成纤维细胞的自噬性溶解死亡在增生性瘢痕消退过程中的作用

目的·探索增生性瘢痕消退成熟过程中,成纤维细胞是否发生自噬性溶解死亡。方法·收集上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤科2018年6月—2019年6月烧伤患者16例的瘢痕组织,分为增生组(对照组,8例)和消退组(试验组,8例) 2组。采用透射电镜观察细胞组织内的自噬情况。体外分别培养2组患者的成纤维细胞。建立缺氧模型,分别于12、24、48 h时点收集细胞,采用透射电镜观察成纤维细胞的自噬情况。Calcein/PI荧光染料试剂盒检测活/死细胞的数量。免疫荧光显微镜下观察细胞的自噬和凋亡。流式细胞仪检测细胞凋亡和自噬性溶解死亡的数量。Western blotting观察低氧诱导因子-1 (hypoxia inducible factor 1,HIF-1)、自噬蛋白区域衍生肽beclin-1、微管相关蛋白轻链-3 (microtuble-associated protein light chain 3,LC3)、半胱氨酸蛋白酶-3 (caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9的表达变化。2组间定量资料采用Student’s t检验,多组间定量资料的分析使用One-way ANOVA检验。结果·电镜显示增生性瘢痕中存在自噬小体,退行性瘢痕中存在自噬性溶解死亡。体外培养细胞电镜观察结果与体内细胞的结果一致。死亡细胞在24 h显著增加,在48 h进一步增加。其中,细胞死亡类型主要为自噬性溶解死亡,少量凋亡。这与LC3的高表达有关。结论·增生性瘢痕演变过程中,除了细胞凋亡以外,自噬性溶解死亡可能是引起瘢痕消退成熟的主要方式,其中LC3作用明显。