应用DNA工作站进行批量血斑STR分型的研究

目的建立对大批量血斑样品PCR—STR基因分型检测的自动化新方法。方法应用自动化DNA工作站改良优化Chelex-100法和DNAIQ磁珠法的实验条件，建立两种批量血斑的自动化DNA提取方法；筛选确定PCR—STR反应体系的构建和PCR-STR产物测序电泳分析前处理程序。结果1104份血斑样品经Chdex-100法批量提取、Profiler Plus试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座，定量PCR测定模板浓度均值为0．43ng／ml，荧光检测信号在200～800RFU之间；对其中114份血斑样品用DNA IQ磁珠法批量提取、同试剂盒扩增均一次检出9个STR基因座，定量PCR测定模板浓度均值为0．7ng／ml，荧光检测信号在1000～2000RFU之间；对其中50份血斑进行自动和手动Chelex-100检验法比较，成功率分别为100％和98％，且前者等位基因峰高信号更均衡。结论本文建立的自动化DNA工作站批量检测方法，在成功率、稳定性、均一性等方面具有优势。

磁珠法自动化纯化现场检材DNA方法研究

目的利用TE-MAGS在TECAN工作站上结合磁珠试剂盒,建立自动化工作站批量纯化现场检材DNA的方法,并探讨其在法医物证检案中的应用。方法灵敏度测试:标准品使用0.1ng/μL 9947A,用200μL TES稀释制备DNA总量0.1ng^1ng共10种的标准样品,采用本文方法提取纯化,使用IdentifilerTM试剂盒扩增,用3130XL型测序仪检测,Gene Mapper ID-X分析,分析STR图谱质量;纯化能力测试:在1ng总量的标准样品中加入腐殖酸、血红素,采用本文方法提取纯化、扩增检测,分析STR图谱质量;实际案件应用对比:收集304份现场检材,分别采用本方法和硅珠法进行提取纯化,经扩增检测,统计对比两种提取纯化方法 STR分型成功率。结果灵敏度测试:0.1ng^0.2ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可检测到部分基因座STR图谱,0.3ng^1ng总量标准样品提取的DNA模板,扩增后可以得到完整的STR图谱;纯化能力测试:对混合有一定浓度的腐殖酸、血红素的标准样品的提取产物检测图谱未见明显抑制;实际案件应用对比测试:304份现场检材工作站磁珠法检出成功率(50%)高于硅珠法(40.8%)。结论本文所建立的方法缓冲范围较大,回收率高,纯化能力强,提取产物STR分型成功率高,适合现场检材批量化DNA检验。

一种基于全自动多重裂解滤膜法的研究应用

多重裂解滤膜法结合了差异裂解法及滤膜法的优点,经两次短时裂解后可快速去除女性成分细胞并将精子细胞截留在滤膜上,再经深度裂解即可将精子细胞DNA释放,裂解产物则使用磁珠法进行提取纯化。该方法在法医专用核酸提取工作站上实现了全自动化工艺,可在180min内完成24个混合斑样本的分离提纯。使用全自动多重裂解滤膜法对223例性侵案件样本进行了提取测试,统计98例PSA阳性样本中的83例得到有效的单一男性分型,检出率可达84.7%,优于传统差异裂解法。