miR-30e-5p调控细胞自噬基因Beclin1在CI-AKI中的作用机制研究

目的 探讨造影剂泛影葡胺诱导的HK-2造影剂致急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)细胞模型中miR-30e-5p和自噬调控基因Beclin1的表达及意义。方法 处于对数生长期的HK-2细胞分为4组,分别加入0 mgI/mL、25 mgI/mL、75 mgI/mL、100 mgI/mL的复方泛影葡胺处理2 h,利用qRT-PCR检测各组细胞中miR-30e-5p的表达水平。构建pmiGLO/Beclin1-3’UTR wt和pmiGLO/Beclin1-3’UTR mut质粒,经脂质体转染HK-2细胞,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-30e-5p与Beclin1基因的靶向关系。构建Beclin1过表达质粒,采用MTT实验验证Beclin1对CI-AKI细胞活性的影响,TEM法检测细胞自噬。结果 HK-2细胞经不同浓度的复方泛影葡胺处理2 h后miR-30e-5p的表达水平均较空白对照组明显升高(P<0.05)。双荧光报告载体实验表明miR-30e-5p可下调自噬相关基因Beclin1的表达。过表达Beclin1和封闭内源性miR-30e-5p均可降低泛影葡胺对HK-2细胞的毒性作用,明显增加CI-AKI细胞的活性,并促进细胞自噬(P<0.05)。结论 miR-30e-5p在CI-AKI细胞中高表达,miR-30e-5p通过调控靶基因Beclin1,增加细胞活性并促进细胞自噬,降低泛影葡胺对HK-2细胞的毒性作用。

微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

背景与目的:有研究表明自噬活性的改变与肿瘤的发生、发展有关。诱导自噬性细胞死亡已经成为杀死肿瘤细胞的新策略。本研究检测微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法:用免疫组化法检测25例良性卵巢肿瘤、25例交界性卵巢肿瘤及75例上皮性卵巢癌组织的LC3和Beclin1表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:良性肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(100%、100%)和交界性卵巢肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(96%、84%)都明显高于上皮性卵巢癌组(57%、57%),且差异具有统计学意义(P均<0.001)。LC3在上皮性卵巢癌中的表达与FIGO分期和肿瘤分化程度相关(P=0.017;0.001)。Beclin1表达与上皮性卵巢癌患者FIGO分期相关(P=0.04)。LC3和Beclin1在卵巢上皮癌中的表达无相关性(P=0.875)。结论:LC3和Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,自噬活性的改变可能与上皮性卵巢癌的发生、发展相关。

自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生。本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况。结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P>0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染后72h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05)。结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡。

自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达及其临床意义

目的探讨自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及与肿瘤发生发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变（CIN，Ⅱ～Ⅲ级）和20例正常宫颈组织中自噬基因Beclin 1的蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中Beclin 1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43．2％（35／81）、34．6％（28／81）、22．2％（18／81），与正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变组相比，Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达显著下调（P=0．011）。宫颈鳞癌中Beclin 1的表达在不同FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型间的差异无统计学意义。但在有无盆腔淋巴结转移、不同肿瘤分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论自噬基因Beckn 1在宫颈鳞癌中蛋白表达下调，并与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移和肿瘤分化程度有关。

自噬基因Beclin1对上皮性卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的观察自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞株SKOV3中过表达对肿瘤细胞在体内、体外生长活性的影响。方法脂质体法将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,流式细胞仪检测转染后肿瘤细胞的凋亡及自噬情况。将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后,接种到裸鼠皮下,观察体内致瘤活性及生长情况;免疫组化检测瘤组织Beclin1蛋白的表达。结果Beclin1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%;pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3的凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。重组质粒pcDNA3.1/Beclin1使SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤时间延长,瘤体体积及质量明显小于空质粒组和空白对照组,抑瘤率为50.27%。结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可抑制SKOV3在体内、体外的增殖,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。

自噬基因Beclin1在细针穿刺乳腺病变中的表达及其与Bcl-2和p53的相关性

目的检测细胞自噬基因Beclin1在细针穿刺乳腺良恶性病变中的表达及其与Bcl-2、p53的关系,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用及其机制。方法采用RT-PCR和免疫组织化学检测乳腺良恶性病变中Beclin1、Bcl-2、p53mRNA及蛋白表达水平。结果 Beclin1 mRNA在乳腺癌中的表达明显低于在乳腺良性病变中的表达(P<0.05),Bcl-2、p53 mRNA在乳腺癌中的表达高于在乳腺良性病变中的表达(P<0.05)。Beclin1蛋白在乳腺癌中的阳性表达率明显低于在乳腺良性病变中的阳性表达率(P<0.05);Bcl-2、p53蛋白在乳腺癌中的阳性表达率明显高于在乳腺良性病变中的阳性表达率(P<0.05);在乳腺癌中Beclin1蛋白表达与Bcl-2和p53蛋白表达之间存在负相关(P<0.05);而Ecl-2和p53蛋白的表达无相关性(P>0.05)。结论 Beclin1在乳腺癌组织中表达下调,而Bcl-2、p53在乳腺癌中均有高表达。Beclinl蛋白与Bcl-2、p53蛋白在乳腺癌组织中的表达存在负相关。

上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的研究自噬基因Begin1及其调控相关信号传导途径磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B（P13K／PKB）与上皮性卵巢癌发生发展之间的关系。方法用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin1、ClassⅠP13K（p110α）、ClassⅡP13K（hvps34）及其下游的磷酸化PKB（p-PKB）的表达水平进行检测。结果Beclin1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高，在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降，在上皮性卵巢癌中的表达最低（P＜0．05）；p110a、P-PKB在交界性卵巢肿瘤组织中开始升高，在上皮性卵巢癌中的表达高于其它3组（P＜0．05）。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达分别高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者（P＜0．05），而p110α及P—PKB的表达则分别降低（P＜0．05）。结论自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下词，对自噬起调控作用的P13K／PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、P—PKB存在表达异常，可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关。

食管鳞状细胞癌组织中自噬基因Beclin 1蛋白的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中Beclin 1蛋白的表达与临床病理因素之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞状细胞癌和其中30例相应的癌旁正常食管上皮组织中Beclin 1蛋白的表达。结果:30例正常食管上皮组织中Beclin 1阳性表达率为100%,高于食管鳞状细胞癌组织的30%(9/30)(χ2=19.050,P<0.001)。50例食管鳞状细胞癌组织中Beclin 1蛋白的表达与淋巴结转移和病理分期有关(χ2分别为13.286,4.836,P均<0.05)。结论:Beclin 1与食管鳞状细胞癌的发生发展有关。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用

目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响。MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低。结论成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡。

自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。

自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及对人乳头状瘤病毒(HPV)16E6、E7感染的影响。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅱ-Ⅲ级和20例正常宫颈组织中自噬基因Bec-lin1的表达,采用PCR扩增法检测宫颈鳞癌组织中HPV16E6、E7的DNA状况。结果宫颈鳞癌组织中Beclin1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43.2%(35/81),34.6%(28/81),22.2%(18/81),分别与正常宫颈组15.0%(3/20)、30.0%(6/20)、55.0%(11/20)和宫颈上皮内瘤样病变组20.0%(4/20)、30.0%(6/20)、50.0%(10/20)相比,Beclin1在宫颈鳞癌中的表达存在显著下调(P=0.009,P=0.033)。HPV16E6、E7在宫颈鳞癌中的阳性率分别为66.7%和58.0%,HPV16E6、E7感染与宫颈鳞癌中Beclin1蛋白的表达无相关性(r=-0.126,P=0.262;r=-0.125,P=0.270)。结论自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中表达下调,其表达对HPV16E6、E7感染无明显影响。

自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响及其与紫杉醇耐药关系实验研究

目的:探究自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响,并分析其与紫杉醇耐药的关系。方法:以人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TXA作为研究对象,构建自噬基因Beclin1真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,并通过试剂盒将其转染至SKOV3细胞中。采用MTT实验测定各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡及自噬情况,同时RT-PCR检测细胞中Beclin1 mRNA表达量,Western blot检测Beclin1、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白水平。给予不同浓度紫杉醇处理,评估各组SKOV3/TXA细胞对紫杉醇耐药性的变化。结果:转染pcDNA3.1-Beclin1后,Beclin1-SKOV3/TXA组细胞Beclin1 mRNA和蛋白表达量明显升高(均P<0.05);细胞增殖能力较pcDNA3.1-SKOV3/TXA组和SKOV3/TXA组均显著降低(均P<0.05),凋亡率和自噬囊泡也明显增加(均P<0.05)。Western blot检测发现,Beclin1过表达后,SKOV3/TXA细胞p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT蛋白表达量比值显著低于pcDNA3.1-SKOV3/TXA组和SKOV3/TXA组(均P<0.05),磷酸化水平降低。2000 ng/ml和2500 ng/ml紫杉醇处理后,Beclin1-SKOV3/TXA组细胞凋亡率均高于其他组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:自噬基因Beclin1过表达可逆转SKOV3/TXA细胞的紫杉醇耐药性,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,诱导细胞自噬、凋亡有关。

自噬基因Beclin1在宫颈癌中的研究进展

自噬是指从粗面内质网无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的大分子物质（如蛋白质、RNA、过量储存的糖原等）,以及一些细胞内源性底物（包括因生理或病理引起衰老、破损的细胞器）等成分形成自噬体后与溶酶体融合成自噬溶酶体,降解所包裹内容物以实现细胞本身代谢和某些细胞器的更新。但自噬过度上调后可引起细胞死亡,即自噬性细胞死亡。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其下调凋亡因子caspase-9效应的研究

构建自噬基因Beclin 1的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,脂质体包裹后体外转染人宫颈癌HeLa细胞株,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响,并检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡情况以及凋亡因子caspase-9 mRNA及蛋白表达的变化。结果表明shRNA真核表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染后细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低,并伴有caspase-9 mRNA及蛋白量的显著下调。因此,Beclin 1不仅与自噬调控通路有关,而且可以调控凋亡的发生,同时参与两种程序性细胞死亡的过程。

自噬基因Beclin 1对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

目的:研究自噬基因Beclin 1对宫颈癌细胞株HeLa顺铂敏感性的影响并探讨可能的机制。方法:将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞。荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测Beclin 1及凋亡因子caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测顺铂对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50),Hoechest染色检测细胞凋亡。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1转染HeLa后,Beclin 1 mRNA和蛋白相对表达增加(P<0.05),caspase-3 mRNA和蛋白相对表达增加(P<0.05),顺铂对HeLa细胞的IC50由1.0μg/ml降至0.5μg/ml,HeLa细胞凋亡指数为(15.33±3.52)%,显著高于pcDNA3.1(+)组和未转染质粒组(P<0.05)。结论:自噬基因Beclin 1可以通过促进细胞凋亡提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性。

Decorin基因过表达对HEK 293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响。方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl转录水平及翻译水平的表达。结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中。Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达。RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-II的翻译水平均显著降低。结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础。

皮肤黑色素瘤中自噬基因Beclin 1和MAP1LC3的表达及意义

目的检测自噬基因Beclin 1和MAP1LC3在皮肤黑色素瘤中的表达,探讨自噬与黑色素瘤的关系。方法采用免疫组化SP法检测85例标本(包括正常表皮、表皮痣、放射性生长阶段的黑色素瘤、垂直生长阶段的黑色素瘤和转移性黑色素瘤)中Beclin 1和MAP1LC3的表达。结果随着肿瘤的进展,瘤细胞胞质中Beclin 1和MAPLC3的表达水平显著下降(P<0.05)。正常表皮、表皮痣、放射性黑色素瘤、垂直性黑色素瘤和转移性黑色素瘤中Beclin 1、MAP1LC3的阳性率分别为100%、85%、58%、49.5%、17%,100%、95%、50%、44.4%、17%(P<0.05)。结论黑色素瘤中Beclin 1和MAP1LC3表达与肿瘤的进展呈负相关,且二者表达与预后因素有关。

自噬基因Beclin 1在SKOV3细胞中的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达后自噬相关信号调控通路PI3K/PKB途径中ClassⅠPI3K(p110α)、p-PKB和ClassⅢPI3K(hvps34)的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬活性的影响.方法将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞;分别用荧光定量RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclin1、p110α、hvps34和p-PKB的表达;在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象,用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况.结果 pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞Beclin1表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞;PcDNA3.1/Beclin1转染后hvps34表达上调,而p110α、p-PKB的表达下调.PcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成.在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加.流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组.Beclin 1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%.结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使ClassⅢPI3K(hvps34)表达上调,ClassⅠPI3K(p110α)及其下游的p-PKB表达下调,诱导肿瘤细胞自噬活性增加,抑制SKOV3在体外的增殖.

自噬基因Beclin 1与肿瘤的关系

自噬基因Beclin 1是近十多年来发现的与自噬相关的一种抑癌基因,主要通过诱导自噬、促进凋亡而抑制肿瘤的发生发展。但也有证据表明其在肿瘤的发展中起着积极的作用。本文就Beclin 1基因与肿瘤,尤其是消化系统肿瘤的关系进行综述。