藏药四味黄芪散通过AMPK蛋白诱导的自噬信号通路干预低氧性肺动脉高压的研究

目的探讨藏药四味黄芪散(SW)降低低氧性肺动脉高压的作用机制。方法将110只SD大鼠随机分为常氧组、低氧对照组和低氧药物组,两低氧组根据暴露低氧时间又各分为d 1、3、7、15、30组,共10个小组。常氧组置于海拔2260 m的大气环境,不予干预;低氧10个组置于模拟海拔5000 m的低压氧舱,低氧药物组给予SW混悬液(0.42 g/100 g)灌胃,低氧对照组给予生理盐水灌胃,每天1次。每组大鼠于相应时间点测定Ppa、RV/(LV+S);Western blot法测定肺组织p-AMPK、ULK-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白水平。结果与常氧组相比,低氧对照组大鼠Ppa、RV/(LV+S)比值随暴露低氧时间的延长逐渐增高,并与肺动脉平滑肌层厚度和肺组织亚细胞器变化保持一致。肺组织p-AMPK蛋白表达水平也轻度上调(P<0.05),ULK-1、LC3Ⅱ明显上调(P<0.01),尤以急性低氧期变化明显;与低氧对照组相比,低氧药物组Ppa升高幅度和肺动脉平滑肌层增厚程度明显减缓(P<0.05~0.01),而肺组织中p-AMPK、ULK-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平随暴露低氧时间的延长而进一步增高(P<0.05~0.001),尤以慢性低氧为甚。结论SW可通过上调AMPK自噬信号通路发挥抑制低氧性肺动脉高压的作用。

血管生成过程中的自噬调控作用及自噬信号通路调控机制研究进展

自噬(Autophagy)可分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导自噬(Chaperone mediated autophagy,CMA)三种,自噬体、自体吞噬泡及溶酶体是自噬发生的必要条件,自噬的生理功能主要有内源性管家机制、外源性防御和应激调控机制、特异性融合等。自噬对血管生成的调控具有双重性,自噬相关蛋白、炎症因子可通过促进细胞自噬,促进血管生成,抑制选择性自噬接头蛋白p62(Sequestosome-1,SPSTM1)等自噬相关蛋白的表达可抑制血管生成。自噬相关AMPK信号通路可通过调控单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶的表达,调控血管生成;Notch信号通路等信号通路通过CBF-1/RBP-Jκ依赖途径、CSL非依赖途径调控心肌缺氧损伤,保护心肌细胞,促进血管生成。

沙格列汀干预非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病大鼠肝组织AMPK/mTOR-TFEB自噬信号通路蛋白表达变化

目的探讨沙格列汀干预非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)合并2型糖尿病(T2DM)大鼠对肝组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-转录因子EB(TFEB)自噬信号通路蛋白表达的影响。方法将42只大鼠随机分为对照组、模型组和沙格列汀干预组,每组14只。采用高脂饲料喂养和链脲佐菌素腹腔注射构建NAFLD合并T2DM模型。在建模成功后,分别给予沙格列汀或生理盐水灌胃8 w。采用放射免疫法检测空腹胰岛素(INS,使用全自动生化分析仪检测空腹血糖(FPG),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Western bloting法检测肝组织p-AMPK、mTOR、TFEB和自噬标记物LC3B-II蛋白表达。结果沙格列汀处理组大鼠体质量、肝质量和肝脏指数分别为(341.53±5.15)g、(11.06±0.49)g和(3.32±0.25)%,显著低于模型组【分别为(353.27±8.74)g、(12.77±0.84)g和(3.67±0.18)%,P<0.05】;FPG、INS和HOMA-IR水平分别为(9.45±0.71)mmol/L、(7.92±0.34)mIU/L和(3.44±0.36),显著低于模型组【分别为(13.97±0.92)mmol/L、(14.57±0.84)mIU/L和(9.03±0.91),P<0.05】;TC、TG、ALT和AST水平分别为(3.79±0.17)mmol/L、(0.81±0.13)mmol/L、(68.76±4.11)IU/L和(54.49±5.21)IU/L,均显著低于模型组【分别为(4.05±0.20)mmol/L、(2.04±0.15)mmol/L、(119.73±3.94)IU/L和(83.27±7.68)IU/L,P<0.05】;肝组织p-AMPK、TFEB和LC3B-II表达分别为(1.13±0.11)、(1.23±0.13)和(1.17±0.12),显著强于模型组【分别为(0.62±0.07)、(0.48±0.05)和(0.37±0.04)】,而mTOR表达为(0.89±0.08),显著弱于模型组【(1.53±0.16),P<0.05】。结论沙格列汀可能通过调控AMPK/mTOR-TFEB自噬信号通路显著降低NAFLD合并T2DM大鼠血糖和血脂水平,改善肝脂肪变。

自噬联合其信号通路在骨骼肌衰老中的研究进展

目的 探寻自噬及其相关信号通路在骨骼肌衰老中的作用及机制,帮助开发新的疾病干预和治疗措施。方法 通过检索、查阅有关“自噬、自噬信号通路、自噬与骨骼肌衰老”等相关文献,比较分析文献之间的异同点,理清相关指标间的关系,为全文的分析明确思路。结果与结论自噬的激活可以介导延缓骨骼肌衰老的干预措施,其过程需要多种信号通路的参与,在维持细胞内平衡方面发挥着核心作用。异常的自噬水平会导致细胞损伤,引起病理连锁反应,并出现肌肉无力和萎缩等症状。自噬的变化及其与其他信号通路的相互作用不仅反映在基因表达上,也反映在蛋白质水平翻译后的修饰上。自噬基因的突变和自噬途径的失调是各种肌肉疾病的主要原因之一。多组学技术的应用将使人们更广泛地了解自噬对骨骼肌衰老的影响,更深入地了解自噬对疾病发病机制的影响。

PI3K自噬信号通路对缺血性脑卒中复发影响的巢式病例对照研究

目的:观察探讨神经元磷脂酰肌醇3蛋白激酶(PI3K)自噬信号通路对缺血性脑卒中复发机制的影响。方法:应用巢式病例对照研究方法,使用Western Blot检测复发组与匹配对照组患者血清中PI3K自噬信号通路相关蛋白PI3K/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)等的表达情况。结果:复发组mTOR在入组时点和复发时点间比较显著升高(P<0.05)。复发组与未复发组入组时比较LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著升高(P<0.05)。结论:PI3K自噬信号通路的激活对于缺血性脑卒中患者的复发具有重要意义。

急性胰腺炎中自噬及其相关信号通路的研究进展

近年来,随着人们生活方式的改变及诊疗水平的提高,急性胰腺炎(AP)的发病率及死亡率逐年上升。然而,AP的发病机制复杂。自噬作为维持细胞稳态重要机制之一,被发现与AP的发生发展密切相关,尤其是胰腺腺泡细胞内的自噬激活及自噬受损被认为是AP发生的早期重要事件之一,这一过程涉及多种复杂自噬相关信号通路的调控,包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白相关信号通路、活性氧类信号通路及核因子κB信号通路等。因此,深入研究自噬相关信号通路的具体调控机制及其相互交联作用,有望为进一步阐明AP的发病机制提供新思路,并可能为AP的预防和诊治提供新方法。

电针“足三里”对功能性消化不良大鼠胃排空及自噬信号通路的影响

目的:观察电针"足三里"对功能性消化不良(FD)大鼠胃排空、自噬标记物微管相关蛋白1轻链3(LC3)及自噬信号通路分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的影响,探讨电针改善FD胃肠动力障碍的机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组,每组8只。采用多因素应激干预法建立FD模型。电针组电针双侧"足三里"穴,每日1次,连续7d;抑制剂组大鼠予以Compound C腹腔注射(20mg/kg),每日1次,连续7d;电针+抑制剂组大鼠予以Compound C腹腔注射和电针干预。检测各组大鼠胃内残留率、小肠推进率;Western blot法检测胃窦组织酪氨酸激酶受体(c-kit)、LC3-Ⅱ/Ⅰ、自噬基因Beclin 1、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化自噬相关蛋白1(p-ULK1)的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠胃内残留率升高,小肠推进率降低(P<0.01),胃窦中的c-kit表达明显降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1、p-AMPK、p-ULK1表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组大鼠胃内残留率降低,小肠推进率升高(P<0.05,P<0.01),胃窦中的c-kit表达明显升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1、p-AMPK、p-ULK1表达明显降低(P<0.01);与抑制剂组比较,电针组、电针+抑制剂组大鼠胃窦中的c-kit表达均明显升高(P<0.05,P<0.01),LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1表达明显降低(P<0.05),p-AMPK、p-ULK1蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:电针"足三里"能够改善FD大鼠胃肠动力障碍,其作用机制可能是通过调控AMPK/ULK1信号通路进而抑制Cajal间质细胞过度自噬水平。

自噬相关基因mTOR信号通路在系统性红斑狼疮发病机制中的作用

目的自噬相关基因mTOR信号通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的机制研究较少。文中旨在探讨自噬相关基因mTOR信号通路在SLE发病机制中的作用。方法选择2018年2月至2019年3月海南医学院第二附属医院风湿免疫科72例SLE患者(SLE组),另选取67例同期健康体检者为对照组。采用免疫印迹技术测定ENA抗体谱,包括:抗SSA、抗SSB、抗Sm、抗nRNP抗体、ds-DNA抗体等。采用IMMAGE蛋白分析仪测定IgG、IgA、IgM及补体C3、C4。采用实时荧光PCR技术测定自噬相关基因mTOR信号通路,分析2组自噬相关基因mTOR信号通路(PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA)与体液免疫水平的相关性。结果SLE组IgG、IgA、IgM水平明显高于对照组(P<0.05);补体C3、C4水平明显低于对照组(P<0.05)。SLE组患者PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA表达水平(0.52±0.06、0.61±0.08、0.48±0.05)明显低于对照组(1.00±0.09、0.89±0.07、0.95±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。SLE组PI3K、Akt、mTOR信号与IgG、IgA、IgM水平,及抗ds-DNA、SSA、SSB、Sm、nRNP抗体呈负相关(P<0.05);与补体C3、C4水平呈正相关(P<0.05)。结论SLE患者自噬相关基因mTOR信号通路呈抑制状态,其与免疫球蛋白和补体水平紧密相关。因此,检测自噬相关基因mTOR信号通路将有助于评估SLE患者病情状态。

妊娠期糖尿病并发巨大儿产妇胎盘质量、胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路变化

目的:分析妊娠期糖尿病(GDM)并发巨大儿产妇胎盘组织超微结构及自噬相关信号通路变化。方法:收集2018年10月-2021年2月本院诊治的GDM并发巨大儿患者98例(观察组),产前检查为单纯GDM患者98例(对照组),健康产妇98例(健康组)胎盘组织,测定胎盘质量、胎盘容积、胎盘组织超微结构变化及AMPKαRNA表达量,分析胎盘组织超微结构改变情况与AMPKαRNA表达量关系。结果:观察组、对照组、健康组胎盘质量(784.29±12.01g、641.57±12.09g、542.58±12.06g)、胎盘组织超微结构改变率(66.3%、29.6%、2.1%)依次降低,AMPKαRNA表达量(0.31±0.02、0.41±0.08、0.49±0.03)依次升高(均P<0.05),胎盘容积各组无差异(P>0.05)。胎盘质量、胎盘组织超微结构改变率与AMPKαRNA表达量呈负相关(均P<0.05)。结论:GDM并发巨大儿产妇胎盘质量高、胎盘组织超微结构改变异常,自噬相关信号通路减少,这些改变可能影响胎盘的供氧和供血功能。

MAP4K3-mTOR信号在甘草查而酮A诱导的鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用研究

目的:探索MAP4K3-mTOR信号级联在甘草查而酮A诱导的人口腔鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用。方法:分别采用0、25、50μmol/L甘草查尔酮A刺激人口腔鳞癌SCC-25系细胞,并于刺激后0、6及24h收集细胞,采用Western blot检测MAP4K3、AKT、mTOR通路分子,细胞自噬标识分子LC3-II、beclin1,以及细胞凋亡标记分子caspase-3、caspase-9及bcl-2等的蛋白表达水平,采用Annexin V-PI染色检测细胞凋亡状况。结果:甘草查尔酮A可剂量及时间依赖性地降低SCC-25细胞MAP4K3、p-mTOR及p-p70S6蛋白的表达水平,促进其LC3-II、beclin1、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平,并抑制其bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。采用慢病毒过表达MAP4K3后,p-mTOR、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平显著增高,LC3-II、beclin1及bcl-2蛋白表达水平则显著降低(P<0.05)。经甘草查尔酮A刺激后,SCC-25细胞早期凋亡数与晚期凋亡数均较对照组显著增多,该效应可被MAP4K3过表达处理显著增强(P<0.05)。结论:甘草查尔酮A可时间剂量依赖地抑制MAP4K3-mTOR信号级联,并促进人口腔鳞癌细胞的自噬与凋亡,当过表达MAP4K3活化mTOR信号级联后,鳞癌细胞自噬活动受到抑制,但其凋亡活动则显著增强。

TGF-β调控自噬活性研究进展

自噬是细胞成分更新、发育、分化的重要调控机制,对维持蛋白代谢平衡及细胞内环境稳定具有重要意义。TGF-β是一种具有多种功能的多肽生长因子,可促进细胞的增殖与分化,细胞的粘附、迁移和凋亡,参与了自噬活性的调控。

柴桂解郁开心方对脑卒中后抑郁大鼠血清炎症因子及海马自噬相关蛋白的影响

目的探讨柴桂解郁开心方对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠血清炎症因子的影响及调控海马自噬信号通路抗PSD的作用机制。方法将60只SD大鼠分为正常组(Normal组)、脑卒中后抑郁模型组(PSD组)、柴桂解郁开心方低剂量组(CGJYL组)、柴桂解郁开心方高剂量组(CGJYH组)、阳性药氟西汀组(Fluoxetine组)。采用大脑中动脉线栓法(MCAO)联合慢性不可预见性温和刺激(CUMS)+单笼孤养法制备大鼠PSD模型。检测指标:记录大鼠体重变化;通过神经功能缺损评分、敞箱实验评估大鼠行为学改变;使用酶联免疫吸附试验测定大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用Western印迹法检测大鼠海马区自噬信号通路自噬相关蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链(LC)3的表达。结果与PSD组相比,CGJYL组、CGJYH组大鼠体重明显恢复(P<0.01);神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);敞箱实验得分明显增加(P<0.05,P<0.01);大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α均明显降低(P<0.05,P<0.01);海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平明显降低(P<0.01)。结论柴桂解郁开心方通过改善炎症反应、减轻自噬程度发挥抗PSD作用。

自噬对胰岛β细胞保护作用研究进展

糖尿病的发生与胰岛素分泌异常密切相关。胰岛β细胞数量减少或功能缺陷直接影响胰岛素分泌。自噬是一个高度保守的过程,它能改善炎症、氧化应激和内质网应激等对β细胞功能的损伤,延缓糖尿病的病程。本文将从自噬的定义、自噬相关蛋白和信号调节通路、自噬在维持胰岛β细胞结构和功能中的作用,以及影响胰岛β细胞自噬的主要因素等方面进行综述。

病毒调控细胞自噬信号分子及其通路研究进展

近年来,病毒的复制增殖与细胞自噬两者之间的关系已成为人们研究的焦点,已有大量研究表明两者之间存在密切联系。细胞自噬是机体为抵抗外界干扰,维持正常能量代谢水平的一种发生在真核生物体内的相对保守的过程。而病毒因其不能自主复制增殖,依赖于相关宿主细胞代谢为其提供能量与原材料。研究发现,病原体入侵细胞可以抑制或诱发细胞自噬的发生,而细胞自噬的发生又与细胞内代谢水平密切相关,反过来细胞代谢改变影响病毒的复制增殖。本研究主要从自噬与病毒的相互关系、病毒启动自噬的信号分子、病毒调控自噬的信号通路这三个方面阐述病毒调控细胞自噬信号分子及其通路研究进展,旨在探讨细胞自噬及其调控与病毒增殖的关系,为抗病毒药物、疫苗的研制提供新的思路。

补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织HIF-1α、SDF-1、CXCR-4表达的影响

目的观察补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织内自噬相关蛋白缺氧诱导因子(HIF)-1α、基质细胞衍生因子(SDF)-1、趋化因子受体(CXCR)-4表达的影响。方法72只雄性SD大鼠随机等分为假手术组、脑出血模型组、补阳还五汤组和银杏叶片组。采用Rosenberg法建立脑出血大鼠模型,补阳还五汤26.0 g/(kg·d)灌胃干预,连续给药14 d。Western印迹法检测Beclin-1蛋白的表达,免疫组化法检测HIF-1α、CXCR-4和SDF-1α蛋白的表达,TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与模型组比较,补阳还五汤组脑组织神经细胞凋亡数量明显减少,HIF-1α、Beclin-1蛋白表达减少,SDF-1α、CXCR-4蛋白表达显著增加。结论补阳还五汤能够降低HIF-1α表达,进而通过调控SDF-1α/CXCR4信号传导通路抑制脑出血诱发的神经细胞凋亡。

自噬及中医药调控自噬在治疗和防治疾病中的研究进展

自噬是广泛存在于真核细胞中的生命现象,维持细胞内的稳态及胞内成分的不断更新,在保持细胞正常的生理状态过程中起着至关重要的调节作用。其是一条依赖溶酶体降解的途径,它具有清除细胞内蛋白质聚集体、损伤的细胞器,维持细胞内稳态的作用,同时还参与细胞很多生理和病理过程,尤其与肿瘤和神经退行性疾病的发生发展密切相关。近年来,中药单体通过调控自噬的某些信号通路,影响和抑制肿瘤的发生发展的作用机制日渐明了;此外,中医药在防治老年神经退行性疾病理论知识方面也取得了很多突破;本文介绍了与自噬密切相关的信号通路如雷帕霉素靶向蛋白信号通路（m TOR）,磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号转导通路,活性氧（ROS）信号通路,核转录因子-κB（NF-κB）信号通路,另外还从中药单体调节自噬机制方面,概述中药单体在肿瘤和神经退行性疾病治疗中的应用及其分子机制。诸多研究表明,中药单体通过激活自噬途径,调节自噬活性,在肿瘤治疗和防治老年病如帕金森、阿尔兹海默症、亨廷顿等疾病方面有很好的改善作用,研究中药单体对肿瘤和神经退行性疾病的防治是崭新的思路和方法,以期为中医药研究工作者在探索中医药调控自噬的作用靶点研究中提供基础理论支撑,发现更多的中药及单体化合物通过调节自噬用于治疗肿瘤、神经退行性疾病等多种疾病。

糖尿病肾病足细胞损伤的病理机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)进程中,足细胞损伤与蛋白尿密切相关。足细胞损伤的病理特征主要是指足细胞形态和功能的改变,包括足突融合、足细胞数量和密度减少、足细胞凋亡、足细胞上皮-间充质转分化以及足细胞肥大等。这些病理性损伤受控于肾组织内多条信号调控途径,如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)/自噬通路、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1通路以及Notch通路等。以雷公藤制剂为代表的一些中药提取物,如雷公藤多苷(multiglycoside of Tripterygium wilfordii,GTW)、雷公藤甲素(triptolide,TP)、黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)、黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)以及三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在体内外对DN模型鼠足细胞病变或高糖诱导的足细胞损伤都具有一定的保护作用。国内的初步研究表明,GTW很可能通过调控DN模型鼠肾组织m TORC1信号通路活性而改善足细胞损伤。因此,基于DN足细胞损伤的信号调控途径而探讨中药干预作用的研究是今后的发展方向。

恶性肿瘤恶病质骨骼肌萎缩分子机制研究进展

目的:总结国内外对恶性肿瘤恶病质状态下骨骼肌萎缩的分子机制研究进展。方法:应用PubMed和维普期刊资源整合平台,以"恶性肿瘤、恶病质、骨骼肌萎缩、泛素-蛋白酶体途径和自噬信号通路"作为关键词,检索2002-01-01-2013-12-31相关文献。纳入标准:1)恶性肿瘤;2)恶病质;3)骨骼肌萎缩;4)泛素-蛋白酶体途径;5)自噬信号通路。根据纳入标准符合分析的文献33篇。结果:机体在各种刺激下主要通过UPP和ALP降解骨骼肌细胞,ALP在恶病质状态下活性明显升高,UPP可能在恶性肿瘤恶病质中晚期激活。在饥饿和应激等情况下,UPP和ALP可能主要经Akt/PI3K-/mTOR调控;在恶性肿瘤恶病质状态下,FoxO被抑制,骨骼肌萎缩可能主要与NF-κB和p38 MAPK有关。NF-κB能调控E3s转录,并且在Beclin1的基因序列上有相应结合位点;p38MAPK抑制剂SB202190能使E3s及LC3表达下调。结论:对恶性肿瘤恶病质状态下骨骼肌萎缩调控机制的研究将有助于靶向药物的研发,以期改善恶性肿瘤恶病质患者的预后。