自发性癫痫大鼠皮质和海马中GLT-1、EAAC1表达异常

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)皮质和海马中GLT-1、EAAC1 mRNA与蛋白的表达情况。方法应用RT-PCR技术检测GLT-1、EAAC1 mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GLT-1、EAAC1蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GLT-1、EAAC1蛋白。结果SER皮质中GLT-1蛋白表达低于正常Wistar大鼠(P<0.05);EAAC1 mRNA及蛋白表达均低于正常Wistar大鼠(P<0.01);SER海马中GLT-1蛋白表达高于Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GLT-1、EAAC1在SER、Wistar大鼠皮质和海马中均有表达,且位于细胞膜上。结论SER皮质中GLT-1、EAAC1表达下调可能促进了癫痫的发生;海马中GLT-1蛋白表达上调可能是一种代偿性神经保护机制。

自发性癫痫大鼠海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基表达上调

目的通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠(SER)与野生型正常大鼠(WTC)海马Ⅰ型和Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基mRNA与蛋白的表达情况。方法发现SER癫痫大发作后即刻提取海马组织总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)表达α1与α3亚基mRNA;应用免疫荧光与免疫组化定位与表达α1亚基蛋白与α3亚基ⅢN蛋白。结果SER海马Ⅰ型与Ⅲ型钠通道α亚基mRNA表达高于WTC(P<0·01);SER海马Ⅰ型钠通道α亚基蛋白表达高于WTC(P<0·01);α3亚基ⅢN型蛋白在SER成鼠有表达,而WTC成鼠无表达。结论SER脑内海马Ⅰ型与Ⅲ型电压门控性钠通道α亚基表达上调,可能是神经元高兴奋性的原因或癫痫发作的继发表现。

左乙拉西坦对自发性癫痫大鼠大发作和小发作的作用(英文)

目的 鉴于左乙拉西坦在各种啮齿类动物上的抗癫痫作用不同 ,未见报告其在自发性癫痫大鼠上的作用 ,故研究之。方法 在大脑海马和皮质部位安置电极 ,观察腹腔注射单剂量左乙拉西坦对自发性癫痫大鼠脑电图的影响。结果 给左乙拉西坦(40 ,80和 16 0mg·kg- 1,ip)后 135～ 16 5min ,癫痫小发作的总持续时间分别下降到给药前水平的 (87±15 ) % ,(34± 7) %和 (39± 19) %。大发作的总持续时间下降到 (81± 2 8) % ,(6 5± 11) %和 (5 2± 7) %。大发作的出现频率下降到 (71± 2 9) % ,(5 4± 12 ) %和 (32± 15 ) %。

氨己烯酸对自发性癫痫大鼠小发作和大发作的作用

目的研究氨己烯酸对自发性癫痫大鼠的小发作和大发作的作用。方法通过在自发性癫痫大鼠大脑海马和皮质部位安插电极,观察口服氨己烯酸后对自发性癫痫大鼠的脑电图的影响。结果口服氨己烯酸(100mg·kg-1)后3、4、5h癫痫小发作的出现频率分别下降到给药前的(54±5)%、(41±9)%和(34±4)%(P<0.01)。氨己烯酸使大发作的出现频率分别下降到给药前的(68±13)%、(39±13)%和(21±6)%(P<0.01)。氨己烯酸的抑制效应能被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱拮抗。结论氨己烯酸具有明显的对抗自发性癫痫大鼠的小发作和大发作的作用,对癫痫大发作的抑制效应是通过GABAA受体发挥作用的。

自发性癫痫大鼠海马电压门控性钠通道β_1亚基表达与基因突变分析

目的与正常Wistar大鼠作对比,探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中电压门控性钠通道β1亚基mRNA与蛋白的表达情况及基因突变分析。方法应用RT-PCR技术检测β1亚基mRNA的表达;免疫组化方法定位β1亚基蛋白;免疫印迹方法检测β1亚基蛋白的表达;直接测序技术筛查β1亚基全部外显子基因突变位点。结果SER海马β1亚基mRNA表达高于Wistar大鼠(P<0.05);免疫组化结果显示β1亚基蛋白在SER大鼠海马各区中均有表达,且位于细胞膜上;β1亚基蛋白的表达高于Wistar大鼠(P<0.01);直接测序法筛查了β1亚基全部外显子的突变位点,结果未见任何突变。结论SER海马β1亚基表达异常可能会促进癫痫样兴奋活动的产生,进而构成SER癫痫表型的发作基础。

自发性癫痫大鼠皮质和海马中GLT-1、EAAC-1表达

目的:研究自发性癫痫大鼠皮质、海马中谷氨酸转运体-1(GLT-1)、兴奋性氨基酸载体-1(EAAC-1)的转录、表达水平及其意义。方法:选取自发性癫痫Wistar大鼠(癫痫组)和正常Wistar大鼠(正常组)各10只,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测2组大鼠皮质、海马中GLT-1、EAAC1 m RNA转录水平,采用蛋白质印迹技术检测2组大鼠皮质、海马中GLT-1、EAAC-1蛋白的表达水平。结果:癫痫组大鼠皮质中EAAC-1 m RNA相对灰度值为(0.67±0.21),明显低于正常组大鼠的(1.54±0.38)(P<0.01);2组大鼠皮质中GLT-1 m RNA和海马中GLT-1 m RNA、EAAC-1 m RNA相对灰度值差异无统计学意义(P>0.05)。癫痫组大鼠皮质中EAAC-1、GLT-1蛋白表达水平的相对灰度值分别为(72.6±8.7)和(103.7±12.6),显著低于正常组大鼠的(116.5±15.1)和(139.5±14.2)(P<0.01);癫痫组大鼠海马中GLT-1蛋白表达水平的相对灰度值(196.7±23.5)明显的高于正常组大鼠的(145.5±19.7)(P<0.01);2组大鼠海马中EAAC-1蛋白表达水平的相对灰度值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:自发性癫痫大鼠皮质中GLT-1、EAAC-1表达水平下调可能与癫痫发生有关。

自发性癫痫大鼠脑内神经肽Y受体Y2R和Y5R的表达及分布

目的研究自发性癫痫大鼠(tremor rat,TRM)海马和颞叶皮质中神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)Y2和Y5受体(Y2R和Y5R)的表达和分布。方法以TRM大鼠作为癫痫组,正常Wistar大鼠作为对照组,每组7只,以RT-PCR法检测Y2R和Y5R mRNA水平表达,Western Blot法检测其蛋白水平表达,免疫荧光法分析癫痫组和对照组大鼠海马CA1、CA3和齿状回(DG)区以及颞叶皮质中Y2R与Y5R的分布和定位。结果RT-PCR和Western Blot结果显示,与对照组大鼠相比较,癫痫组海马和颞叶皮质中Y2R mRNA相对表达水平(相对灰度值为海马:0.75±0.06 vs.0.51±0.07;颞叶皮质:0.70±0.05 vs.0.55±0.03)及蛋白相对表达水平(相对灰度值为海马:0.79±0.08 vs.0.42±0.05;颞叶皮质:0.72±0.05 vs.0.51±0.07)均显著上调(均P<0.01),Y5R mRNA(相对灰度值为海马:0.52±0.10 vs.0.54±0.06;颞叶皮质:0.46±0.03 vs.0.42±0.04)及蛋白(相对灰度值为海马:0.28±0.06 vs.0.27±0.03;颞叶皮质:0.31±0.05 vs.0.27±0.07)表达均没有明显变化(均P>0.05)。免疫荧光分析发现Y2R与Y5R在癫痫组大鼠海马CA1、CA3区神经元和DG区颗粒细胞以及颞叶皮质神经元中分布广泛且主要定位在细胞膜上。结论在TRM中Y2R表达在海马和颞叶皮质中均表达上调,但是Y5R的表达没有明显改变。

自发性癫痫大鼠钠通道β_1亚基DNA表达分析

目的:对照研究自发性癫痫大鼠(SER)和正常大鼠钠通道β1亚基外显子表达情况。方法:提取鼠尾DNA,根据β1亚基外显子设计引物,进行PCR反应,琼脂糖凝胶电泳检测反应产物。PCR反应产物试剂盒纯化,送基因公司测序。结果进行Blast比对。结果:SER钠通道β1亚基2-5外显子碱基序列与原序列的同源性为100%。结论:SER钠通道β1亚基2-5外显子表达与正常大鼠无差别。

自发性癫痫大鼠海马区谷氨酸转运体GLAST表达下调

[目的]通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠(spontaneously epilepsy rats,SER)与正常Wistar大鼠海马区胶质细胞型谷氨酸转运体GLAST蛋白的表达情况,以期发现其与遗传性癫痫发病的关系。[方法]利用聚合酶链反应(PCR)扩增SER的特异性基因片段,筛选出SER;利用免疫荧光定位GLAST蛋白的表达,并应用免疫组织化学技术,检测GLAST蛋白在SER及正常Wistar大鼠海马内的表达情况。[结果]GLAST蛋白在SER海马的齿状回(DG)表达与正常Wistar大鼠相比明显减少(GLAST的表达为Wistar:52.67±11.5,SER:39.39±9.48,P<0.05),在海马CA1和CA3区表达差异无显著性意义(CA1区为Wistar:48.56±10.6,SER:45.84±7.20;CA3区为Wistar:43.29±10.6,SER:36.73±6.50,P>0.05)。[结论]SER自发性癫痫可能与海马DG区GLAST蛋白表达下降有关;GLAST表达下降可能是由SER基因位点的突变引起的。

自发性癫痫大鼠脑内海马Ⅲ型电压门控性钠通道N亚型表达上调

[目的]对照研究自发性癫痫大鼠(SER)和正常 Wistar 大鼠(WTC)脑内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型钠通道α亚基mRNAs与蛋白表达情况。[方法]提取枕叶皮质、齿状回及海马 CA1和 CA3区组织总 RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及建立限制性内切酶图谱检测Ⅰ、ⅡA、ⅡN、ⅢA和ⅢN的表达.应用免疫荧光定位与表达α_3亚基川 N 蛋白。[结果]SER枕叶皮质、齿状回及海马CAl和CA3区总钠通道的表达略高于 WTC,但均无显著差异(P>0.05),SERⅢ型钠通道在海马的表达高于 WTC(P<0.01),酶切图谱显示ⅢN型钠通道表达水平有明显上调。[结论]SER 脑内海马Ⅲ型电压门控性钠通道 N 亚型表达上调。

神经肽Y在自发性癫痫大鼠海马内过表达

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)海马中,神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)的表达变化。方法 RT-PCR检测自发性癫痫大鼠和正常对照组Wistar大鼠海马中NPY mRNA表达,ELISA试剂盒法检测NPY蛋白浓度变化。结果自发性癫痫大鼠海马中NPY mRNA表达水平和NPY蛋白的浓度比正常对照组Wistar大鼠明显上调(P<0.01)。结论 NPY mRNA和蛋白过表达可能与自发性癫痫发生机制有关。

电针对癫痫模型大鼠自发性反复发作及海马CA3和DG区谷氨酸脱羧酶67表达的影响

背景由于对药物疗法不良反应的担忧,近几年人们对使用针灸治疗癫痫越来越感兴趣。尽管现已报道了不少针灸抗癫痫作用的临床证据,但其确切机制仍不清楚。目的 研究电针(EA)对癫痫大鼠自发性复发性癫痫(SRS),以及海马CA3和齿状回(DG)区中谷氨酸脱羧酶67(GAD67)表达的影响。方法 将50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、癫痫组、假刺激组、非穴位电针组和穴位电针组,每组10只。除对照组外,其余4组均制备氯化锂—匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型。造模成功的大鼠采用针刺或电针穴位治疗,8周后观察自发性复发性癫痫发作的次数。分别取5组大鼠海马组织,采用荧光定量PCR和Western blotting分别检测各组大鼠海马组织中GAD67 mRNA水平和蛋白水平表达变化;采用免疫组化法检测各组大鼠海马CA3和DG区GAD67蛋白水平表达变化。结果 治疗8周后,穴位电针组与癫痫组、假刺激组、非穴位电针组比较,减少了自发性复发性癫痫发作的次数,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,癫痫组、假刺激组、非穴位电针组和穴位电针组大鼠海马组织中GAD67 mRNA表达均下调,差异有统计学意义(P<0.01);通过8周电针百会和大椎穴连续治疗后,穴位电针组与癫痫组、假刺激组、非穴位电针组比较,大鼠海马组织中GAD67 mRNA水平与上调,差异有统计学意义(P<0.01);假刺激组和非穴位电针组中GAD67 mRNA水平与癫痫组相比,无统计学意义(P>0.05)。Western blotting和免疫组化结果显示:GAD67蛋白水平变化趋势与mRNA水平相一致。结论 电针百会和大椎穴对癫痫大鼠具有一定的疗效,并与CA3和DG区GAD67表达水平的变化有关。

自发性癫大鼠海马CA3区神经元电压门控钙通道功能异常

自发性癫痫大鼠（sER；zi/zi，tm／tm）是通过异型合子大鼠交配得到的一种双重突变型大鼠，8周龄以上的SER可自发表现出强直性惊厥，并在皮层与海马脑电图（EEG）中伴随有5～7Hz棘波痫样放电。SER是研究新型抗癫痫药物长短期药效的一种非常有用的动物模型。在单刺激苔状纤维反复触发的条件下，SER海马CA3区神经元表现为长时程的去极化漂移。

艾地苯醌对癫痫大鼠反复自发癫痫发作的影响

目的研究艾地苯醌能否减少癫痫持续状态后大鼠的反复自发发作。方法应用氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫持续状态大鼠模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、艾地苯醌干预组,造模终止后2周,观察癫痫持续状态后癫痫大鼠自发性癫痫发作的次数、持续时间及海马区异常的苔藓纤维芽生情况。结果艾地苯醌干预组癫痫大鼠反复自发性癫痫发作的次数及持续时间较模型组明显减少(P<0.05);与正常对照组相比,模型组海马齿状回区有明显的异常苔藓纤维芽生(P<0.05),艾地苯醌干预组海马齿状回区苔藓纤维芽生明显减少(P<0.05)。结论艾地苯醌可以减少癫痫发作,抑制异常苔藓纤维芽生可能是减少癫痫自发发作的机制之一。

拉莫三嗪和乙琥胺对颞叶癫痫的神经可塑性实验研究

目的探讨拉莫三嗪和乙琥胺对匹罗卡品诱导颞叶癫痫模型的行为学、脑电图以及苔藓纤维发芽的影响。方法使用氯化锂-匹罗卡品制作慢性癫痫模型,随机分为6组,正常组,模型组,拉莫三嗪低高、低剂量组,乙琥胺低、高剂量组,通过对各组进行行为学观察,脑电图记录,苔藓纤维发芽的方法评价两种药物对匹罗卡品诱导的颞叶癫痫的预防作用。结果拉莫三嗪高、低剂量组可以有效地减少自发性癫痫发作次数,改善慢性期脑电图表现(减少尖波、棘波的频率和降低痫性波的波幅),抑制苔藓纤维的发芽。拉莫三嗪各组与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05),高、低剂量组间比较差异也有统计学意义(P<0.05);乙琥胺各组与模型组相比,差别无统计学意义(P>0.05),高、低剂量组间比较差异也无统计学意义(P>0.05)。结论拉莫三嗪可以预防匹罗卡品诱导的颞叶癫痫发生,减少慢性期自发性癫痫发作次数,改善脑电图,抑制苔藓纤维发芽;乙琥胺不能预防匹罗卡品诱导的颞叶癫痫发生,不能减少慢性期自发性癫痫发作次数,不能改善脑电图以及抑制苔藓纤维发芽。

癫痫大鼠海马组织的转录组学特征分析

目的探究癫痫的转录组学特征,寻找癫痫诊治的潜在靶点。方法选取雄性幼龄SD大鼠17只,采用抽签法随机将大鼠分为2组:对照组(8只)、CSRS组(9只)。基于氯化锂-匹罗卡品构建的慢性自发性癫痫(CSRS)大鼠模型,取CSRS大鼠及对照组大鼠海马组织进行转录组测序(RNA-seq),并对信使RNA(mRNA)及微小RNA(miRNA)进行差异分析、信号通路富集分析及差异表达蛋白互作用网络构建寻找核心调控基因。结果对照组及CSRS组的mRNA进行差异分析获得的354个差异表达基因(DEGs),信号通路富集分析DEGs与离子转运调控、组织发育、应激反应等相关。蛋白互作网络分析发现WDR88、SHANK2、TEC、NFKBIZ、EPHA8等为DEGs中主要的核心调控基因。同时获得差异表达miRNA,并进行靶基因预测及GO通路富集分析,发现靶基因主要与离子型谷氨酸受体复合物、谷氨酸受体活性、谷氨酸盐化的钙离子通道活性、NF-κB诱导激酶活性等分子功能相关。结论基于RNA-seq发现差异基因表达异常是癫痫发生的重要原因,是导致神经元发生异常的、同步化放电的关键因素。

癫痫外科中心

最近,由美国癫痫中心协会(NAEC)制定了有关癫痫中心应该达到的医疗机构和人员配备,为癫痫病人提供方便的文件,现将其中第四级水平——癫痫外科中心节译出供同道们借鉴,将会促进我国癫痫外科的进一步发展。癫痫外科中心能进行全面的外科评价和具备癫痫外科治疗的专业人员。一、医疗机构 1.电诊断学 (1)由EEG技术员或癫痫专职护士负责表面和蝶骨电极的EEG24小时录像监测,必要时配有监测技师或自发性癫痫发作和发作问期活动监测方案。(2)用硬膜下电极、深部电极、硬膜外电极行侵害性24小时连续监测。(3)颈内动脉阿密妥试验(Wada试验)。

神经炎症作为癫痫发生中治疗靶点及生物标志物的研究进展

神经炎症被认为是癫痫发生的始动因素,且参与癫痫发生的整个过程,在癫痫发生中具有关键作用。针对神经炎症的治疗方法不仅可以在自发性癫痫发作之前预防癫痫疾病,也可以在疾病临床发生之后减轻癫痫发作负担、提供神经保护或减少合并症,显著改善病程,发挥疾病修饰作用。本文将着重介绍神经炎症在癫痫发生中的作用及神经炎症治疗进展。

匹罗卡品致鼠慢性颞叶癫痫模型

目的 :确定匹罗卡品点燃鼠持续性癫痫后的急性和慢性行为改变及组织学影响。方法 :癫痫持续状态后 ,对存活鼠以影像监控系统连续监测 12 0 d,2 4h/ d。以光镜观察其脑部损伤。结果 :首次自发性复发性癫痫在癫痫持续状态后 4～ 42 d内出现 ,其平均“平静期”为 ( 14.5± 3.6 ) d。在慢性阶段 ,自发性复发性癫痫以每周每只鼠 2～ 4次的发作频率出现 ,其脑部损伤主要位于颞叶。结论 :匹罗卡品致鼠癫痫持续状态所造成的脑颞叶损伤可能是形成慢性癫痫的基础 ,其机制在病因学上与人类癫痫的某些特征相似。

定痫汤对癫痫模型大鼠海马BDNF/Trk B通路的影响

目的探讨定痫汤抗癫痫的可能作用机制。方法将66只大鼠随机分为模型组、定痫汤组、定痫汤+K252a组各22只,采用锂-匹罗卡品建立大鼠癫痫模型,另将22只健康大鼠设为正常组。定痫汤+K252a组在大鼠造模前1周开始每日给予酪氨酸激酶受体B (Trk B)拮抗剂K252a侧脑室注入,每次5μl,每日1次,共1周;定痫汤组和定痫汤+K252a组在造模后1 h开始给予浓度为1. 55 g/ml定痫汤2ml灌胃,同时正常组、模型组均灌服等体积生理盐水,均每日1次,连续6周。各组大鼠中11只监测大鼠脑电图并记录大鼠癫痫自发性再发作行为的潜伏期、发作频率及持续时间,另11只检测大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达。结果正常组发生癫痫自发性再发作0只,模型组大鼠9只,定痫汤组5只,定痫汤+K252组8只。与模型组比较,定痫汤组癫痫自发性再发作潜伏期明显延长,发作频率下降,持续时间明显缩短,海马BDNF蛋白表达降低(P <0. 01)。与定痫汤组比较,定痫汤+K252组癫痫自发性再发作的发作频率增加,持续时间延长,潜伏期缩短,BDNF蛋白表达降低(P <0. 01)。结论定痫汤可能通过调节BDNF/TrkB通路发挥抗癫痫作用。