EGFR和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的分析表皮生长因子受体1(EGFR)和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的意义。方法子宫颈癌患者癌组织标本50例,行全子宫切除术的正常组织标本20例,宫颈上皮内瘤变(CIN)病变组织标本19例,比较3组标本中EGFR和Beclin1的表达阳性情况、宫颈癌临床资料与EGFR和Beclin1表达的关系。结果 EGFR表达阳性率以宫颈癌组最高,其次为CIN组,正常对照组最低(P<0.05),Beclin1的表达阳性率以宫颈癌组最低,其次为CIN组,正常对照组最高(PP<0.05),Beclin1表达阳性率与是否发生淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论 EGFR和Beclin1表达与宫颈癌的发生发展有关,且Beclin1表达与是否发生淋巴结转移密切相关。

胰腺癌患者自噬标记蛋白Beclin-1和P62的表达及其相关性

目的分析不同来源胰腺组织中自噬标记蛋白Beclin-1和P62含量的差异及其相关性。方法选取60例胰腺癌临床确诊患者、60例胰腺炎确诊患者和60例健康居民作为研究对象,应用免疫组织化学法检测胰腺组织中自噬相关蛋白Beclin-1和P62的含量差异,并分析不同病情的胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异,同时对2种标记物进行相关性分析。结果 4组不同来源胰腺组织中Beclin-1蛋白(F=1013. 51,P=0. 00),P62(F=355. 72,P=0. 00)含量的差异具有统计学意义;且两两比较发现,Beclin-1蛋白和P62含量的差异均显著(均有P <0. 05)。不同病情(肿瘤大小、分化程度、病变部位、TNM分期、周围组织侵犯情况)胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异也显著(P均<0. 05);胰腺癌患者病理组织进行免疫组化分析,阳性物质中Beclin-1的平均积分光密度(252130. 47±20147. 33),P62表达强度评分(5. 13±1. 46),两者呈显著相关(Pearson=0. 87,P=0. 00)。结论 Beclin-1和P62与胰腺癌的发生发展密切相关,且Beclin-1和P62呈显著相关性,不同病情胰腺癌患者亦存在差异性表达。

TMEM59的羧基端片段经与ATG5-ATG16L1-LC3B蛋白相互作用促进自噬

目的研究跨膜蛋白59(TMEM59)诱导自噬、TMEM59诱导自噬的部位及探讨TMEM59诱导自噬的相关通路。方法通过细胞转染、免疫共沉淀、免疫荧光等技术明确TMEM59能否诱导自噬及诱导自噬的部位,自噬流抑制剂处理明确TMEM59诱导自噬的相关通路。结果研究证实在Hela细胞中过表达TMEM59和TMEM59的羧基端片段(CTF)增加自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3B)-Ⅱ的水平以及促进自噬流的发生,差异有统计学意义(P<0.05),但过表达TMEM59的氨基端片段(NTF)差异无统计学意义(P>0.05)。过表达TMEM59不会影响自噬激活剂雷帕霉素诱导的LC3B-Ⅱ水平增加,差异无统计学意义(P>0.05),促进因抑制自噬溶酶体融合所导致的LC3B-Ⅱ水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。证实TMEM59、TMEM59-CTF与自噬相关基因蛋白(ATG)5、ATG16L1和LC3B相互作用。结论TMEM59-CTF诱导自噬发生在自噬起始之后和自噬溶酶体形成之前的阶段,与ATG5-ATG16L1-LC3B蛋白相互作用促进自噬。

细胞周期蛋白B1和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义。方法 选取2018年1月—2021年6月在台州市第一人民医院妇科住院的60例宫颈癌患者的标本,采用实时荧光定量PCR(RTPCR)法检测60例宫颈癌组织及60例癌旁组织CCNB1 mRNA和Beclin1 mRNA,采用免疫组织化学(SP)法检测宫颈癌组织及癌旁组织中的CCNB1和Beclin1,用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果 与癌旁组织相比较,宫颈癌组织中CCNB1 mRNA表达水平升高(P<0.05),Beclin1 mRNA表达水平降低(P<0.05)。宫颈癌组织CCNB1阳性率高于癌旁组织(P<0.05),Beclin1阳性率低于癌旁组织(P<0.05)。分化程度越低、有淋巴结转移、TNM分期越高、浸润深度越深的CCNB1表达越高(P<0.05),Beclin1表达越低(P<0.05)。结论 CCNB1在宫颈癌组织中表达上调,Beclin1在宫颈癌组织中表达下调,与宫颈癌的发生发展有关。

重度抑郁症中自噬通路及其关键标志物的研究进展

重度抑郁症(major depressive disorder,MDD)是一种常见且严重的精神障碍,持续的心境低落是其主要的临床特征。MDD的病因复杂且具有高度异质性,目前尚未被完全阐明。抗抑郁药物是MDD主要的治疗方式之一,目前仍存在起效慢、治愈率低、安全性有待提高、患者依从性不足等问题,也一定程度上也反映了人们对MDD发病机制认识的不足。自噬(autophagy)是一种重要的维持稳态的细胞降解机制,与泛素-蛋白酶体系统一起维持细胞正常的新陈代谢。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是细胞自噬的重要调控因子。当细胞处于不良条件时,可以通过mTOR依赖性自噬通路或mTOR非依赖性自噬通路激活自噬。监测自噬水平的常用指标包括微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、Bcl-2相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein 1,Beclin-1)和p62。近些年来,越来越多的研究提示,自噬信号通路异常可能参与了抑郁症的发展,抗抑郁治疗可能影响自噬,因此调控自噬信号通路可能是抑郁症有希望的治疗靶点。未来应加强中枢神经系统自噬信号通路的研究,为抑郁症与抗抑郁药物的机制研究提供更多可靠的证据。该文就mTOR依赖性自噬通路及mTOR非依赖性自噬通路与常见自噬标志物在抑郁症中的研究进展做一综述。

基于WIPI1蛋白自噬检测方法及其在PCV2感染细胞自噬研究中的应用

多种病毒感染能够诱导细胞自噬,WIPI1蛋白是一种新发现的细胞自噬标记分子。为在PK-15细胞中建立基于红色荧光蛋白(Ds Red)与WIPI1融合表达蛋白的自噬检测方法,本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)感染为模式病毒,以药物处理作为阳性对照验证该方法的适用性。采用亚克隆策略构建了表达猪源WIPI1与Ds Red融合蛋白的真核重组表达质粒p Red-WIPI1,western blot检测显示Ds Red-WIPI1融合蛋白能够在PK-15细胞内表达,但不激活自噬标志分子LC3-II形成。然而,激光共聚焦分析显示,PCV2感染或自噬诱导剂Thapsigargin(Tg)及饥饿处理均能够显著促进WIPI1在细胞内形成点状聚集,并且促进Ds Red-WIPI1与EGFP-LC3的共定位。此外,荧光定量PCR结果显示,PCV2感染或Tg处理均能够显著上调wipi1的m RNA水平。本研究在稳定表达EGFP-LC3的PK-15细胞中建立了基于WIPI1蛋白的细胞自噬检测方法,该方法可以用于深入探索相关病毒感染诱导细胞自噬及其机制。

结晶型硫化镍通过自噬途径诱导16HBE细胞恶性转化癌变

镍化合物广泛存在于人类职业环境中,是人类发生肺癌的主要危险因素。我们前期研究已证实金属毒物结晶型硫化镍(NiS)的暴露是发生肺癌的重要病因,但具体的致癌机制仍未明了。本研究利用前期建立的结晶型 NiS 恶性转化人支气管上皮细胞的细胞模型,首次采用激光共聚焦扫描显微镜成像技术,在无损伤状态下,实时观测恶性转化细胞(16HBE-T)和正常细胞(16HBE-N)中自噬体标记蛋白 GFP-LC3 的荧光强度及定位,并利用 Western Blotting 技术检测细胞内自噬信号通路关键效应分子的表达。共聚焦实验结果表明:16HBE-T 细胞与 16HBE-N 细胞相比,GFP-LC3 蛋白的点状聚集明显减少,经测量只有 16HBE-N 细胞的 1/3 左右,表明自噬水平下降;Western Blotting 检测发现:mTOR 激酶活性上升,Beclin 1 表达下降。上述结果证明,结晶型 NiS可通过多个自噬途径参与诱导 16HBE 细胞恶性转化的癌变过程,将为预防和治疗肺癌提供重要信息。

Beclin1、EGFR、cyclinD1在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的研究自噬标记蛋白Beclin1、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达及意义。方法收集2015年3月至2018年2月医院收治的局部晚期宫颈癌80例,术前接受卡铂联合紫杉醇新辅助化疗3个周期,新辅助化疗前后均留取宫颈癌组织标本,并选取行子宫切除的20例患者的正常宫颈上皮组织作为对照组,免疫组化法测定新辅助化疗前后宫颈癌组织Beclin1、EGFR、cyclinD1表达的变化,与正常宫颈上皮组织进行对照,比较不同疗效宫颈癌患者组织Beclin1、EGFR、cyclinD1表达及临床病理资料的差异,多因素Logistic回归分析法筛选宫颈癌新辅助化疗疗效影响因素。结果宫颈癌化疗前后组织Beclin1阳性率低于对照组,EGFR、cyclinD1阳性率高于对照组(P<0.05),化疗后癌组织Beclin1阳性率高于化疗前,EGFR、cyclinD1阳性率低于化疗前(P<0.05);80例患者新辅助化疗3个周期有效55例(68.75%),无效25例(31.25%),有效组癌组织Beclin1阳性率高于无效组,EGFR、cyclinD1阳性率低于无效组(P<0.05);无效组临床分期为Ⅱa1~b1期、组织分化程度为低中分化、伴淋巴结转移所占比例高于有效组(P<0.05);Beclin1、EGFR、cyclinD1、组织分化程度、淋巴结转移均为宫颈癌新辅助化疗疗效影响因素(P<0.05)。结论宫颈癌癌组织EGFR、cyclinD1呈异常高表达,Beclin1呈低表达,新辅助化疗可降低EGFR、cyclinD1阳性率,提升Beclin1阳性率,促成宫颈癌自噬网建立,诱导癌细胞凋亡;Beclin1、EGFR、cyclinD1、组织分化程度、淋巴结转移均为影响宫颈癌新辅助化疗效果的因子。

HAD及非HAD患者中枢神经系统来源的HIV-1 Nef蛋白对U87细胞自噬的影响

目的研究HIV-1 Nef蛋白氨基酸位点变异对其抑制神经细胞自噬的影响,探讨Nef蛋白致中枢神经系统损伤的机制。方法分别扩增和克隆1例HIV相关性痴呆(HIV-associated dementia,HAD)患者(H)及1例非AIDS HAD患者(N)中枢神经系统颞叶(temporal cortex,TC)部位的HIV-1 nef基因,进行序列分析,研究氨基酸位点变异;构建H-TC和N-TC来源的Nef真核表达载体p EGFP-N1-nef,并分别转染U87细胞,观察绿色荧光蛋白并初步判断Nef蛋白表达情况;同时Western blot检测U87细胞Nef蛋白及细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达,分析不同来源的Nef对U87细胞自噬的影响。结果PCR扩增并构建H-TC及N-TC nef基因克隆载体pMD-19T-nef,测序证实为HIV-1B亚型,氨基酸序列分析显示,H-TC与N-TC关键氨基酸位点存在差异;成功构建pEGFP-N1-nef重组质粒,在U87细胞内表达Nef蛋白,转染后48 h Nef蛋白表达量最高;Western blot结果分析表明,LC3-Ⅱ蛋白的表达量在组间的差异有统计学意义(F=11.764,P=0.001),两组细胞中LC3-Ⅱ含量较低,Western blot未能检测到。,空白组与空载体组之间LC3-Ⅱ的表达量差异无统计学意义(P=0.169),H-TC、N-TC及阳性对照CQ组LC3-Ⅱ表达升高,与空白对照或空载体相比,差异具有统计学意义(P=0.017,P=0.039,P=0.031),且H-TC组LC3-Ⅱ的表达量高于N-TC组(P=0.023);H-TC、N-TC及阳性对照CQ组p62蛋白的表达量较空白对照或空载体组有所升高,但组间差异无统计学意义(F=2.049,P=0.163)。结论HAD及非HAD患者中枢神经系统中HIV-1 Nef氨基酸位点存在差异,对U87细胞自噬的影响也因此不同,H-TC来源的Nef诱导自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达的能力更强。

大黄素对CIA大鼠自噬与凋亡基因表达的作用研究

目的通过研究大黄素对自噬与凋亡基因表达的影响,探讨其对RA的作用机理。方法选用60只Wistar大鼠,随机分为6组。除正常组大鼠外,其余5组先建立CIA动物模型20d,后药物干预20d,其中大黄素高、中、低剂量组分别予80,40,20mg·kg^(-1),阳性对照组予地塞米松7.5mg·kg^(-1),40d后取大鼠膝关节滑膜、血清、及脾脏,分析大鼠体重和足跖肿胀度及关节炎评分;脾脏HE染色分析组织形态变化;免疫组化检测滑膜组织中Cat-G、Cat-S及LC3的表达;ELISA检测血清中Cat-G、Cat-S及LC3的含量。结果 (1)造模后大鼠体重显著降低,双后足跖逐渐肿胀,关节炎评分升高,第20天足跖肿胀和评分均达到高峰。给药组体重回升幅度变大,足跖肿胀度和关节炎评分下降,尤其是中剂量组(P<0.05)。(2)大鼠脾脏染色显示,正常组脾脏结构清晰,红白髓分布整齐。模型组红白髓明显增生,结构模糊,肉芽肿形成。给药后红白髓增生减少,脾脏结构清晰度增加,尤其是中剂量组和阳性组。(3)模型组大鼠滑膜组织中Cat-G、Cat-S及LC3表达均显著升高(P<0.05)。给药组表达降低,尤其是中剂量组(P<0.05)。(4)模型组大鼠血清中上述基因含量均显著高于正常组(P<0.05)。给药后含量下降,其中Cat-G和LC3在大黄素高剂量组下降最多,Cat-S在大黄素中剂量组下降多,(P<0.05)。结论大黄素对RA具有治疗作用,其机制可能与抑制细胞凋亡和自噬相关。

磁共振成像联合miR-224 Beclin1表达检测在宫颈癌诊断中的应用价值

目的研究磁共振成像(MRI)联合微小RNA-224(miR-224)、自噬标记蛋白(Beclin1)表达检测在宫颈癌诊断中的应用价值。方法选取2019—2020年在丽水市中心医院就诊的疑似宫颈病变患者120例,以病理组织检查为金标准,宫颈癌98例,宫颈良性病变22例。所有研究对象先进行MRI检查,再检测miR-224、Beclin1表达。结果MRI诊断宫颈癌灵敏度、特异度、准确度分别为89.80%(88/98)、81.82%(18/22)、88.33%(106/120)。与宫颈良性病变相比,宫颈癌miR-224表达升高,Beclin1阳性表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者miR-224表达高于高中分化、Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者,低分化、Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者Beclin1阳性表达低于高中分化、Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC分析MRI、miR-224、Beclin1及三项联合诊断宫颈癌曲线下面积(AUC)分别为0.788(95%CI:0.675~0.902,P=0.000)、0.780(95%CI:0.664~0.896,P=0.000)、0.703(95%CI:0.554~0.851,P=0.008)、0.790(95%CI:0.678~0.902,P=0.000)。结论MRI联合miR-224、Beclin1表达检测能提高宫颈癌的诊断价值。