近端小管RAS功能轴在早期糖尿病小鼠肾脏中的变化

目的:观察自发性糖尿病小鼠模型中,糖尿病肾病早期近端小管肾素-血管紧张素系统(RAS)两条轴[血管紧张素转换酶(ACE)-血管紧张素II(Ang II)-血管紧张素II 1型受体(AT1)经典轴和ACE2-Ang(1-7)-Mas受体(MasR)新轴]的变化特征及对肾脏结构和功能的影响。方法:应用雄性自发性1型糖尿病Akita小鼠(以C57BL/6背景的雄性非糖尿病小鼠为正常对照)和自发性2型糖尿病db/db小鼠(以C57BLKS/J背景的雄性db/m非糖尿病小鼠为正常对照),饲养至16周龄时处死小鼠,测定相应生理指标。收集尿液,检测尿液中Ang II和Ang(1-7)的含量;收取肾脏组织行病理切片染色观察肾脏结构变化;免疫组化法观察肾脏组织血管紧张素原(Agt)、ACE、ACE2和MasR的表达部位及变化;Western blot和RT-qPCR测定近端肾小管的上述蛋白及mRNA的变化。结果:两种糖尿病小鼠16周龄时,肾小球滤过率和尿白蛋白/肌酐比值显著增加(P<0.05),PAS染色可见近端肾小管细胞体积增加,管腔扩张,肾小管肥大,肾小管损伤分数显著增加(P<0.01)。RAS成分检测结果显示,与对照组相比,糖尿病小鼠近端小管Agt和ACE2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01),尿Ang II排泄显著增加(P<0.01),而ACE和MasR的蛋白和mRNA表达水平显著下调(P<0.01),尿Ang(1-7)含量显著减少(P<0.01)。结论:在自发性糖尿病小鼠中,近端小管RAS在糖尿病肾病早期被激活,激活的RAS可能参与糖尿病肾病早期肾小球高滤过、肾小球和肾小管肥大及近端小管损伤。

糖耐康改善KKAy小鼠Toll样受体4通路及葡萄糖转运子4的作用机制研究

目的:观察中药糖耐康对KKAy小鼠血糖、体质量及Toll样受体4(TLR4)通路中白细胞介素6(IL-6)、核因子κB激酶β抑制物(IKKβ)及葡萄糖转运蛋白4(GluT4)影响,分析其改善2型糖尿病的可能作用机制。方法:选取无特定病原体(SPF)级自发性2型糖尿病动物KKAy小鼠及C57BL/6J小鼠,给予高脂饲料喂养,连续8周给药,评价血糖及体质量。并采用半定量酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆中IL-6及GluT4的水平。蛋白质印迹法检测肝组织TLR4蛋白表达、肌肉组织IKKβ蛋白表达水平。结果:中药糖耐康高剂量组,能够显著降低血糖水平(P<0.05),具有一定抑制体质量增长的趋势。同时能够下调IL-6水平,上调GluT4的水平(P<0.01,P<0.05),抑制TLR4及IKKβ蛋白表达(P<0.01,P<0.05)。结论:糖耐康可能通过下调脂多糖(LPS)介导的TLR4通路中关键炎症介质的水平,减轻低度炎症反应,在一定程度上抑制炎症级联效应,同时提高胰岛素信号转导受体后途径中GluT4的转位及活性水平,共同达到改善胰岛素抵抗状态的作用。

NKG2D mAb对自发性NOD小鼠同种胰岛移植的作用研究

目的探讨NKG2D mAb能否单独作为共刺激信号阻断剂延长自发性非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠移植移岛的有功能存活期;NKG2D mAb和CD154 mAb是否有协同作用。方法将分离、纯化的BABL/c小鼠胰岛植入自发糖尿病的NOD小鼠左肾包膜下,移植成功的小鼠分成4组:对照组,NKG2D mAb治疗组,CD154 mAb治疗组和联合治疗组(NKG2D mAb+CD154 mAb)。通过小鼠尾静脉血监测血糖,记录胰岛移植物有功能存活期;胰岛移植物所在肾脏行HE染色和CD3、CD4、CD8免疫组织化学染色。结果 NKG2D mAb治疗组移植物有功能存活期无延长(5~11 d,对照组6~11 d,两者差异无统计学意义),CD154 mAb治疗能明显延长移植物有功能存活期〔20~64 d,中位期41 d,和NKG2D mAb治疗组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)〕,联合治疗组较CD154 mAb治疗能延长移植物有功能存活期(23~84 d,中位期51 d,但差异无统计学意义)。各组发生排斥时胰岛移植所在肾脏均见淋巴细胞浸润,CD3、CD4、CD8染色结果无明显差异。结论 CD154 mAb能明显延长NOD小鼠胰岛移植物有功能生存期;单独使用NKG2D mAb治疗,不能延长胰岛移植物有功能生存期;联合治疗有效,但仍不能诱导移植物长期存活。

藏药俄色改善KK-Ay小鼠脂代谢紊乱的作用研究

目的:研究藏药俄色改善KK-Ay小鼠脂代谢紊乱的作用及可能的作用机制。方法:10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,50只KK-Ay模型小鼠按空腹血糖值随机分为模型对照组、阳性对照组(罗格列酮片2.67 mg/kg)和俄色提取物0.75、1.5、3.0 g原生药/kg组,每组10只,连续灌胃给药35 d,末次药后测定小鼠血清游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;油红O染色法检测肝脏组织中脂质的含量;免疫组化法检测肾周脂肪组织中超氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)和PPAR-γ蛋白表达;实时定量荧光(PCR)检测Ppar、Tnfa mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量显著升高,血清FFA、TG、TC、TNF-α含量显著升高(P<0.01),小鼠皮下脂肪系数和腹腔脂肪系数显著升高,小鼠肝脏组织脂滴面积百分比显著升高(P<0.01),小鼠脂肪组织PPAR-α、γ蛋白表达明显降低,肾周脂肪组织Ppar mRNA表达明显下调(P<0.05);与模型对照组比较,俄色提取物1.5、3.0 g/kg组小鼠体质量和皮下脂肪系数明显降低,小鼠肝脏组织脂滴面积百分率明显降低,脂肪组织PPAR-α蛋白明显升高,肾周脂肪组织Ppar mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01);俄色提取物3.0 g/kg组小鼠血清FFA、TG、TNF-α含量明显降低,肾周脂肪组织Tnfa mRNA表达明显降低(P<0.05或P<0.01);俄色提取物0.75 g/kg组小鼠血清TC含量明显降低、小鼠皮下脂肪系数降低(P<0.05)。结论:藏药俄色可改善KK-Ay小鼠脂质代谢紊乱,其作用机制可能与上调肾周脂肪组织PPARα蛋白表达和PPARγ转录以及减轻炎症反应有关。