滋阴经方经TGF-β途径抑制小鼠自发乳腺癌生长的机理

目的观察滋阴经方-六味地黄丸对荷瘤小鼠乳腺癌的影响及部分机理。方法以清洁级昆明雌性小鼠种鼠自发乳腺癌为模型,用六味地黄丸治疗直至濒死期,肿瘤病理分析用HE染色,TGF-β(Transforming Growth Factor-β)、磷酸化胞外调节蛋白激酶(p–ERK1/2,phospho-ERKp44,p42)基因表达的产物用RT-PCR及Western bloting方法测定。结果六味地黄丸高、低剂量组的瘤质量明显低于对照组(P<0.05),瘤块中TGF-β、p-ERK基因表达产物也明显低于对照组(P<0.01)。结论六味地黄丸可通过TGF-β信号转导途径抑制乳腺癌的生长。

妊娠及分娩后TA2小鼠T细胞亚群及IL-2水平变化在自发乳腺癌中的作用

目的:观察自发乳腺癌和妊娠及分娩后不同时间,TA2小鼠T细胞亚群及IL-2水平的变化,探讨妊娠及分娩在TA2小鼠自发乳腺癌中可能发挥的作用。方法:将TA2小鼠分为正常未妊娠组、自发瘤组、妊娠5、10、20天组和分娩后1、7、14、21天共9组,采用流式细胞术、ELISA等方法,测定小鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群,计算CD4/CD8,并测定血清IL-2水平。结果:与正常未妊娠组比较,TA2小鼠妊娠及分娩后不同时间内CD3+T细胞亚群百分比均有下降(P<0.01),在妊娠10天下降至最低(P<0.01),CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+在妊娠20天降至最低(P<0.01;P<0.05),而CD8+细胞百分比升至最高(P<0.01)。与自发瘤组比较,除妊娠10天CD3+T细胞亚群百分比与荷瘤小鼠无明显差别外,其他各组均高于自发瘤组(P<0.05或P<0.01);妊娠期各组CD4+、CD8+、CD4/CD8均与自发瘤组无差别。IL-2在妊娠期间有所下降,以10天和20天组下降显著(P<0.05),分娩后1天恢复至正常未妊娠时水平,但在分娩后7、14、21天又逐渐下降,在分娩后21天明显低于正常未妊娠组(P<0.01),甚至与自发瘤组接近(P<0.01)。结论:妊娠和分娩在一定程度上会影响TA2小鼠T细胞亚群分布和IL-2水平的变化,使其细胞免疫功能受抑制,成为TA2小鼠自发性乳腺癌发生的可能诱因之一。

六味地黄丸对自发乳腺癌小鼠瘤块中血管内皮生长因子和周期蛋白D3基因表达的影响

目的:探讨六味地黄丸对小鼠自发乳腺癌的影响。方法:以清洁级昆明小鼠雌性种鼠自发乳腺癌为模型,用六味地黄丸治疗直至濒死期,瘤块病理分析用HE染色,血管内皮生长因子(VEGF)和周期蛋白D3(cyclin D3)基因表达的产物用RT-PCR及Western bloting方法。结果:六味地黄丸组的瘤组织分化优于对照组,瘤重明显低于对照组(P<0.05),瘤块中VEGF和cyclin D3基因表达产物也明显低于对照组(P<0.05)。结论:六味地黄丸抑制乳腺癌的生长,促进细胞分化,可能的机制是抑制VEGF和cyclin D3基因表达。

树鼩自发性乳腺癌的病理学观察

为了探索树鼩自发乳腺癌的情况,试验观察了100只雌性树鼩在人工饲养条件下自发产生乳腺癌的情况,并用HE染色分析乳腺癌组织的病理学改变。结果显示,人工饲养的雌性树鼩能自发发生乳腺癌,发生率为4%,其中有1例发生了乳腺癌肺转移。

自发Basal-like乳腺癌小鼠模型研究

目的:探讨TA2小鼠自发乳腺癌生物学行为、形态及免疫表型特征,比较其与人Basal-like乳腺癌的相似程度,研究TA2小鼠乳腺癌发生与妊娠及小鼠乳腺癌病毒(mouse mammary tumor virus,MMTV)的关系。方法:收集TA2自发乳腺癌小鼠84只,采用H&E染色和免疫组织化学染色检测TA2自发乳腺癌组织形态、免疫表型与转移情况,比较与人Basal-like乳腺癌的相似程度。电化学法检测TA2自发乳腺癌小鼠(n=10)、妊娠15天小鼠(n=6)与正常小鼠(n=6)血清雌二醇和孕酮水平。电镜观察肿瘤细胞内是否存在MMTV病毒颗粒,使用PCR和Real-time PCR分别检测MMTV LTR在TA2正常小鼠乳腺、妊娠小鼠乳腺和乳腺癌中基因组与mRNA表达变化。结果:TA2自发乳腺癌小鼠平均见瘤年龄(329.81±9532)天,平均分娩次数(2.70±1.82)次,且肿瘤在妊娠期内迅速增长。肿瘤多发生内脏转移,淋巴结转移未见,80.0%(64/80)发生肺转移。TA2自发乳腺癌形态一致,癌巢由胞浆稀少的小圆细胞构成,周围被发育良好的基质包绕。实性癌巢中央为未分化或分化差的癌细胞,且核分裂像多见,中央可见坏死;癌巢边缘的癌细胞多发生分化,呈腺泡状,腺管状或乳头状;腺泡状癌巢周围有单层或多层肌上皮和致密基质包绕;腺管状分化癌巢中央可见粉色分泌物积聚;实性癌巢中央可见坏死。免疫组化染色显示TA2自发乳腺癌不表达ER、PR和HER2,高表达Cyclin D1、PCNA、p53和CK5/6。电镜观察显示肿瘤细胞内存在MMTV病毒颗粒。TA2自发乳腺癌小鼠血清雌二醇和孕酮浓度及瘤组织内MMTV LTR mRNA表达均升高,其改变与妊娠小鼠相似。结论:TA2小鼠自发乳腺癌形态、免疫表型和生物学特征与人Basal-like乳腺癌极为相似,能够反映Basal-like乳腺癌发生发展的全过程,是研究Basal-like乳腺癌的良好模型。妊娠激素水平升高导致的MMTV激活在Basal-like乳腺癌发生过程中起重要作用。

Wnt信号通路相关蛋白在TA2小鼠自发性乳腺癌生成中的作用

目的研究Wnt信号通路相关蛋白在TA2小鼠自发性乳腺癌生成中的作用。方法收集5例正常TA2小鼠的乳腺组织、5例自发性成瘤TA2小鼠的肿瘤组织及5例肿瘤对侧的乳腺癌前病变组织,用免疫组织化学方法检测TA2小鼠正常乳腺组织、自发性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病变组织及肿瘤组织中Wnt1、Wnt5a、β-catenin蛋白的表达。结果1免疫组织化学检测结果显示:Wnt1、Wnt5a在小鼠正常乳腺组织中为阴性表达,在自发性成瘤小鼠乳腺癌前病变和乳腺癌组织胞质和细胞核中均有表达,且在自发性成瘤小鼠乳腺癌前病变的表达强度高于在乳腺癌组织中的表达。β-catenin在正常小鼠乳腺组织主要在细胞膜上表达,在自发性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病变组织及肿瘤组织胞质中均有异常表达,且在肿瘤组织的表达强度高于其在癌前病变组织中的表达。2 Wnt1、Wnt5a、β-catenin在正常乳腺组、自发性成瘤小鼠乳腺癌前病变组、肿瘤组中的阳性细胞表达率分别为(4.46±3.57)%、(96.50±6.30)%、(90.00±1.17)%、(2.27±4.55)%、(96.24±6.00)%、(95.90±4.32)%、(4.78±3.57)%、(60.59±5.63)%、(84.87±2.56)%,三者在自发性成瘤小鼠乳腺癌前病变组、肿瘤组中的阳性细胞表达率与正常乳腺比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Wnt1、Wnt5a在癌前病变组织中的阳性细胞表达率均高于肿瘤组织,Wnt1比较差异有统计学意义(P<0.05),Wnt5a比较差异无统计学意义(P>0.05)。β-catenin在癌前病变组织中的阳性细胞表达率低于肿瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Wnt1、Wnt5a、β-catenin在TA2小鼠自发性乳腺癌生成过程中起促进作用。

线粒体凋亡途径在TA2小鼠自发性乳腺癌中的作用

目的:比较TA2小鼠正常乳腺、乳腺癌前病变和乳腺癌组织中细胞增殖和凋亡的情况,通过检测线粒体凋亡途径中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspasee-9在乳腺组织中的表达,初步确定线粒体凋亡途径在ITA2小鼠自发乳腺癌中可能发挥的作用.方法:收集正常TA2成年雌鼠的乳腺组织(NC组)和TA2自发性乳腺癌癌前病变组织(SBC-b组)和乳腺癌组织(SBC-t组),采用免疫组化方法检测各组乳腺上皮细胞中PCNA、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达并计算增殖指数(PI);采用TUNEL方法检测细胞凋亡并计算凋亡指数(AI);采用Rea[-★me PCR和Westem blot方法检测组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及mRNA相对表达水平.结果:免疫组化染色,Real-tinmePCR以及Western blot结果一致显示,SBC-b组Bcl-2,Bax,Cas-pase-3和Ca[sPase-9表达均明显高于NC(P<0.0l或P<0.05);SBC-t组中除Bcl-2高于NC外,其余蛋白表达均明显低于NC(fJ<0.01),但hcl-2,bax和Caspase-3 mRNA表达均显著高于NC(P<0.01),Caspase-9mRNA略高于NC,但无统计学意义(P>0.05)。结论:线粒体途径可能参与了TA2鼠自发性乳腺癌的发生,其通过刺激部分乳腺上皮细胞凋亡,破坏了TA2小鼠乳腺上皮细胞增殖和凋亡的平衡,以致乳腺癌发生.

Wnt家族成员在TA2小鼠乳腺癌生成过程中基因表达变化规律

目的:研究乳腺癌生成过程中,Wnt家族成员表达的变化规律。方法:收集自发乳腺癌小鼠42只,记录其详细资料。采用基因芯片筛选正常TA2小鼠乳腺组织和自发乳腺癌TA2小鼠乳腺癌组织中的差异表达基因,随后用Real-time PCR进行验证,并检测TA2小鼠乳腺癌形成过程中相关基因表达的变化。结果:TA2自发乳腺癌小鼠平均见瘤年龄为(336.706±85.05)d,平均分娩次数为(3.767±1.79)次。分娩次数最多者为7次,其平均见瘤年龄只有251.5 d。TA2小鼠基因芯片结果发现Wnt家族成员中,Wnt1、Wnt10b、Wnt5a、Wnt5b在正常乳腺组织和乳腺癌组织中表达具有差异。Real time PCR的结果证实了以上结果,并发现Wnt1、Wnt10b、Wnt5a在癌前病变和乳腺癌组织中表达高于正常乳腺组织,而Wnt5b在乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织。结论:Wnt1、Wnt5a、Wmt10b在TA2小鼠乳腺癌生成过程中起促进作用,而Wnt5b的作用可能是抑制小鼠乳腺癌的生成。

Sprague-Dawley大鼠自发性乳腺癌分子分型的动物实验研究

目的探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠患有自发性乳腺癌的分子分型情况。方法选取20只无特定病原体级雌性4周SD大鼠。通过分析全部大鼠乳腺癌分子分型,找到自发性乳腺肿瘤相关分子分型特点。结果 Luminal A型(55.00%)乳腺癌大鼠显著高于Basal-like型、Luminal B型和Her-2过表达型(P均<0.05),其余三组差异无统计学意义(P均>0.05)。结论临床上除常规生化指标及影像学诊断以外,配合ER、Cerb B-2及PR检测对早期鉴别大鼠乳腺癌有积极意义。

17-DMAG抑制津白Ⅱ小鼠乳腺癌肝脾转移的实验研究及其相关机制

目的：动态观察HSP90抑制剂17-dimethylamjnoethylamino-17-demethoxygeldanamycin hydrochloride对津白Ⅱ小鼠高转移性乳腺癌生长及肝脾转移的抑制作用，并初步探讨其相关机制。方法：TA2小鼠40只，随机分为实验组和对照组，20只/组，自小鼠鼠鼷部接种TA2小鼠高转移性乳腺癌细胞，1×10^5/只。接种肿瘤后第4天于小鼠腹腔给予17-DMAG，1mg/（只·次），2次，周，于接种后17天和24天实验组和对照组各处死10只小鼠，收集小鼠移植瘤、肝和脾组织，留取部分新鲜组织进行Real-time PCR，检测实验组和对照组肿瘤组织中MMP-7、MMP-9 mRNA的表达差别。剩余组织10％福尔马林固定后HE染色及基质金属蛋白酶-7的免疫组织化学染色。结果：接种肿瘤后第17天实验组的肿瘤体积明显低于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；实验组16只小鼠中肝转移5例，脾脏转移13例，对照组13只小鼠中肝转移13例，脾脏转移12例；实验组小鼠肝转移例数较对照组明显下降（P〈0．01），而脾转移例数差别无统计学意义（P〉0．05）。HE染色下观察实验组肿瘤出现明显的坏死。实验组中MMP-7蛋白和MMP-9 mRNA的表达较对照组明显减弱（分别为3．049±2．726和21．933±14．304；1．034±0.784和2．318±1．294），差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：17-DMAG可明显抑制TA2小鼠乳腺癌的生长，尤其是在肿瘤生长的早期，并可能通过降低MMP-7、MMP-9的表达来抑制TA2小鼠乳腺癌肝脾的转移。

自发性乳腺癌小鼠的引进及其应用于澳洲茄碱抗癌药效评价

为了引进自发性乳腺癌小鼠模型并应用于澳洲茄碱在体抗癌药效评价，试验自国家遗传改造小鼠资源库引入SPF级MMTV—PyMT雄雌种鼠并进行培育，培育成功后以0．8，1．6，3．2mg／mL浓度的澳洲茄碱及其溶剂以按体重100肛L／10g腹腔注射MMTV-PyMT阳性小鼠，结合瘤块内加注100μL，每周一、周四各注射一次，连续注射6周，并以游标卡尺测量瘤块大小。结果表明：引进的MMTV—PyMT自发性乳腺癌小鼠模型能正常繁育并能再现其乳腺癌发病的经典病程，在药效评估上，与对照组相比，以0．8，1．6mg／mL浓度的澳洲茄碱腹腔注射100μL／10g结合瘤块内注射100μL，瘤块生长抑制率分别为14％-22％（P=0．06或P〈0．05）和38％-44％（P〈0．05），而腹腔注射3．2mg／mL组6周死亡率为87．5％（7／8）。说明MMTv—PyMT自发性乳腺癌小鼠模型引进成功，并且可应用于抗癌药物澳洲茄碱在体药效评价研究。