC-II 和 CD4 的 Monoclonal 能堵住 ATL1 增长的调停 DC 的刺激，显示在 ATL1 andAPCs 之间的血缘的识别。我们的数据建议包含巨噬细胞， B 房间和 autoreactiveT 房间的积极反馈环可以在保留导致自体免疫病的自体免疫的回答的动量起一个枢轴的作用。

体外扩增自体外周血单个核细胞在肌萎缩侧索硬化症治疗中的应用

目的:探索体外扩增自体外周血单核细胞(PBMC)治疗肌萎缩侧索硬化症(ALS)的临床效果和安全性。方法:选取2019年9月至2020年8月南京市第二医院神经内科收治的28例ALS患者,取外周血分离PBMC后在体外用植物血凝素-L 1.25μg·ml^(-1)、白介素-25×10^(3)IU·ml^(-1)刺激3 d后培养扩增42 d。5×10^(7)PBMC细胞按输血规范静脉输入患者体内为1轮治疗,继续取上述PBMC培养扩增,如此连续6轮治疗为一疗程。应用ALS综合整体功能障碍量表(ROADS)、肌萎缩侧索硬化功能量表(ALSFRS-R)评定疗效。结果:治疗前和6次治疗后ROADS分值为31(29,40)分和36(32,42)分,治疗后分值显著增高(P<0.05)。28例患者中16例明显有效(有效率达57.1%)。患者自觉改善症状包括肌张力、肌力改善,言语不清、吞咽困难改善,呼吸较前顺畅,改善的持续时间为2周及以上。治疗3个月后ALSFRS-R分值下降,但与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05),治疗中未发现严重的不良反应。结论:体外扩增自体PBMC短期治疗ALS安全有效。做好呼吸支持,同时密切观察患者的生命体征及不良反应,是保障ALS患者自体PBMC回输治疗成功的关键。